液質(zhì)AB3500操作規(guī)程

1、開關(guān)機A A 、開機.打開UPS電源，打開氮氣發(fā)生器（氣瓶），確認Curtain gas的輸入壓力為 0.4MPa, gas1/2 為 0.7MPa, exhuast為 0.4MPa。.打開機械泵電源開關(guān)（5500 系列直接打開質(zhì)譜主機電源， 儀器自動啟動機械泵）.等機械泵工作至少30min.打開質(zhì)譜主機電源開關(guān).過夜抽真空B B 、關(guān)機.停止輸液：關(guān)停針泵或液相泵，或斷開輸液管線（一般質(zhì)譜主機Standby后液相系統(tǒng)也自動待機，輸液泵自動關(guān)停，但建議操作人員再次確認，必須保證沒有任何液體再泵入質(zhì)譜）.使儀器待機，并滅活配置.關(guān)閉質(zhì)譜儀主機電源開關(guān)（5500 系列只需按下電源開關(guān)旁的 VENT

2、按鍵排放真空）.機械泵繼續(xù)工作至少30min.關(guān)閉機械泵上的電源開關(guān).關(guān)閉氣體發(fā)生器或氣瓶二.儀器校準與調(diào)諧本節(jié)包括如何在 Analyst軟件中進行手動質(zhì)量校準，一般儀器在開 關(guān)機后才需要做調(diào)諧或每個季度例行調(diào)諧。1 1、打開analyst軟件，雙擊 Hardware Configure,在硬件配置Hardware Configure菜單下單擊 massSpec Only （只連質(zhì)譜機）， 單 擊Active profile激活儀器。硬件配置表中 massSpecOnly出現(xiàn)綠勾后, 表示質(zhì)譜儀主機與計算機通訊正常，關(guān)閉 Hardware ConfigurationEditor。3、雙擊左邊工

3、具菜單Navigation Bar中的 Manual Tuning, 打開一個空白質(zhì)譜參數(shù)設置及運行窗口，進入手動調(diào)諧模式:陽f k所w/i 通布.戶kin.uhihM 64、在 project工具條中選擇installation-開頭的項目文件夾 5、點擊 File openA Hie Edit Visew Acquire Tools Exglcre Window Script kelpTune 3rd Calibrate Mode ,Acquire.StartR 3 mp PaiameterSource.Ga5 Comocurwl Resq lution Detector6、選擇 Acqu

4、isition Method打開四極桿校準方法文件列表（如Q1PosPPG.dam Q1NegPPG.dam Q3PosPPG.damQ3NegPPG.dam 方法文件，文件名有可能不同）。根據(jù)要校準的目標（Q1正離子、Q1負離子、Q3正離子、Q3負離子） 選擇相應的方法打開。且 R eserp in eMS M S. d am API5000LITNeifPG.dmLITPo?PPG.damQINegPPG.damQlFosPPG.damAPI150EXAPI 2000API2000API3200API 400DKBrowse.Cencd-mLJuiNegKru.dam QIPoiPPG.d

5、am QSKJ&gPPG. dam SPosPPG dam7、該方法會出現(xiàn)在質(zhì)譜參數(shù)設置及運行窗口：8、用針泵進質(zhì)量校準溶液，調(diào)離子源噴霧針位置到 5mm處。對于不同儀器、測定極性，要用不同的PPG校準溶液，針泵流速10ul/min9、采集PPG標準品質(zhì)譜數(shù)據(jù)：在質(zhì)譜參數(shù)設置及運行窗口中點擊Start ,數(shù)據(jù)采集時在窗口下部出現(xiàn)兩個實時數(shù)據(jù)圖：左邊TIC（總離子流圖），右邊質(zhì)譜圖。待采集完成后，點擊resolution,再點擊advanced,彈出分辨率窗口，再在右邊質(zhì)譜圖中按鼠標右鍵出現(xiàn)一菜單，選菜單中Open file：f r i10、單擊其中任一個 PPG質(zhì)譜峰的圖（此圖邊框變藍），然后

6、在在工Q!I 3 .3 I具條下點擊Calibrate from spectrum 按 鈕J + +坐指人心N11、在出現(xiàn)的 Mass Calibration Options 窗口中，從 Standard 下拉菜單選擇合適的標準品類型：PPGs Posf離子）或PPGs Neg寬離子）；然后點擊12、儀器校準結(jié)果圖中有三欄：上欄顯示此次校準與理論值的質(zhì)量偏差（mass shift ）,中欄顯示所有PPG校準峰的半峰寬（分辨率），下欄顯示此 次校準與上次校準所有 PPG校準點峰強度變化的百分比。A A、手動調(diào)整分辨率目標是讓每個數(shù)據(jù)點都應該落在兩條虛線之間，如果某些PPG峰寬超出分辨率范圍，應進

