功效成分檢測(cè)方法(共12頁(yè))

1、粗多糖(du tn)測(cè)定方法第一(dy)法本方法(fngf)參照保健食品功效成分檢測(cè)方法（王光亞、白鴻主編）中“粗多糖的苯酚-硫酸分光光度測(cè)定法”的方法測(cè)定。主要儀器離心機(jī)：4000r/min離心管：50ml分光光度計(jì)水浴鍋漩渦混合器試劑實(shí)驗(yàn)用水為雙蒸水，所用試劑為分析純級(jí)。無(wú)水乙醇80%（V/V）乙醇溶液葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取干燥恒重的分析葡萄糖0.5000g加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀釋100倍為使用液（0.1mg/ml）。5%苯酚溶液（W/V）：稱取精制苯酚5.0g,加水溶解并稀釋至100ml，混勻。溶液置于冰箱中可保存一個(gè)月。濃硫酸（比重1.84）

2、。0.2mol/L磷酸鹽緩沖液（pH6.5）：31.5ml（0.2mol/L）磷酸氫二鈉與68.5ml（0.2mol/L）磷酸二氫鈉混合。測(cè)定步驟樣品提?。悍Q取混合均勻的固體樣品1.02.0g，置于100ml容量瓶中，加水80ml左右，于沸水浴中加熱1小時(shí)，冷卻至室溫后補(bǔ)加水至刻度（V1）。取50ml上述提取液置于100ml具塞錐形瓶中，加1ml 10%淀粉酶液和0.5ml 0.2M磷酸鹽緩沖液，加塞，置5560酶解1小時(shí)，再加約為樣品體積1%的葡萄糖苷酶于60以下再水解1小時(shí)候取出（用碘液檢驗(yàn)是否水解完全，如不完全可延長(zhǎng)水解時(shí)間至酶解液加碘液不變藍(lán)色為止），于電爐上小心加熱至沸騰做滅酶處理，

3、冷卻至室溫，定容至100ml，過(guò)濾，取濾液沉淀粗多糖。沉淀粗多糖：準(zhǔn)確吸取上述濾液5.0ml（V2），置于50ml離心管中，加入無(wú)水乙醇20ml，混勻，與4冰箱靜置4小時(shí)以上，以4000r/min 離心5min，棄去上清液，殘?jiān)?0%（V/V）乙醇數(shù)毫升洗滌，離心后棄去上清液，反復(fù)操作3次。殘?jiān)盟芙獠⒍ㄈ葜?025ml（V3）（根據(jù)糖濃度而定），供測(cè)定用。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)使用液0ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml（相當(dāng)于葡萄糖0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0，06mg、0.08mg、0.10mg）置于25ml比

4、色管中，補(bǔ)加水至2.0ml，加入5%苯酚溶液1.0ml，在旋渦混合器上混勻，小心加入濃硫酸10ml，在旋渦混合器上小心混勻，置沸水浴中2min，冷卻至室溫，用分光光度計(jì)在485nm波長(zhǎng)處以試劑空白為參比，1cm比色皿測(cè)定吸光度值。以葡萄糖質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品測(cè)定：準(zhǔn)確(zhnqu)吸取樣品測(cè)定液適量（V4）（含糖0.020.08mg）置于25ml比色管中，補(bǔ)加水至2.0ml，然后按（3）法測(cè)定吸光度(gungd)值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出葡萄糖含量，計(jì)算樣品中粗多糖含量。結(jié)果(ji gu)計(jì)算 m1V1V3 X=0.9100 m2V2V4式中X樣品中粗多糖含量mg/10

5、0g(ml)；m1樣品測(cè)定液中葡萄糖的質(zhì)量（mg）；m2樣品質(zhì)量（g或ml）；V1樣品提取液總體積（ml）；V2沉淀粗多糖所用樣品提取液體積（ml）；V3粗多糖溶液體積（ml）；V4測(cè)定用樣品液體積（ml）；0.9葡萄糖換算為粗多糖的系數(shù)。第二法按保健食品功效成分檢測(cè)方法（王光亞、白鴻主編）中“葡聚糖的分光光度測(cè)定法”的方法測(cè)定。本方法適用于各類食品中以葡聚糖為主要結(jié)構(gòu)，相對(duì)分子質(zhì)量10000以上的水溶性粗多糖的測(cè)定。本法最低檢出限為5.0mg/L。方法提要食品中相對(duì)分子質(zhì)量大于1104的高分子物質(zhì)在80%乙醇溶液中沉淀，與水溶液中單糖和低聚糖分離，用堿性二價(jià)銅試劑選擇性地從其他高分子物質(zhì)中沉

