抗核抗體基本概念及對(duì)應(yīng)臨床疾病概述課件

1、抗核抗體基本概念及臨床檢測(cè)傳統(tǒng)定義 針對(duì)細(xì)胞核成分的自身抗體的總稱。廣義定義 針對(duì)細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對(duì)ANA的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗體的總稱 靶抗原存在于包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂結(jié)構(gòu)等部位抗核抗體的定義ANA可見(jiàn)于多種疾病，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標(biāo)在非結(jié)締組織病中也可出現(xiàn)陽(yáng)性。正常人中（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽(yáng)性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為IgM型高滴度ANA則高度提示自身免疫性疾病 目前，ANA檢測(cè)已成為臨床上的一個(gè)極重要的自身免疫病的篩查實(shí)驗(yàn)。ANA檢測(cè)的臨床意義系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動(dòng)期非活動(dòng)期藥物誘導(dǎo)

2、的紅斑狼瘡混合性結(jié)締組織病（MCTD、Sharp綜合征）類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥多發(fā)性肌炎及皮肌炎干燥綜合征慢性活動(dòng)性肝炎潰瘍性結(jié)腸炎其它風(fēng)濕病正常人 9510080100100100204020508595305070803040265-10ANA檢測(cè)的臨床意義ANA實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略推薦ANA間接免疫熒光法篩查實(shí)驗(yàn)間接免疫熒光法檢測(cè)ANA基本原理間接免疫熒光法 包被HEp-2細(xì)胞的基質(zhì)玻片樣本中ANA-IgGFITC標(biāo)記的抗人IgG抗體抗原譜完整 (細(xì)胞核、細(xì)胞漿中近百種自身抗原)人源細(xì)胞，無(wú)種屬非特異熒光干擾腫瘤細(xì)胞，易于培養(yǎng)及商品化生產(chǎn)核質(zhì)比大，可觀察到多種不同熒光核型ANA篩查的

3、經(jīng)典和標(biāo)準(zhǔn)基質(zhì): HEp-2均質(zhì)型核點(diǎn)型著絲點(diǎn)型核仁型Scl-70粗顆粒型細(xì)顆粒型核膜型.核糖體P蛋白線粒體型高爾基體溶酶體肌動(dòng)蛋白波形蛋白基于Hep-2細(xì)胞為基質(zhì)的ANA初篩實(shí)驗(yàn)ANA間接免疫熒光法篩查試驗(yàn)的實(shí)際價(jià)值初步甄別自身免疫性疾病患者（陰陽(yáng)性結(jié)果）盡可能判斷熒光核型（縮小靶抗原確認(rèn)實(shí)驗(yàn)范圍）獲取抗體滴度信息（判斷病情進(jìn)展、預(yù)后等）考慮到熒光法篩查試驗(yàn)存在主觀性強(qiáng)的特點(diǎn)，因此應(yīng)以一種客觀和現(xiàn)實(shí)的態(tài)度去面對(duì)篩查試驗(yàn)結(jié)果幾個(gè)相對(duì)常見(jiàn)且重要的熒光核型均質(zhì)型核點(diǎn)型著絲點(diǎn)型核仁型粗顆粒型核膜型.核糖體P蛋白線粒體型肌動(dòng)蛋白常見(jiàn)且重要核型的標(biāo)準(zhǔn)核型表現(xiàn)相對(duì)典型陽(yáng)性率相對(duì)較高靶抗原相對(duì)明確應(yīng)重視AN

4、A滴度的檢測(cè)抗體滴度的臨床意義1、明確界定自身免疫性疾病患者；2、作為疾病進(jìn)程、臨床療效和病情預(yù)后及轉(zhuǎn)歸等的判斷指標(biāo)當(dāng)前國(guó)際主流ANA間接免疫熒光法檢測(cè)系統(tǒng)廣泛采用的起始稀釋度為1:40。即該檢測(cè)系統(tǒng)的正常參考范圍為1:40。梯度稀釋時(shí)的稀釋因子為1:2。HOB公司產(chǎn)品推薦按照1:80開(kāi)展稀釋。 熒光強(qiáng)弱及血清稀釋度熒光強(qiáng)弱判讀 觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度一般用“+”號(hào)表示?！啊睘闊o(wú)或僅見(jiàn)極微弱熒光；“+”為熒光較弱但清楚可見(jiàn)；“+”為熒光明亮；“+”為耀眼的強(qiáng)熒光。臨床上根據(jù)特異性熒光強(qiáng)度達(dá)“+”以上判定為陽(yáng)性抗體梯度稀釋起始稀釋：1:80梯度稀釋（稀釋因子2）1:1601:3201:6401