7、行手動調(diào)整。調(diào)整Ofset值會影響分辨率，以中心實線為基準，半峰寬偏大的調(diào)大offset值（考慮正負），半峰寬偏小的調(diào)小 offset值（考慮正負），對Ofset值調(diào)整幅度為每次0.003,改變offset值以后按 Apply鈕。關(guān)閉當前其他窗口回到采集窗口，重新點擊 start采集數(shù)據(jù)（在開始 采數(shù)據(jù)時按Yes確認要保存這些修改），重復9-12步直到所有點的分辨 率 合 乎 分 辨 率 范 圍。B、質(zhì)量校正當offset值設定合適，所有 PPG離子的分辨率在倆虛線范圍內(nèi)后，進行最后的質(zhì)量校準。再采集一次PPGt據(jù)（重復9到11步）；在MassCalibration Report 按 Upda

8、te mass calibration 按鈕進行更新，軟件系統(tǒng)會提示是否用新的校準曲線替換已存在的校準曲線，當出現(xiàn)提示時，回答“YES三.化合物參數(shù)優(yōu)化 本節(jié)描述如何用針泵連續(xù)進樣(10ul/min)，在Manual Tuning窗口下優(yōu)化化合物參數(shù)。1 1、找母離子：Q1 MS全掃描A、選擇你的 project;雙擊 Navigation Bar 下的 Manual- - Tuning; 從Scan Type下拉菜單中選擇：Q1 Scan (Q1)選擇極性：Positive(正離子)、Negative (負離子)；勾選Center/with選項；設置采集時間 Duration: 5min;在

9、表格中 Center (Da)欄填入待優(yōu)化化合物的分子 量，With(Da)欄填6, Time (sec)填1;左側(cè) Source/Gas項用以下推薦值：CUR 10 IS:5500（E離子）或-4500 （負離子），TEM GS1 15 GS20, ihe on; Compound項用以下推薦值：DP 60, EP 10或默認值;.l Z*. n4、，川 UIWOULmMIX廿IMMfMlAdwMfeM加注* d- - H = T1 足daBJr.T#i 7 * Ta*審i加油MA,.加kViuCidU T-rtlfNiriUiin|4uFM0M-1 位弋G I Ba-mI Om.2 田M.

10、一金41內(nèi)SUE(7J?* *CfiRMTiSrffe LWilW?W 喊 L QiWniJ i v im n if B、運行車t泵（10ul/min）點擊start采集數(shù)據(jù)，待左側(cè)窗口 TIC序號穩(wěn)定后再繼續(xù)采 集1min,點擊stop,在TIC圖上按住鼠標左鍵托選最后1min譜圖, 再雙擊選中的譜 圖，在下方彈出窗口記錄目標化合物峰的中心對應的橫坐標分子量作為該化合物的準 確分子量2、找子離子： Product Ion Scan(MS2)A、在 當前方法文件的 Scan Typ并選擇 Product Ion Scan (MS2);去除 Center/with 選項；在Product of欄

11、填入上一步找到的母離子的準確分子量；在表格中 start(Da)欄填 50,stop(DaM填入質(zhì)量大于母離子分子量即可，Time (sec)填1;檢查Source/Gas項是否與 Q1掃描時相同(CAD默認值即可)；Compound項設定DP 60, EP 10或默認值，CE 5 CXP 1誠默認值；-，IB .餐二借B、點擊start采集數(shù)據(jù)，手動調(diào)節(jié)CE值（每次增加5）,直到右側(cè)質(zhì)譜圖中母離子的信號約只有最強碎片離子信號三分之一左右，再保持繼續(xù)采集1min,點擊 stop,在左側(cè)TIC圖上按住鼠標左鍵托選最后1min譜圖，再雙擊選中的譜圖，在下方平均譜圖中記錄兩個最強的碎片離子分子量。3

12、、優(yōu)化離子對參數(shù)：MRMA、在 當前方法文件的Scan TypeF選擇MRM;在表格中Q1欄填母離子分子量，Q3（Da胖子離子分子量，Time （msec）填50, ID欄填化合物名稱（信號強的離子對名稱后空格加 1,信號弱的為2）,每個離子對填一行；檢查Source/Gas項是否與Q1掃描時相同（CAD默認值即可）;B、點擊 Edit Ramp鈕，出現(xiàn)以下窗口，在parameter下拉菜單里選擇DP用默認值，點擊OK.C、點擊start開始優(yōu)化，在右側(cè)質(zhì)譜圖上記錄峰輪廓最高的位置對應的橫坐標的DP值，填入Compound的DP項。D、點擊Edit Ramp鈕，在parameter下拉菜單里選