6、淀具有葡聚糖結(jié)構(gòu)的多糖，用苯酚硫酸反應(yīng)以碳水化合物形式比色測(cè)定其含量，其顯色強(qiáng)度與粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此計(jì)算食品中粗多糖的含量。主要儀器1）分光光度計(jì)2）離心機(jī)（3000r/min）3）旋渦混合器試劑本方法所用試劑除特殊注明外，均為分析純；所用水為去離子水或同等純度蒸餾水。乙醇溶液（80%）：200ml水中加入無(wú)水乙醇80ml，混勻。氫氧化鈉溶液（100g/L）：稱取100g氫氧化鈉，加水溶解并稀釋至1L。加入固體無(wú)水 硫酸鈉至飽和，備用。銅試劑儲(chǔ)備液：稱取3.0g五水硫酸銅，30.0g枸櫞酸鈉，加水溶解并稀釋至1L，混勻，備用。銅試劑溶液：取銅試劑儲(chǔ)備液50ml，加水50ml，混勻

7、后加入固體無(wú)水硫酸鈉12.5g并使其溶解。臨用新配。洗滌劑：取水50ml，加入10ml銅試劑溶液、50ml氫氧化鈉溶液，混勻。硫酸溶液（10%）：取100ml濃硫酸加入(jir)到800ml左右水中，混勻，冷卻后稀釋至1L。苯酚溶液（50g/L）：稱取精制苯酚5.0g，加水溶解(rngji)并稀釋至100ml，混勻。溶液置冰箱中可保存一個(gè)月。葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備(chbi)液：準(zhǔn)確稱取相對(duì)分子質(zhì)量5105已干燥至恒重的葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品0.5000g，加水溶解，并定容至50ml，混勻，置冰箱中保存。此溶液1ml含10.0mg葡聚糖。葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)使用液：吸取葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0ml，置于100ml容量瓶中，

8、加水至刻度，混勻，置冰箱中保存。此溶液1ml含葡聚糖0.10mg。測(cè)定步驟8.1樣品處理8.1.1樣品提?。悍Q取混合均勻的固體樣品2.0g,置于100ml容量瓶中，加水80ml左右，于沸水浴上加熱2小時(shí)、冷卻至室溫后補(bǔ)加水至刻度，混勻后過(guò)濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀多糖。8.1.2沉淀粗多糖：準(zhǔn)確吸取樣品提取中終濾液5.0ml或液體樣品5.0ml，置于50ml離心管中，加入無(wú)水乙醇20ml，混勻5min后，以3000r/min離心5min，棄去上清液。殘?jiān)?0%(體積分?jǐn)?shù)）乙醇溶液數(shù)毫升洗滌，離心后棄上清液，反復(fù)操作3-4次。殘?jiān)盟芙獠⒍ㄈ葜?.0ml，混勻后供沉淀葡聚糖。8.1.

9、3沉淀葡聚糖：準(zhǔn)確吸取沉淀粗多糖后的終溶液2ml，置于20ml離心管中，加入100g/l氫氧化鈉溶液2.0ml、銅試劑溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2min，冷卻，以3000r/min離心5min,棄去上清液。殘?jiān)孟礈煲簲?shù)毫升洗滌，離心后棄去上清液，反復(fù)操作3次，殘?jiān)?0%（體積分?jǐn)?shù)）硫酸溶液2.0ml溶解并轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。此溶液為樣品測(cè)定液。8.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確吸取葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)使用液0ml、0.10ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.0ml（相當(dāng)于葡聚糖0mg、0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.08m