5、:12801:2560直至抗體轉(zhuǎn)陰各稀釋度的反應(yīng)性抗體滴度臨床意義1:801:640陽(yáng)性+1:80陽(yáng)性，需結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合判斷陽(yáng)性+1:160陽(yáng)性，提示可能存在相關(guān)疾病陽(yáng)性+弱+1:320明確陽(yáng)性，提示可能存在相關(guān)疾病陽(yáng)性+陽(yáng)性+1:640中等陽(yáng)性，提示可能存在相關(guān)疾病陽(yáng)性+陽(yáng)性+1:1280強(qiáng)陽(yáng)性，高度提示存在相關(guān)疾病陽(yáng)性+陽(yáng)性+1:2560極強(qiáng)的陽(yáng)性，高度提示存在相關(guān)疾病。ANA熒光滴度判讀舉例HOB公司間接免疫熒光法產(chǎn)品系列產(chǎn)品系列基質(zhì)檢測(cè)項(xiàng)目ANA篩查HEp-2細(xì)胞ANA各種不同核型dsDNA綠蠅短膜蟲(chóng)抗dsDNA抗體AKA大鼠食管抗角蛋白抗體ANCA中性粒細(xì)胞乙醇和甲醛固定抗中性粒細(xì)

6、胞胞漿抗體組織器官大鼠肝/腎/胃ASMAPCAAMALKM-1LC-1HEp-2細(xì)胞產(chǎn)品系列 （舉例）166孔1010孔812孔ANA靶抗原確認(rèn)實(shí)驗(yàn)條帶酶免分析法檢測(cè)ANA基本原理LIA檢測(cè)方法原理底物顏色反應(yīng)硝酸纖維膜IgG抗體堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgG抗體ANA譜系列U1-nRNP 和 Sm抗原SLE: 5-30%SLE: 15-40%MCTD: 95-100%功能:參與mRNA前體的剪切SS-A (Ro-60), Ro-52 和SS-BAnti-SS-A (60 kDa)干燥綜合征.:40-95%SLE: 20-60%新生兒狼瘡: 96%Anti-SS-B干燥綜合征.:40-95%SLE

7、: 10-20%新生兒狼瘡: 78%Anti-Ro-52 (52 kDa)非特異功能: 調(diào)控RNA翻譯功能:RNA聚合酶III輔助蛋白XScl-70 (DNA-拓?fù)洚悩?gòu)酶I)功能: 在DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過(guò)程中完成雙鏈解螺旋疾病:硬化癥: 50% - 75%Anti-Scl-70 特點(diǎn)局限型和彌散型硬化癥病中的陽(yáng)性率分別為10% 和48%?？筍cl-70抗體陽(yáng)性的患者通常病情發(fā)展快、預(yù)后差、多器官累及。PM-Scl抗原: 幾種多肽復(fù)合物(分子量間于20-100kDa)，主要的靶抗原為100 kDa 相關(guān)疾病: 硬化癥:2% - 5% 肌炎:8%重疊綜合征:24%Jo-1抗原:組氨酰tRNA合成酶(

8、50 kDa),細(xì)胞漿中的磷蛋白相關(guān)疾病: 多肌炎/皮肌炎的血清學(xué)標(biāo)志，陽(yáng)性率為25- 35%，當(dāng)伴有肺間質(zhì)纖維化的多肌炎，陽(yáng)性率可高達(dá)70%。 著絲點(diǎn)抗原：動(dòng)粒中的4種蛋白：A (17 kDa), B (80 kDa), C(140 kDa), D蛋白 (50 kDa)。著絲點(diǎn)蛋白 B為主要的靶抗原 (與IIF：100%)功能: 分裂期紡垂體的附著點(diǎn) 相關(guān)疾病:硬化癥:18%局限型: 80% - 95%(CREST綜合征) PCNA:細(xì)胞增殖相關(guān)核抗原I型抗原:DNA聚合酶的輔助蛋白 發(fā)揮控制細(xì)胞周期的作用相關(guān)疾病: 系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，但其發(fā)生率僅為3%。 染色體結(jié)構(gòu)示意圖DNA核

9、小體染色體染色質(zhì)組蛋白dsDNA抗原：雙鏈DNA，天然DNA(脫氧核糖核酸骨架)相關(guān)疾?。篸sDNA: 為SLE的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一，陽(yáng)性率為60-90%，不同的檢測(cè)方法診斷特異性差別較大。抗體滴度與疾病的活動(dòng)性、狼瘡腎炎的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)具有相關(guān)性。組蛋白抗原:H1, H2A, H2B, H3, H4，H2A-H2B，H3-H4(主要的靶抗原為H1和H2B)相關(guān)疾病: 藥物誘導(dǎo)性 LE: 100%(抗組蛋白抗體是該病唯一的標(biāo)志性抗體)各種結(jié)締組織?。篠LE: 30-80% SSc: 30% SS: 10%核小體抗原:組蛋白和DNA形成的復(fù)合物相關(guān)疾病: SLE：高特異性指標(biāo)，陽(yáng)性率為50-95%，特異性幾乎100%，抗核小體抗體可獨(dú)立于抗dsDNA抗體單獨(dú)出現(xiàn)，因而抗核小體抗體與抗dsDNA抗體聯(lián)合檢測(cè)，可提高SLE的血清學(xué)檢出率。40 S亞基60 S亞基P0P1P1P2P2抗原:核糖體60S 亞基中的3種蛋白質(zhì):P0, P1, P2. 具備相同的碳端抗原位點(diǎn)核糖體 P蛋白相關(guān)疾病: SLE:為SLE的高特異性指標(biāo)，陽(yáng)性率為5-15%，常見(jiàn)于神經(jīng)狼瘡。AMA與AMA-M2靶抗原:線粒體亞結(jié)構(gòu)上幾種生化性質(zhì)明確的物質(zhì)