無菌藥品的概念-無菌藥品潔凈環(huán)境監(jiān)測-GMP培訓講義課件

1、無菌藥品潔凈環(huán)境監(jiān)測目錄無菌藥品概念一二無菌藥品潔凈環(huán)境監(jiān)測Page 2無菌藥品的概念LOGOPage 32010版藥典的檢驗方法3 檢驗方法接種的培養(yǎng)基培養(yǎng)14天后沒有菌生長2結果判定1、無菌藥品的定義按照2010版GMP附錄1第一條：無菌藥品是指法定藥品標準中列有無菌檢 查項目的制劑和原料藥，包括無菌制劑和無菌原料藥。2、無菌藥品的法定質(zhì)量標準按照2010版中國藥典無菌藥品的質(zhì)量標準（今年執(zhí)行2015版）1 檢驗項目無菌檢驗2010版藥典規(guī)定的取樣法4 取樣方法LOGOPage 43、無菌藥品VS 無菌檢驗合格的藥品LOGOPage 51批無菌藥品無菌檢驗合格 此批無菌藥品的無菌性合格不等

2、于無菌藥品 無菌檢驗1批無菌藥品的無菌性合格=此批無菌藥品無菌檢驗合格等于LOGOPage 6檢驗環(huán)境的局限性，目前藥典要求萬級背景下的100級無菌檢驗局限性生產(chǎn)人員的水平的局限性潔凈室的清潔和消毒無菌藥品潔凈環(huán)境的監(jiān)測取樣數(shù)量的局限性，但又不可能100%取樣無菌用的培養(yǎng)基靈敏度，硫乙、改良馬丁檢驗人員的水平的局限性LOGOPage 7無菌藥品潔凈環(huán)境的監(jiān)測LOGOPage 8環(huán)境監(jiān)測的概念LOGOPage 91、A級潔凈區(qū)無菌藥品的生產(chǎn)和檢驗懸的A浮級粒潔子凈區(qū)提供的是一個相對無菌環(huán)境，只能 通過微生物計數(shù)（監(jiān)測沉、浮游菌和表面微生物）來證明A級環(huán)境中 活的微生物數(shù)量。（是定量的，不是定性的

3、（即相對無菌，不是絕對無菌）。2、環(huán)境監(jiān)測的概率環(huán)境監(jiān)測是根據(jù)概率原則來判斷的。A級潔凈區(qū)稱為無菌環(huán)境，即使一個監(jiān)測點被污染的可能性是很小的，可以接受的（不能用平均數(shù)來判斷的，監(jiān)測到微生物必查）。3、環(huán)境監(jiān)測合格（A級生產(chǎn)和檢驗）的意義不能用環(huán)境監(jiān)測合格來判斷1批無菌藥品的無菌性合格環(huán)境監(jiān)測不是用于保證無菌藥品的無菌或已滅菌。（保證無菌藥品的 無菌性是提高培養(yǎng)基模擬無菌灌裝、除菌過濾、過熱滅菌等）良好的環(huán)境監(jiān)測可以為無菌藥品的可以無菌保證提供支持。便攜式粒子計數(shù)器監(jiān)測懸浮粒子微生物無菌藥品潔凈環(huán)境監(jiān)測項目沉降菌浮游菌表面微生物在線連續(xù)監(jiān)測LOGOPage 101、16292醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))

4、懸浮粒子的測試方法2、 16293醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))浮游菌的測試方法3、 16292醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌的測試方法國標 的依據(jù)2010版GB/T潔凈室的分級 ISO14644ISO14644 -1 7 （按粒子劃分，靜態(tài)） 1 空氣潔凈度等級劃分2為認證與連續(xù)的相符性的測試和監(jiān)測技術要求3 計量和測試方法4 7 （略）潔凈室的分級 ISO14698ISO14698 -1 3（按微生物劃分，靜態(tài)）1 微生物污染控制（總則）2微生物污染控制（評價與說明）3 微生物污染控制（有微生物污染或生物膜的惰性 表面的清潔與消毒效率的測量方法LOGOPage 111、總則：廠房與設施2、附錄1:第三章

