實驗一蛋白質(zhì)變性凝固以及沉淀

1、關于實驗一蛋白質(zhì)變性凝固及沉淀第一張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗目的能夠說出蛋白質(zhì)變性、凝固反應的原理及實驗方法能夠說出蛋白質(zhì)沉淀反應的原理及實驗方法能夠運用鹽析法及重金屬沉淀法第二張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月主要實驗內(nèi)容蛋白質(zhì)的加熱變性凝固蛋白質(zhì)沉淀反應蛋白質(zhì)鹽析重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)第三張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質(zhì)的變性 (denaturation) 在某些理化因素的作用下，蛋白質(zhì)嚴格的空間結構被破壞（不包括肽鍵的斷裂），從而引起若干理化性質(zhì)和生物學性質(zhì)改變的現(xiàn)象。第四張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月 變性后的蛋白質(zhì)稱變性

2、蛋白,能使蛋白質(zhì)變性的物質(zhì)叫蛋白質(zhì)變性劑。變性因素物理因素高溫、高壓紫外線、X射線、電離輻射和超聲波等化學因素強酸、強堿有機溶劑、重金屬鹽高濃度尿素、鹽酸胍等變性實質(zhì)： 破壞了空間結構，一級結構不受影響（分子組成、分子量不變）。第五張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月變性的可逆性可逆變性：除去變性因素，蛋白質(zhì)空間結構可以恢復原狀。不可逆變性：除去變性因素，蛋白質(zhì)空間結構不能恢復原狀。利用消滅病原微生物蛋白質(zhì)制劑的保存保護體內(nèi)蛋白質(zhì)避免第六張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月 蛋白質(zhì)分子顆粒大小1-100nm之間,屬膠體顆粒范圍，在溶液中能形成穩(wěn)定的膠體。原因蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)及沉淀:表面

3、形成水化層表面同種電荷的斥力 除去這兩個因素，就會發(fā)生沉淀。蛋白質(zhì)分子相互聚集而從溶液中析出的現(xiàn)象稱為沉淀。+第七張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月+-蛋白質(zhì)膠體顆粒的沉淀 帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負電荷的蛋白質(zhì)在等電點的蛋白質(zhì)酸酸堿堿脫水脫水脫水不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒 （沉淀）帶正電荷的蛋白質(zhì) （疏水膠體）帶負電荷的蛋白質(zhì) （疏水膠體）堿酸（親水膠體）（親水膠體）（親水膠體）-第八張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月可逆沉淀不可逆沉淀結構和性質(zhì)都不變適當條件下可重新溶解是分離和純化的基本方法結構和性質(zhì)都發(fā)生變化沉淀不再溶解于水蛋白質(zhì)的沉淀第九張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質(zhì)變性

4、沉淀并凝聚成塊狀稱為凝固。不可逆變性狀態(tài)蛋白質(zhì)的凝固第十張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質(zhì)變性、沉淀與凝固的關系變性屬于蛋白質(zhì)本質(zhì)的變化，沉淀和凝固屬于一種現(xiàn)象變性不一定沉淀，變性蛋白質(zhì)只在等電點附近才沉淀變性蛋白易于沉淀， 沉淀蛋白不一定變性沉淀的變性蛋白質(zhì)也不一定凝固第十一張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質(zhì)的加熱變性凝固蛋白質(zhì)分子受熱作用，分子空間結構變化，疏水基團暴露于分子表面，溶解度降低。當?shù)鞍踪|(zhì)分子不帶電荷（處于等電點條件下），則蛋白質(zhì)發(fā)生聚集出現(xiàn)沉淀；當?shù)鞍踪|(zhì)分子帶電（處于非等電點條件下），則蛋白質(zhì)因靜電排斥作用而不出現(xiàn)沉淀；第十二張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于