13、擇 CE用默認值, 點擊OK,點擊start開始優(yōu)化，采集結(jié)束后在右側(cè)質(zhì)譜圖上按鼠標右 鍵并選擇相應的離子對，記錄其峰輪廓最高的位置對應的橫坐標的CE值，再在上方表格內(nèi)點擊鼠標右鍵選擇 CE單擊，表格中則會顯示 不同離子對的CE值一欄，填入剛才記錄的各離子對的最優(yōu) CE最后點 擊菜單File save即可保持該化合物參數(shù)，填入方法名稱即可.Save Acquiisitron MethodSaveD:Analyst DatafrojectsestAtquisitiori Metiiodspest mix.dam pest mixdam 2 dam test, dam test2,dam teEt

14、Ture.dsT tiri/v-test, damMew acquisition metfiodJsiTiSave as type: Mquisitior metiiCMi.dam)5a veCancel-四、建立LC- MS方法（以島津液相為例）1、開HPLC電源，將HPLC系統(tǒng)接上柱子，將出口管線與離子源連 好。調(diào)離子源噴霧針位置到2mm處，雙擊Hardware Configure,在硬件配置菜單下單擊4000+LC （液相與質(zhì)譜聯(lián)用），單擊Active profile激活儀器。2、選擇彳的 Project;雙擊 Build acquisition method,彈出方法模板。在模板左側(cè)

15、點擊 acquisition method ,模板右邊顯示對應的參數(shù)，確認synchronization mode 選擇LC Sync用fflt TJziZ*r*g awr T-ntti,Ulr*卻* lMltabAdVlWEi畜 LtawLa-mni LHAmb9 3#WiMU、Gm-U“ Hon口5 I Plan iDjquinl3、點擊方法模板左側(cè)的MRM,在模板右側(cè)Scan TypeT選擇MRM;在polarity下選擇化合物極性：Positive（離子）、Negative （負離子）； Duration處填寫與液相分離相同的時間；在表格中Q1欄填母離子分子量，Q3（Da胖子離子分子量

16、，Time （msec） 填50, ID欄填化合物名稱（信號強的離子對名稱后空格加1,信號弱 的為2）,在表格中右鍵分別點擊 DP、ER CB CXP填入之前優(yōu)化 好的DP、CB最后點擊Edit parameter設置離子源參數(shù)：Source/Gas 項用以下推薦值：CUR 25 IS:5500（E離子）或-4500 （負離子），TEM550, GS1 5 GS255, ihe on;4、點擊模板左邊的shimadzu LC system在右邊的pumps欄下，設置 pumping mode 為 binary flow, total流速0.2-0.5,泵系統(tǒng)最大壓力；在time program

17、欄下設置液相梯度。最后點擊保存按鈕保存此方法并關(guān)閉方法窗口Tlffi事1 Jiri r*riMtdlv停 3 rtCMUI bwvni Uphnufci- f|hi * eI-I MHh-i f Mta Sfiw 1IJM nr 電 由r1 3GUBKI r(4i S-UIhfJ MWaMIe M EtFfhBMrtv 4:Ii)ic1fi區(qū)ftJe肌1 - IB 3卻grti4電 b0#MMttr_* EdiJ A，1. ：/ v-a-wwrd bd. k*LJc UJhKJtta U|、Qb4un Hart 峨 0GMHV1 Ahr4El五、建立采樣列表1、雙擊 Build acquisi

18、tion batch,在右邊窗口 sample項內(nèi)點擊 add set, 再點擊addsample,在彈出的窗口內(nèi)的number （進樣樣品數(shù)）處填入需要進樣的樣品個數(shù)，點ok-ES - n ff I亡E回左營 I因11 C 二之，UW r，、小M*八1人*姑U 0、TLwww Vf勺Ml 金 Huth.Cfv- ZnbiMHi Zwb審 MshSmww .反 rtaw T4KlaPnifiS hw QwvifwNQ HUaCkjn2l.l“汩.%；*/- E .口在 * kMW Met. pes- Fl2、在加入的樣品列表內(nèi)依次設置 sample name（樣品名稱）、rack code（樣品架類型）、via position （樣品瓶的位置）、acquisition下拉菜單內(nèi)選擇之前建立的LC-MS方法、inj.volunme