課件：實驗一-實驗室基本訓(xùn)練

1、動物生物化學(xué)實驗主講：伍紅西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院動 物 生 物 化 學(xué) 實 驗實驗一 實驗室基本知識實驗二 氨基酸紙層析實驗三 血清蛋白含量測定實驗四 影響酶活性的因素實驗五 脂質(zhì)的薄層層析實驗六 凝膠層析法基本練習(xí)實驗七 血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳實驗八 動物組織中DNA提取實驗一 實驗室基本知識一、實驗室規(guī)則二、實驗室常用量器及儀器設(shè)備介紹三、試劑配制四、實驗誤差與克服五、實驗室安全知識簡介六、實驗記錄及實驗報告一、實驗室規(guī)則1. 實驗前認(rèn)真預(yù)習(xí)實驗內(nèi)容。2. 實驗時遵守課堂紀(jì)律，不大聲喧嘩。3. 嚴(yán)格按操作規(guī)程操作。4. 愛護實驗室各種器具及儀器設(shè)備，如有損壞，及時報告，并按規(guī)定賠

2、償。5. 公用試劑用后放回原處，瓶蓋隨開隨蓋防止污染。6. 注意安全，不得將易燃試劑接近火焰，嚴(yán)禁用口吸取有毒藥品和試劑，凡發(fā)生煙霧，有毒氣體和不良?xì)馕兜膶嶒瀾?yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進行。7. 保持實驗室整潔，每次實驗畢，由三個組同學(xué)打掃及整理實驗室。二、實驗室常用量器及儀器設(shè)備介紹1. 常用量器（1）容量瓶 凡要求準(zhǔn)確（0.01)配制一定濃度的溶液時，必須使用容量瓶。以容量瓶配制試劑時的操作（2）刻度吸管（3）移液器2.常用儀器設(shè)備（1）離心機 承載離心管，并以離心力使管內(nèi)物質(zhì)沉降進而造成固體和液體分離的機具。高速冷凍離心機離心技術(shù)簡介 離心技術(shù)在生物科學(xué)，特別是在生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究領(lǐng)域，已得到十

3、分廣泛的應(yīng)用，每個生物化學(xué)和分子生物學(xué)實驗室都要裝備多種型式的離心機。 離心技術(shù)主要用于各種生物樣品的分離和制備。 生物樣品懸浮液在高速旋轉(zhuǎn)下，由于巨大的離心力作用，使懸浮的微小顆粒（細(xì)胞器、生物大分子的沉淀等）以一定的速度沉降，從而與溶液得以分離，而沉降速度取決于顆粒的質(zhì)量、大小和密度。 離心力：當(dāng)一個粒子（生物大分子或細(xì)胞器）在高速旋轉(zhuǎn)下受到離心力作用時，此離心力“F”由下式定義，即： F = ma =m.V2/r= m2 r a 粒子旋轉(zhuǎn)的加速度， m 沉降粒子的有效質(zhì)量，粒子旋轉(zhuǎn)的角速度， r粒子的旋轉(zhuǎn)半徑( cm )。離心的基本原理 相對離心力： 離心力常用地球引力的倍數(shù)來表示，因而

4、稱為相對離心力 “ RCF ”。或者用數(shù)字乘“g”來表示。 相對離心力是指在離心場中，作用于顆粒的離心力相當(dāng)于地球重力的倍數(shù)，單位是重力加速度“g” （980cm/sec2）， 相對離心力RCF可用下式計算： RCF = 1.119105(rpm)2 r ( rpm revolutions per minute每分鐘轉(zhuǎn)數(shù)，r/min ) 由上式可見，只要給出旋轉(zhuǎn)半徑r，則RCF和rpm之間可以相互換算。但是由于轉(zhuǎn)頭的形狀及結(jié)構(gòu)的差異，使每臺離心機的離心管，從管口至管底的各點與旋轉(zhuǎn)軸之間的距離是不一樣的，所以在計算時規(guī)定旋轉(zhuǎn)半徑均用平均半徑“ra v”代替： ra v=( r minrmax)

5、/ 2 Rmin旋轉(zhuǎn)軸RaveRmaxr的測量 離心機可分為工業(yè)用離心機和實驗用離心機 實驗用離心機又分為： 制備型離心機：主要用于分離各種生物材料，每次分離的樣品容量比較大. 分析型離心機：一般都帶有光學(xué)系統(tǒng)，主要用于研究純的生物大分子和顆粒的理化性質(zhì)，依據(jù)待測物質(zhì)在離心場中的行為（用離心機中的光學(xué)系統(tǒng)連續(xù)監(jiān)測），能推斷物質(zhì)的純度、形狀和分子量等。 分析性離心機都是超速離心機。 工業(yè)離心機：主要用于工業(yè)上的分離。離心機的主要類型 制備性離心機可分為三類：普通離心機：最大轉(zhuǎn)速6000 rpm左右，最大相對離心力近6000g，容量為幾十毫升至幾升， 高速冷凍離心機：最大轉(zhuǎn)速為2000025000