5、2022年6月實驗內(nèi)容 取三只小玻璃試管，各加入10%蛋白質(zhì)溶液10d，分別標記為1、2和3號管；向1號管中加入：pH4.8緩沖液10d 。混勻，于酒精燈上緩慢加熱至沸點，觀察變化（ ）；高溫下，蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆的變性并凝固。第十三張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月向2號管中加入：H2O 8d, 0.1mol/L HCl 2d。混勻，于酒精燈上緩慢加熱至沸點，觀察變化（ ）停止加熱，向2號管中逐滴加入：0.1mol/L NaCO3 。搖勻后繼續(xù)滴加，一旦出現(xiàn)絮狀物即停止。將2號管于酒精燈上加熱，觀察現(xiàn)象（ ）冷卻后，再加入： 0.1mol/L HCl 2d。觀察現(xiàn)象（ ）蛋白質(zhì)變性不一定

6、出現(xiàn)沉淀；蛋白質(zhì)變性后在特定條件下發(fā)生沉淀；沉淀加熱后發(fā)生不可逆變性并凝固。第十四張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月向3號管中加入：H2O 8d, 0.1mol/L NaOH 2d。混勻，于酒精燈上緩慢加熱至沸點，觀察變化（ ）；停止加熱，向3號管中逐滴加入：0.1mol/L HAC。一旦出現(xiàn)絮狀物即停止。繼續(xù)滴加：0.1mol/L HAC 1d。觀察現(xiàn)象（ ）將3號管于酒精燈上加熱，觀察現(xiàn)象（ ）向3號管中加入： 0.1mol/L NaOH 。一旦出現(xiàn)絮狀物即停止。將3號管于酒精燈上加熱，觀察現(xiàn)象（ ）冷卻后，再加入： 0.1mol/L NaOH 2d。觀察現(xiàn)象（ ）蛋白質(zhì)變性不一定出

7、現(xiàn)沉淀；蛋白質(zhì)變性后在特定條件下發(fā)生沉淀，并可逆；第十五張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質(zhì)沉淀反應蛋白質(zhì)的鹽析一定濃度中性鹽 （ (NH4)2SO4、Na2SO4等）可去除蛋白質(zhì)分子所帶電荷及其表面的水化層，從而使蛋白質(zhì)從溶液中聚集沉淀出來。利用這個原理使蛋白質(zhì)從溶液中沉淀出來的方法為鹽析。不同蛋白質(zhì)鹽析時所需的鹽濃度不同，可以通過不同濃度鹽溶液分離不同蛋白質(zhì)，就是分段鹽析。大部分蛋白質(zhì)都可用飽和(NH4)2SO4溶液鹽析出來。某些蛋白質(zhì)在半飽和(NH4)2SO4溶液中析出。鹽析是一個可逆沉淀反應。第十六張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月實驗內(nèi)容取一只小玻璃試管，加入2mL蛋

8、白質(zhì)溶液；加入等體積飽和(NH4)2SO4溶液，混勻后靜置3min。觀察現(xiàn)象（ ）對該溶液進行過濾，將濾液收集于一只干凈試管中，取部分轉入另一只試管中；向一只試管中加入結晶(NH4)2SO4粉末，直到粉末不再溶解（成為飽和(NH4)2SO4溶液）；比較兩只試管現(xiàn)象（ ）第十七張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質(zhì)沉淀反應重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)在堿性條件下，重金屬離子與蛋白質(zhì)結合成不溶性蛋白鹽而沉淀。實驗內(nèi)容取一只小玻璃試管，加入1mL蛋白質(zhì)溶液；加入0.1mol/mL NaOH 2d，混勻；逐滴加入CuSO4，搖勻，直至出現(xiàn)沉淀為止。第十八張，PPT共二十頁，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質(zhì)沉淀反應生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)在酸性條件下，蛋白質(zhì)可與生物堿試劑(如苦味酸、鎢酸、鞣酸)以及某些酸(如三氯醋酸、過氯酸、硝酸)結合成不溶性的鹽沉淀，此時蛋白質(zhì)帶正電