5、 潔凈度級別與監(jiān)測GMP依據(jù)2010版中國2009版EMEA附件1，第四卷“無菌醫(yī)藥產(chǎn)品的制造”2002版WHO附錄6“無菌藥品”工業(yè)指南-用無菌工藝生產(chǎn)的無菌藥品2004版FDALOGOPage 12懸浮粒子監(jiān)測LOGOPage 13LOGOPage 14GMP潔凈度級別懸浮粒子最大允許數(shù)/立方米靜態(tài)動態(tài)0.5m5.0m0.5m5.0mCHINA和 EMEAA級352020352020B級3520293520002900C級3520002900352000029000D級352000029000不作規(guī)定不作規(guī)定WHOA級35000350000B級350003500002000C級350000

6、2000350000020000D級350000020000不作規(guī)定不作規(guī)定FDA100級(靜態(tài))不作規(guī)定3520不作規(guī)定Page 141000級3520010000級352000100000級3520000不同的GMP對懸浮粒子的要求ISO14644-1對懸浮粒子的濃度的規(guī)定LOGOPage 15ISO級別懸浮粒子最大允許數(shù)/立方米（N）0.1m0.2m0.3m0.5m1.0m5.0mISO1級102ISO2級10024104ISO3級1000237102358ISO4級100002370102035283ISO5級1000002370010200352083229ISO6級10000002

7、37000102000352008320293ISO7級352000832002930ISO8級352000083200029300ISO9級352000008320000293000中國GMP歐盟GMPWHOFDAGMPISO 潔凈級別對比LOGOPage 16中國GMP歐盟GMPWHOFDAGMPISO14644-1A級: 靜態(tài)A級: 靜態(tài)A級: 靜態(tài)100級4.8A級: 動態(tài)A級: 動態(tài)A級: 動態(tài)B級: 靜態(tài)B級: 靜態(tài)B級: 靜態(tài)1000級5、6B級: 動態(tài)B級: 動態(tài)B級: 動態(tài)10000級7C級: 靜態(tài)C級: 靜態(tài)C級: 靜態(tài)C級: 動態(tài)C級: 動態(tài)C級: 動態(tài)100000級8D

8、級: 靜態(tài)D級: 靜態(tài)D級: 靜態(tài)9各標準的綜合比較比較點LOGOPage 6中國GMP對非無菌藥品的潔凈環(huán)境，明確規(guī)定參考無菌藥品D級標準Page 17具體內(nèi)容1GMP(中國、歐盟、WHO、美國等)對潔凈環(huán)境的空氣懸浮粒子指標，均以 ISO14644為準2各國GMP懸浮粒子指標僅規(guī)定0.5微米和5.0微米兩個粒子濃度（美國5.0微 米一個粒子濃度）；而ISO14644對懸浮粒子指標規(guī)定從0.55.0微米之間粒子濃 度，且將懸浮粒子作為唯一指標3GMP(中國、歐盟、WHO)對無菌藥品潔凈環(huán)境均采用ABCD四個等級與ISO 相應的5級7級8級相對應；FDA對無菌藥品潔凈環(huán)境均采用 1001000

9、10000100000四個等級與ISO相應的5級7級8級相對應4GMP(中國、歐盟、WHO)對無菌藥品潔凈環(huán)境的監(jiān)測分別有“靜態(tài)”和“動態(tài)” 兩種標準（D級懸浮粒子沒有動態(tài)標準），且規(guī)定從“動態(tài)”恢復到“靜態(tài)”的 世界限度（1520分鐘后自凈）；而FDA對無菌藥品潔凈環(huán)境監(jiān)測僅有“動態(tài)” 一種標準，但建議周期性進行監(jiān)測5中國GMP與（歐盟、WHO）GMP對無菌藥品潔凈環(huán)境的分級和標準是完全一致靜態(tài)測試VS動態(tài)測試）概念靜態(tài)測試動態(tài)測試依據(jù)GB/T16292-2010(懸浮粒子) GB/T16293-2010(浮游菌) GB/T16294-2010(沉降菌） 2010版GMP2010版GMP取樣

10、點數(shù)目（最少)GB/T16292-2010(懸浮粒子)（1（2）表1最少采樣點數(shù)目用風險評估確定每個潔凈區(qū)的取樣點數(shù)目 用風險評估確定每個潔凈區(qū)的取樣點位臵取樣點位臵GB/T16292-2010(懸浮粒子)采樣點一般離地面0.8米的高度的 水平面上均勻布臵；采樣點多于5點時。也可采用0.81.5米高度的區(qū)域內(nèi)分層布臵，但 每層不少于5點。取樣點時間（沉降菌）30分鐘4小時標準1、2010版GMP附錄1:第三章潔凈度級別與監(jiān)測2、企業(yè)制定警戒限度和糾偏限度LOGOPage 18最少采樣點數(shù)目（GB/T 16292-2010）LOGOPage 19最少采樣點數(shù)目（企業(yè)規(guī)定標準）LOGOPage 2