6、rpm（r/min），最大相對離心力為89000g，最大容量可達(dá)3升， 超速離心機：轉(zhuǎn)速可達(dá)5000080000 rpm，相對離心力最大可達(dá)510000g，最著名的生產(chǎn)廠商有美國的貝克曼公司和日本的日立公司等，離心容量由幾十毫升至2升超速離心機（2）分光光度計 分光光度計是現(xiàn)代生化及分子生物學(xué)實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。 基本原理 溶液中的物質(zhì)在光的照射下，產(chǎn)生了對光吸收的效應(yīng)，物質(zhì)對光的吸收是具有選擇性的。各種不同的物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜，因此當(dāng)某單色光通過溶液時，其能量就會被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系，也即符合比色原理蘭伯特

7、-比耳定律（3）電熱恒溫水浴鍋三、試劑配制1.確定所配試劑濃度重量濃度：單位體積中所含溶質(zhì)的重量。表示為克/升（g/L），或毫克/升（mg/L），微克/升（ug/L）百分濃度：%，需注明W/W, W/V, V/V摩爾濃度：每升溶液中所含溶質(zhì)的摩爾數(shù)。mol/L, mmol/L, umol/L2. 準(zhǔn)確稱量、量取3. 溶解4. 定容四、實驗誤差與克服 由于外界條件的影響、儀器的優(yōu)劣以及感覺器官的限制，實驗測得的數(shù)據(jù)只能達(dá)到一定的準(zhǔn)確度。 實驗測得的數(shù)據(jù)與真實值之間的差就是實驗誤差 實驗誤差一般可分為系統(tǒng)誤差、偶然誤差和過失誤差。 在相同條件下多次測量同一物理量時，測量誤差的大小和符號都不變；在改

8、變測量條件時，它又按照某一確定規(guī)律而變化的測量誤差稱為系統(tǒng)誤差。 系統(tǒng)誤差的特點： 和偶然誤差不同，它不具有抵償性，即在相同條件下重復(fù)多次測量，系統(tǒng)誤差無法相互抵消。 產(chǎn)生系統(tǒng)誤差的諸因素是可以被發(fā)現(xiàn)和加以克服的。系統(tǒng)誤差消除產(chǎn)生系統(tǒng)誤差的根源 從產(chǎn)生誤差的根源上消除系統(tǒng)誤差是最根本的方法。通過對測量過程中可能產(chǎn)生系統(tǒng)誤差的各種環(huán)節(jié)作仔細(xì)分析，找出原因并在測量前加以消除。 如果系統(tǒng)誤差是由外界條件變化引起的，應(yīng)在外界條件比較穩(wěn)定時進行測量。系統(tǒng)誤差的減小和消除采用修正法消除系統(tǒng)誤差 預(yù)先將儀器的系統(tǒng)誤差檢定出來或計算出來，做出誤差表或誤差曲線，然后取與誤差數(shù)值大小相同、符號相反的值作為修正值，

9、進行誤差修正。 即：x真=x測+x修 如天平砝碼不準(zhǔn)，應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)砝碼進行校核，確定每個砝碼的修正值。在稱量時就應(yīng)加上相應(yīng)砝碼的修正值，容量瓶、滴定管、移液管等容量儀器均可用水重量法求出各自的修正值。 對消法消除系統(tǒng)誤差 進行兩次測量，使兩次讀數(shù)時出現(xiàn)的系統(tǒng)誤差大小相等、符號相反。兩次測量值的平均值作為測量結(jié)果，以消除系統(tǒng)誤差。 例如，由于儀器靈敏度的限制，測量儀器的旋鈕由右邊調(diào)近測量值與由左邊調(diào)近測量值的結(jié)果往往不同。這時，可取兩個讀數(shù)的平均值作為測量值。 系統(tǒng)誤差的消除很難找到一個普遍有效的方法。這是因為造成系統(tǒng)誤差的各個因素，沒有內(nèi)在的聯(lián)系。要克服它們，只能具體問題具體分析。 在實驗時即使

10、采用了最完善的儀器、選擇了最恰當(dāng)?shù)姆椒?、?jīng)過了十分精細(xì)的觀測，所測得的數(shù)據(jù)也不可能每次重復(fù)，這樣的誤差即為偶然誤差偶然誤差偶然誤差的克服 偶然誤差是由于相互制約、相互作用的一些偶然因素所造成的，它有時大、有時小、有時正、有時負(fù)，方向不一定，大小和符號一般服從正態(tài)分布規(guī)律。偶然誤差可采取多次測量，取平均值的辦法來消除，而且測量次數(shù)越多（在沒有系統(tǒng)誤差存在的情況下），平均值就接近于真值。五、實驗室安全知識簡介（一）實驗室安全1. 安全用電2. 水火無情3. 嚴(yán)防中毒4. 避免傷害5. 生物危害6. 射線傷害（二）實驗室滅火1. 切斷室內(nèi)所有電源，火源2. 報警3. 導(dǎo)線著火時，切斷電源或使用四氯化碳滅火器，不能用水及二氧化碳滅火器，以免觸電4. 可燃性液體著火時，可用濕布或沙土覆蓋，隔絕空氣滅火。不能用水滅火，這樣會擴大燃燒面積。5. 金屬鈉著火時可用砂子覆蓋6. 衣服著火切忌奔走，應(yīng)臥地滾動滅火。（三）實驗室急救1. 觸電2. 玻璃割傷及其他機械損傷3. 燙傷4. 化學(xué)試劑灼傷5. 汞中毒六、實驗記錄及實驗報告 每次實驗要做到課前認(rèn)真預(yù)習(xí)，實驗操作中仔細(xì)觀察并如實記錄實驗現(xiàn)象與數(shù)據(jù)，課后及時完成實驗報