10、g、0.10mg），分別置于25ml比色管中，準(zhǔn)確補(bǔ)充水至2.0ml，加入50g/L苯酚溶液1.0ml，在旋渦混合器上混勻，小心加入濃硫酸10.0ml，于旋渦混合器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min，冷卻后用分光光度計(jì)在485nm波長(zhǎng)處以試劑空白溶液為參比，1cm比色皿測(cè)定吸光度值。以葡聚糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 8.3樣品測(cè)定：準(zhǔn)確吸取樣品測(cè)定液2.0mL，置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL,在旋渦混合器上混勻，小心加入濃硫酸10.0mL,在旋渦混合器上小心混勻，至沸水浴中2min，冷卻至室溫，用分光光度計(jì)在485nm波長(zhǎng)處以試劑空白為參比，1cm

11、比色皿測(cè)定吸光度值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出葡聚糖含量，計(jì)算樣品中粗多糖含量。同時(shí)做樣品空白試驗(yàn)。結(jié)果計(jì)算 (m1-m2)V1V3V5 X= m3V2V4V6式中 X樣品中粗多糖含量（以葡聚糖計(jì)）（mg/g） m1樣品測(cè)定液中葡聚糖的質(zhì)量（mg） m2樣品空白液中葡聚糖的質(zhì)量（mg） m3樣品質(zhì)量（g） V1樣品提取液總體積（ml） V2沉淀粗多糖所用樣品提取液體積（ml） V3粗多糖(du tn)溶液體積（ml） V4沉淀葡聚糖所以粗多糖溶液(rngy)體積（ml） V5樣品測(cè)定(cdng)液總體積（ml） V6測(cè)定用樣品測(cè)定溶液體積（ml）準(zhǔn)確度與精密度在不同食品中進(jìn)行不同濃度的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，回收

12、率為87.8%110.87%，不同實(shí)驗(yàn)室對(duì)同一樣品進(jìn)行10次測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.8%。注意事項(xiàng) 本方法測(cè)定的水溶性多糖含有10個(gè)以上單糖殘基。 在測(cè)定過(guò)程中應(yīng)避免糖和其他碳水化合物的污染，因?yàn)楸椒恿蛩崤c糖和碳水化合物起反應(yīng)。 某些保健食品中功效成分為醇溶性多糖，可參照本方法進(jìn)行測(cè)定，但樣品預(yù)處理時(shí)將乙醇改為丙酮即可。 洗滌粗多糖沉淀時(shí)，一定要將離心管壁上玷污的其他糖分和碳水化合物用80%乙醇洗凈，否則結(jié)果偏高。 此法適用于測(cè)定高分子量的糖類物質(zhì)（10000Da）。低聚木糖的測(cè)定1.試劑（1）4mol/L硫酸：98%硫酸用水稀釋而成，并標(biāo)定校準(zhǔn)濃度；（2）40%氫氧化鈉：取40.0g氫氧

13、化鈉，加入100ml水溶解即可；無(wú)水乙醇（AR）；乙腈（色普級(jí)）；0.45m水相過(guò)濾膜。儀器及色譜條件儀器高壓液相系統(tǒng)（515高壓泵、7725進(jìn)樣閥、柱溫箱、2414示差折光檢測(cè)器、色譜工作站），真空泵或電吹風(fēng)。色譜條件色譜柱：Waters Carbohydrate High Performance 4m 4.6250mm Cartridge流動(dòng)相：乙腈：水=75：25（V/V）；流速：1.0ml/min；柱溫：35；示差檢測(cè)器溫度：35。進(jìn)樣量：20.0l樣品處理取約1.0g樣品于50.0ml小燒杯中，加10.0ml水溶解樣品，并轉(zhuǎn)入50.0ml容量瓶中，再加水5.0ml洗滌燒杯并全部轉(zhuǎn)入容