11、0面積（）潔凈度級別A 、B級C級D級102221020422204082240100164210020040103注：表中的面積，對于單向流潔凈室，指的是送風面積，對于非單向流潔凈室，指的是房間面積。在線連續(xù) 粒子監(jiān)測系統(tǒng)懸浮粒子監(jiān)測便攜式 粒子計數(shù)器LOGOPage 21懸浮粒子監(jiān)測（便攜式）（靜態(tài)和動態(tài)）比較點具體內(nèi)容1采樣量要符合GMP標準（A級0.5微米，靜和動均為20個/立方米），保證至少檢測出20個粒子每個采樣點每次采樣量至少2.83升/分鐘（目前有2.83升/分鐘、28.3升/ 分鐘、50升/分鐘和100升/分鐘）23GMP標準中A級區(qū)至少采樣1立方米=1000升（依據(jù)SO14

12、644-1依據(jù)） 最小采樣量（立方米）=20（個）某粒徑的限度標準（個/立方米） 如：A級區(qū)5微米的標準; 20個/立方米;最小采樣量=20個20個/立方米=1立方米潔凈級別2.83升/分鐘28.3升/分鐘50升/分鐘100升/分鐘A級（1000升）350min35min20min10min其他級別（6.9升）2.44min1min結論：監(jiān)測A級區(qū)，必須用大流量計數(shù)器，其他可以用小流量LOGOPage 22便攜式粒子計數(shù)器LOGOPage 23懸浮粒子連續(xù)動態(tài)監(jiān)測原理（等動力采樣或等速度采樣）LOGOPage 24懸浮粒子連續(xù)動態(tài)時時監(jiān)控LOGOPage 25沉降菌浮游菌表面微生物微生物監(jiān)測項

13、目LOGOPage 26沉LOGOPage 27菌浮菌潔凈級別沉降菌（90mm） (cfu/4小時)浮游菌(c降fu/立方米)表面微生物接觸碟（90mm）5指手套A級11游11B級51055C級1010025-D級10020050-微生物監(jiān)測動態(tài)標準（2010版GMP）LOG沉降菌浮游菌O微生物監(jiān)測動態(tài)監(jiān)測風險評估比較點具體內(nèi)容一依據(jù)：第十一條 應當對微生物進行動態(tài)監(jiān)測，評估無菌生產(chǎn)的微生 物狀況。監(jiān)測方法有沉降菌法、定量空氣浮游菌采樣法和表面取樣法（如棉簽擦拭法和接觸碟法）等。動態(tài)取樣應當避免對潔凈區(qū)造成不 良影響。成品批記錄的審核應當包括環(huán)境監(jiān)測的結果。二微生物動態(tài)監(jiān)測取樣點應考慮以下因素

14、：1、容易遭受微生物污染，很有可能對產(chǎn)品質(zhì)量造成不良影響2、取樣點在實際生產(chǎn)中微生物便于繁殖3、統(tǒng)計學的知識4、取樣點不容易清潔和消毒5、 根據(jù)取樣點的潔凈級別6、很有可能污染產(chǎn)品的取樣點7、關鍵潔凈區(qū)的確認和關鍵操作點的確認Page 28沉降菌LOGOPage 29浮游菌微生物監(jiān)測動態(tài)監(jiān)測風險評估的工具具體內(nèi)容一魚骨刺圖（因果關系圖）二風險評估工具1、風險估值（RPN）RPN=嚴重程度S可能性P可檢測性D2、FMEA3、FTA(故障分析)無菌藥品灌裝A級隔離系統(tǒng)風險點LOGOPage 30無菌藥品灌裝A級隔離系統(tǒng)示意圖LOGOPage 31通過風險評估確定AB微生物動態(tài)監(jiān)測采樣點圖LOGOP