14、量瓶中，最后用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻離心（4000r/min，10min），取上清液15.0ml于小燒杯中用電吹風(fēng)（不大于50）吹趕盡乙醇，用水溶解定容至15.0ml。（該溶液為樣品水解前上機(jī)測(cè)定溶液M1）取10.0ml于水解管中，加入4mol/L硫酸1.80ml，搖勻，于100水解2小時(shí)，冷卻；用40%氫氧化鈉中和（pH值5-7），加水定容至25.0ml的容量瓶中，搖勻，取上清液2.0ml，用無(wú)水乙醇定容至10.0ml刻度搖勻離心，取上清液8.0ml于小燒杯中，電吹風(fēng)吹干；加水溶解，定容2.0ml，用0.45m水相膜過(guò)濾。（該溶液為樣品水解后上機(jī)測(cè)定溶液M2）。上機(jī)測(cè)定(cdng)樣品(y

15、ngpn)的體積：V1（ml）=50ml V2（ml）=156.25ml計(jì)算(j sun)標(biāo)準(zhǔn)樣品：取純度為99.5%木糖75.0mg于25.0ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，制成3.0mg/ml木糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液，備用。低聚木糖含量X（%，以木糖計(jì)）=M2-M1M1：樣品水解前低聚木糖含量（%）；=Aspl/AstdCstdV110-3/W100M2：樣品水解后低聚木糖含量（%）；=Aspl/AstdCstdV210-3/W100 Aspl：樣品中木糖組分峰面積； Astd：標(biāo)樣木糖組分峰面積； Cstd：標(biāo)樣木糖組分濃度（mg/ml）； V1：水解前稀釋體積（ml）； V2：水解后稀釋體積

16、（ml）； W：樣品重量（g）計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字淫羊藿苷的測(cè)定范圍本方法規(guī)定了保健食品中淫羊藿苷的測(cè)定方法。本方法適用于以淫羊藿為原料的保健食品中淫羊藿苷的測(cè)定。本方法的檢出限：0.1mg/kg本方法的線性范圍：20100g/ml原理樣品經(jīng)70%乙醇在超聲波振蕩下提取，定容，離心后取上清液過(guò)濾膜，經(jīng)C18反相柱分離，在紫外檢測(cè)器270nm波長(zhǎng)處檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。試劑無(wú)水乙醇（AR）甲醇（優(yōu)級(jí)純）石油醚（AR）水（實(shí)驗(yàn)室一級(jí)用水）聚酰胺粉（60目-80目）淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品（純度98.0%）淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取淫羊藿苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的

17、溶液。儀器設(shè)備高效液相色譜儀：附紫外檢測(cè)器（UV）超聲波清洗器離心機(jī)層析柱（內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)15cm）分析(fnx)步驟樣品(yngpn)處理取本品10片，除去包衣，研細(xì)，精確稱取適量（約相當(dāng)于4片），置于100ml錐形瓶中，加70%乙醇30ml，超聲提取(tq)20min，過(guò)濾。用少量70%乙醇洗滌殘?jiān)占癁V液，并定容至50ml，混勻，經(jīng)0.45m微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)樣。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制將淫羊藿苷對(duì)照品使用液用甲醇稀釋為2.0g/ml、5.0g/ml、25.0g/ml、75.0g/ml、125.0g/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。液相色譜參考條件色譜柱：C18柱 4.6mm250mm，5m柱溫：室溫紫外

18、檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng)270nm流動(dòng)相：甲醇+水=65+35流速：1.0ml/min進(jìn)樣量：10l色譜分析：取標(biāo)準(zhǔn)溶液系列及試樣溶液注入色譜柱中，以保留時(shí)間定性，以試樣峰面積與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。分析結(jié)果表示計(jì)算： CVF X= m1000式中：X試樣中淫羊藿苷的含量，g/L； C由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得進(jìn)樣液中淫羊藿苷的濃度，g/ml； V試樣定容體積，ml； F試樣稀釋倍數(shù)； m試樣體積，ml；本方法參照GB/T22247-2008保健食品中淫羊藿苷的測(cè)定方法制定保健食品中肉堿的測(cè)定1范圍本方法規(guī)定了片劑、膠囊保健食品中肉堿的測(cè)定方法。本方法適用于以肉堿為主要原料的片劑、膠囊中肉堿的測(cè)定。本方法最低檢出量為0.