15、age 32沉降菌沉降菌LOGOPage 33LOGO沉降菌采樣點原則序號采樣原則一采樣點的位臵：1、操作區(qū)采樣點位臵距離地面在0.81.5m處（略高于操作面）2、如采送風口位臵應離開送風面30cm3、可在關鍵設備或關鍵工作區(qū)域內(nèi)增加采樣點二最少TSA無菌平皿數(shù)三沉降菌TSA平皿暴露時間 1、靜態(tài)：30min;2、 動態(tài)：4小時（不是絕對的）3、如同一位臵使用多個平皿進行監(jiān)測并累計計數(shù)，單個沉降 平皿的暴露時間可以少于4小時潔凈級別Page 34最少TSA無菌平皿數(shù)A級14B級2C級2D級2浮游菌LOGOPage 35浮游菌采樣點原則序號采樣原則一采樣點的位臵：1、操作區(qū)采樣點位臵距離地面在0

16、.81.5m處（略高于操作面）2、如采送風口位臵應離開送風面30cm3、可在關鍵設備或關鍵工作區(qū)域內(nèi)增加采樣點二最少采樣量（L）LOGOPage 36潔凈級別最少采樣量（L）AB級1000C級500D級100沉降菌表面微生物表面LOGOPage 37表面微生物采樣點原則LOGOPage 38采樣對象序號采樣對象采樣原則1操作人員潔凈服表面口罩、胸前、袖口、肘部、膝蓋2關鍵設備關鍵部位表面與產(chǎn)品接觸3墻表面距離地面在0.81.5m處4地表面房間中央，人員活動頻繁處5A級隔離器表面靠近灌裝處6手套（五指）表面A、B級操作人員表面微生物采樣點示意圖LOGOPage 39LOGO空氣凈化系統(tǒng)監(jiān)測計劃潔

17、 凈 區(qū) 監(jiān) 測 和 驗 證年度潔凈級別確認日常環(huán)境監(jiān)測動態(tài)監(jiān)測靜態(tài)監(jiān)測無菌潔凈區(qū)BC級、D級區(qū)無菌潔凈區(qū)A/BC級、D級區(qū)Page 40環(huán)境監(jiān)測結果鑒別（以微生物鑒別）LOGOPage 41鑒別項目內(nèi)容鑒別目的1、積累數(shù)據(jù)，用于偏差調(diào)查和趨勢分析2、提供動態(tài)監(jiān)測評價的依據(jù)鑒別程度1、根據(jù)生產(chǎn)工藝而定2、根據(jù)檢出微生物污染的潔凈區(qū)的級別而定鑒別方法1、表型鑒別1.1 肉眼觀察（計數(shù)、鑒別是細菌還是霉菌） 1.2革蘭氏染色（球菌是還是桿菌或芽胞菌） 1.3生化反應2、遺傳性鑒別（FDA指南中對微生物鑒別的要求)遺傳性鑒別比表型鑒別更精確和準確尤其適用無菌藥品無菌試驗檢查不合格原因的調(diào)查微生物表型

18、鑒別所用儀器LOGOPage 42微生物遺傳學鑒別所用儀器LOGOPage 43潔凈環(huán)境監(jiān)測的趨勢分析（以B級潔凈區(qū)為例）LOGOPage 440.5m趨勢圖監(jiān)測狀態(tài)監(jiān)測日期靜7月11日靜7月19日靜7月29日動8月5日靜8月12日動8月18日靜8月25日靜8月31日動9月9日靜9月18日動9月22日靜10月4日動10月13日靜10月20日動10月27日靜11月3日動11月10日靜11月17日動11月25日靜12月1日動12月7日動12月16日靜12月22日050000100000150000200000250000300000350000400000懸浮粒子數(shù)監(jiān)測狀態(tài)和監(jiān)測日期B級潔凈區(qū)0.

19、5微米懸浮粒子監(jiān)測趨勢圖1211 緩沖室1212 更無菌 外衣室1213 人流 氣閘1214 壓蓋室1215 鋁蓋滅 菌后室1210 滅菌 后室1209 灌裝室1206 物流 氣閘1203 人流 氣閘1202 更無菌外衣室LOGOPage 455.0m趨勢圖02000400060008000100001200014000監(jiān)測靜 靜 靜 動 靜 動 靜 靜 動 靜 動 靜 動 靜 動 靜 動 靜 動 靜 動 動 靜11 19 29 5 日 12日 日 日日18 25 31 9 日 18日 日 日日 日 日監(jiān) 7月 7月 7月 8月 8月 8月 8月 8月 9月 9月 9月 10 10測 日期22

20、 月 4 月10 10 11 11月 月 月 3 月13 20日 日11 11 12 12 12 12月 月 月 1 月 7 月 月27 日 10 17 25 日 日 16 22日日 日 日日 日懸浮粒子數(shù)監(jiān)測狀態(tài)和監(jiān)測日期B級潔凈區(qū)5.0微米懸浮粒子監(jiān)測趨勢圖1211 緩沖室1212 更無菌 外衣室1213 人流氣閘1214 壓蓋室1215 鋁蓋滅菌后室1210 滅菌后室1209 灌裝室1206 物流氣閘 1203 人流 氣閘LOGOPage 46沉降菌趨勢圖2103456靜靜靜動靜動靜7月 7月 7月 8月5 8月 8月 8月靜動靜8月 9月9 9月動靜動靜動靜動靜動9月 10月 10月

21、10月 10月 11月 11月 11月 11月沉降菌數(shù)11日 19日 29日 日 12日 18日 25日 31日 日 18日 22日 4日 13日 20日 27日 3日 10日 17日 25日監(jiān)測狀態(tài)和監(jiān)測日期B級潔凈區(qū)沉降菌監(jiān)測趨勢圖 1211 緩沖室1212 更無菌外衣室1213 人流氣閘 1214 壓蓋室1215 鋁蓋滅菌后室1210 滅菌后室1209 灌裝室1206 物流氣閘1203 人流氣閘1202 更無菌外衣室1201 手消毒室 1216 卡式瓶暫存室 警戒限度糾偏限度LOGOPage 47浮游菌趨勢圖024681012監(jiān)測狀態(tài)靜 靜 靜 動 靜 動靜靜 動 靜 動 靜 動 靜 動

22、 靜 動 靜 動監(jiān)測 7月 7月 7月日期 11日 19日 29日8月5 8月 8月 8月 8月 9月9 9月 9月 10月 10月 10月 10月 11月 11月 11月 11月日 12日 18日 25日 31日 日 18日 22日 4日 13日 20日 27日 3日 10日 17日 25日浮游菌數(shù)監(jiān)測狀態(tài)和監(jiān)測日期B級潔凈區(qū)浮游菌監(jiān)測趨勢圖 1211 緩沖室1212 更無菌外衣室1213 人流氣閘1214 壓蓋室1215 鋁蓋滅菌后室1210 滅菌后室1209 灌裝室1206 物流氣閘1203 人流氣閘1202 更無菌外衣室1201 手消毒室1216 卡式瓶暫存室警戒限度 糾偏限度 GMP

23、標準LOGOPage 48無菌藥品潔凈環(huán)境污染微生物原因調(diào)查（調(diào)查B級潔凈區(qū)污染的微生物）LOGOPage 49懸浮粒子LOGOPage 50出：通過上述對B級潔凈區(qū)沉降菌和浮游菌的監(jiān)測趨勢分析圖，可以看1、通過監(jiān)測趨勢分析圖，可以直接觀察出不同B級潔凈區(qū)污染微生 物的趨勢，在趨勢圖中標出GMP標準、糾偏限度和警戒限度。2、通過趨勢圖，可以客觀地反應潔凈區(qū)運行和維護狀態(tài)，有利于 提前發(fā)現(xiàn)潛在的風險和偏差，及時尋找污染微生物的原因并采取相應 措施，避免潔凈環(huán)境質(zhì)量進一步惡化。3、從上述監(jiān)測趨勢分析圖可以發(fā)現(xiàn)：人流氣閘、物流氣閘和更B級無菌衣室的微生物數(shù)量雖然符合GMP 標準且低于糾偏限度和警戒限度，但比其余B級潔凈室的微生物數(shù)量多，也應對微生物進行表型和遺傳型鑒別（以表型鑒別為例）。4、通過對B級潔凈室污染微生物，采用表型鑒別，經(jīng)分析，污染的 是革蘭氏陽性球菌（ 簡寫G+C）懸浮粒子革蘭氏陽性球菌在油鏡下觀察LOGOPage 51B級潔凈區(qū)污染革蘭氏陽性球菌原因1、懸浮粒子污染2、微生物的污染3、殘留物污染1、空氣2、水3、人員4、表面LOGOPage 521、原輔料2、包裝材料3、設備及容器4、生產(chǎn)過程5、人員6、環(huán)境7、更衣程序控制B級潔凈區(qū)污染微生物措施1、針對所有進入 A/B級潔凈區(qū)人員 進行連續(xù)3次的更 衣程序的確認，均 合格方可進入2、針對