19、27ug。本方法最佳線性范圍：0.050mg/mL2.0mg/mL。原理 試樣中的肉堿以0.5mmol/L的鹽酸超聲提取，反相色譜分離，與標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間比較定性，以峰面積外標(biāo)法定量。試劑除特殊說(shuō)明，所用試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)用水為去離子水或同等純度的蒸餾水。31 磷酸氫二鉀32 辛烷磺酸鈉33 0.50mmol/L鹽酸34 肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取干燥(gnzo)至恒重的肉堿標(biāo)準(zhǔn)品(含量(hnling)98%)0.0200g，用0.50mmol/L鹽酸(yn sun)溶解并定容為10.0mL，此溶液濃度為2.0mg/mL。儀器41 HPLC系統(tǒng)，配有紫外檢測(cè)器和色譜工作站；42 超聲波提取器；4

20、3 溶劑微孔過(guò)濾器帶0.45um水相濾膜。分析步驟51 試樣預(yù)處理：準(zhǔn)確稱取粉碎并混合均勻的式樣0.50g（含肉堿約40毫克）；液體試樣取5.0mL，于50mL容量瓶中，加入0.50mmol/L鹽酸約35mL，超聲提取10min，用0.50mmol/L鹽酸定容，混勻，過(guò)濾，棄初濾液數(shù)毫升，收集濾液，過(guò)0.45um水相濾膜，為試樣處理液。供HPLC分析。52 試樣分析521 色譜條件：ShimpakCLC ODS 柱；4.6200mm,10um；522 流動(dòng)相：0.05mol/L(3.4g) 磷酸氫二鉀溶液，0.002mol/L辛烷磺酸鈉; 10%乙腈；PH2.5。523 流速：0.8mL/mi

21、n；524 檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)： 210nm；53 標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0,0.25,0.50,1.0,2.0,2.5,5.0mL標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.4）于5mL比色管中；用0.50mmol/L鹽酸稀釋并定容為5.0mL，分別進(jìn)樣20uL進(jìn)行色譜分析。用標(biāo)準(zhǔn)濃度峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。54 試樣測(cè)定：取20uL試樣處理液（5.1）注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，面積定量。5 色譜圖 5. 6分析結(jié)果表述試樣中肉堿的含量按5.5.1式計(jì)算561 計(jì)算 CV X= m式中： X 為試樣中肉堿的含量，mg/g；m為試樣質(zhì)量，g；C為試樣處理液中肉堿的濃度，mg/mL； V為試樣處理液體積，mL

22、。5.6.2 結(jié)果(ji gu)表示結(jié)果(ji gu)保留三位有效數(shù)字。 6 . 技術(shù)參數(shù)重復(fù)(chngf)測(cè)定值的RSD小于6.0%?；厥章剩?0.3101.1%保健食品中人參皂甙高效液相色譜測(cè)定適用范圍本方法規(guī)定了人參含片、人參沖劑、人參茶、人參膠囊等以人參為主要原料的保健食品中人參皂甙的含量的HPLC的測(cè)定方法。本方法適用于人參含片、人參沖劑、人參茶、人參膠囊等以人參為主要原料的保健食品中人參皂甙的含量的HPLC的測(cè)定方法。本方法的六種皂甙的最低檢出量為 10 mg/kg。本方法的六種皂甙的最佳線性范圍：0.1mg/mL1mg/mL。原理將試樣中的人參皂甙溶解、提取，經(jīng)凈化處理后，使用梯

23、度洗脫反相高效液相色譜進(jìn)行分離，紫外檢測(cè)器（UV）檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量，適用于保健食品中人參皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的同時(shí)定量分析。3. 試劑實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。3.1 乙腈：色譜純，200nm吸光度值為0.021。3.2 甲醇：分析純。3.3 101大孔吸附樹脂。3.4 高效液相色譜流動(dòng)相：梯度淋洗A液為乙腈，B液為水。3.5人參皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd標(biāo)準(zhǔn)品：含量大于98（HPLC）。3.6人參皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：配制人參皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，濃度分別為1

24、0mg/mL；再以此儲(chǔ)備液配制成混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，濃度范圍為0.1mg/mL1mg/mL；所有標(biāo)準(zhǔn)溶液均用甲醇配制。4. 儀器設(shè)備4.1 高效液相色譜儀：雙高壓輸液泵，附紫外檢測(cè)器。4.2 超聲波清洗器。4.3 離心機(jī)。4.4 水浴鍋。5. 分析步驟5.1 固體試樣處理：取片劑或膠囊內(nèi)容物研成粉末，并過(guò)20目篩；精確稱取該粉末樣適量于50mL具塞試管中，加水50ml于超聲波清洗器中超聲提取30分鐘，取出，待溶液恢復(fù)常溫后，準(zhǔn)確取出10ml，通過(guò)D101大孔吸附樹脂凈化柱（大孔吸附樹脂使用前先經(jīng)甲醇浸泡，水洗，裝成10cm長(zhǎng)小柱），小柱先用10ml水沖洗，棄去水液之后，用70%甲醇25 mL洗脫

25、皂甙，收集甲醇溶液，水浴上蒸干，殘?jiān)约状既芙獠⒍ㄈ葜?mL，該樣液離心后過(guò)0.5m膜，濾液進(jìn)行色譜分析。5.2 液體(yt)試樣處理：含的液體試樣：取一定量的試樣于水浴上蒸干，殘?jiān)?0mL水超聲提取(tq)30分鐘，余下步驟與5.1相同。5.3 測(cè)定(cdng)：5.3.1 液相色譜參考條件5.3.1.1 色譜柱：反相C18柱, 4.6 x 250 mm，5m5.3.1.2 紫外檢測(cè)器：檢測(cè)波長(zhǎng) 203nm5.3.1.3 梯度淋洗條件：時(shí)間（分鐘乙腈（）水（）流速 (mL./min)梯度曲線016841.012018821.065540601.066540601.067510001.018

26、016841.015.3.1.4 柱溫：35C5.3.2 色譜分析5.3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備將混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液均取5L進(jìn)HPLC分析，用峰面積對(duì)濃度作各皂甙的標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線。5.3.2.2 試樣測(cè)定 取5L試樣凈化液進(jìn)高效液相色譜分析，以絕對(duì)保留時(shí)間定性，用峰面積通過(guò)各皂甙的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量計(jì)算試樣中人參皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的含量。 分析結(jié)果表述6.1 計(jì)算 C 5 5 100 試樣中各人參皂甙的含量（g/100g） m 1000 式中：C 試樣溶液中各人參皂甙的含量，mg/mL； m 試樣質(zhì)量，g；試樣中總?cè)藚⒃磉暗暮浚╣/100g） CRe CRg1 CRb1 CR

27、c CRb2 CRd式中：CRe (g/100g)：試樣中Re的含量CRg1 (g/100g)：試樣中Rg1的含量CRb1 (g/100g)：試樣中Rb1的含量CRc (g/100g)： 試樣中Rc的含量CRb2 (g/100g)：試樣中Rb2的含量CRd (g/100g)： 試樣(sh yn)中Rd的含量6.2 結(jié)果表示： 計(jì)算結(jié)果保留(boli)三位有效數(shù)字色譜(s p)圖保健食品中總黃酮的測(cè)定 試劑聚酰胺粉蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液： 稱取5.0mg蘆丁，加甲醇溶解并定容至100mL，即得50g/mL。乙醇 分析純。甲醇 分析純。分析步驟試樣處理：稱取一定量的試樣，加乙醇定容至25mL，搖勻后，超聲提取20min，放置，吸取上清液1.0mL，于蒸發(fā)皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上揮去乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱。先用20mL苯洗，苯液棄去，然后用甲醇洗脫黃酮，定容至25mL。此液于波長(zhǎng)360nm測(cè)定吸收值。同時(shí)以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程，計(jì)算試樣中的總黃酮含量。蘆丁(l dn)標(biāo)準(zhǔn)曲線： 吸取(xq)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL比色管中，加甲醇至刻度(kd)，搖勻，于波長(zhǎng)360nm比色。求回歸方程，計(jì)算試樣中總黃酮含量。計(jì)算和結(jié)果表示 式中： X：試樣中總黃酮的含量，mg/100g； A：由標(biāo)準(zhǔn)曲線算得被測(cè)液中總黃酮