-第02章蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能課件

1、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能第2章Structure and Function of Protein什么是蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)(protein)是由許多氨基酸(amino acids)構(gòu)成的具有特定空間結(jié)構(gòu)的高分子有機(jī)物。蛋白質(zhì)在生命活動中的重要作用生物催化作用免疫保護(hù)作用運動與支持作用運輸和儲存作用代謝調(diào)節(jié)作用控制生長和分化接收和傳遞信息生物膜高等動物記憶和識別氧化供能抗凍蛋白（antifreeze protein ）熒光抗凍蛋白裝飾的冰晶體 抗凍蛋白，附著在冰晶體表面，抑制冰晶體生長，防止有機(jī)體凍傷。 蛋白質(zhì)的分子組成The Molecular Component of Protein第一節(jié)組成蛋白質(zhì)的元

2、素主要有C、H、O、N和 S。 有些蛋白質(zhì)含有少量磷或金屬元素鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬，個別蛋白質(zhì)還含有碘 。 各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近，平均為16。 由于體內(nèi)的含氮物質(zhì)以蛋白質(zhì)為主，因此，只要測定生物樣品中的含氮量，就可以根據(jù)以下公式推算出蛋白質(zhì)的大致含量：100克樣品中蛋白質(zhì)的含量 (g %)= 每克樣品含氮克數(shù) 6.251001/16%蛋白質(zhì)元素組成的特點舉例：一個生物樣品的含氮量為5%，它的蛋白質(zhì)含量為： （ ）A. 8.8% B. 12.5% C. 16.0% D.38.0% E. 31.25%三聚氰胺事件一、氨基酸 存在自然界中的氨基酸有300余種，但組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸僅有20種

3、，且均屬 L-氨基酸 （甘氨酸除外）。H甘氨酸CH3丙氨酸L-氨基酸的通式RC+NH3COO-H(一)氨基酸的結(jié)構(gòu)特點氨基酸的共同特點：（1）兩性電解質(zhì)（2）除甘氨酸外都是L 型氨基酸（3）側(cè)鏈R基團(tuán)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)不同非極性疏水性氨基酸極性中性氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸(二)氨基酸的分類1.依側(cè)鏈R基團(tuán)的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)分:非極性疏水性氨基酸 極性中性氨基酸帶正電荷的堿性氨基酸帶負(fù)電荷的酸性氨基酸幾種特殊氨基酸 脯氨酸（亞氨基酸）CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2 半胱氨酸 +胱氨酸二硫鍵-HH-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+N

4、H3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH32.營養(yǎng)學(xué)分類必需氨基酸：賴、色、苯丙、甲硫、蘇、亮、 異亮、纈非必需氨基酸：12種3. 根據(jù)氨基酸結(jié)構(gòu)分類 （1）脂肪族氨基酸：甘、丙、絲、蘇、半胱、甲硫、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬、谷、精、賴。 （2）支鏈氨基酸：纈、亮、異亮。 （3）芳香族氨基酸：苯丙、酪、色。 （4）雜環(huán)氨基酸：組、色。 （5）雜環(huán)亞氨基酸：脯(三) 氨基酸的理化性質(zhì)1. 兩性解離及等電點氨基酸是兩性電解質(zhì)，

5、其解離程度取決于所處溶液的酸堿度。 等電點(isoelectric point, pI) 在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電中性。此時溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點。pH=pIpHpI+H+pHpI氨基酸的兼性離子 陽離子陰離子H+2. 紫外吸收性質(zhì)色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在 280 nm 附近。大多數(shù)蛋白質(zhì)含有這兩種氨基酸殘基，所以測定蛋白質(zhì)溶液280nm的光吸收值是分析溶液中蛋白質(zhì)含量的快速簡便的方法。3. 氨基酸與茚三酮反應(yīng)生成藍(lán)紫色化合物氨基酸與茚三酮水合物共熱，可生成藍(lán)紫色化合物，其最大吸收峰在570nm處。由于此吸收峰值與氨基酸的

6、含量存在正比關(guān)系，因此可作為氨基酸定量分析方法。二、肽肽鍵是由一個氨基酸的-羧基與另一個氨基酸的-氨基脫水縮合而形成的化學(xué)鍵。（一）肽 (peptide)與肽鍵(peptide bond)+-HOH甘氨酰甘氨酸肽鍵肽是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。兩分子氨基酸縮合形成二肽，三分子氨基酸縮合則形成三肽肽鏈中的氨基酸分子因為脫水縮合而基團(tuán)不全，被稱為氨基酸殘基(residue)。由十個以內(nèi)氨基酸相連而成的肽稱為寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相連形成的肽稱多肽(polypeptide)。N 末端：多肽鏈中有游離-氨基端C 末端：多肽鏈中有游離-羧基端多肽鏈有兩端：丙氨酰酪氨酰

7、天冬氨酰甘氨酸（二）生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH)氧化型谷胱甘肽（GSSG）GSH過氧化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH還原酶NADPH+H+ NADP+ GSH與GSSG間的轉(zhuǎn)換 體內(nèi)許多激素屬寡肽或多肽 神經(jīng)肽(neuropeptide)2.多肽類激素及神經(jīng)肽蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)The Molecular Structure of Protein 第二節(jié)蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)包括: 高級結(jié)構(gòu)一級結(jié)構(gòu)(primary structure)二級結(jié)構(gòu)(secondary structure)三級結(jié)構(gòu)(tertiary structure)四級結(jié)構(gòu)(quat

8、ernary structure)定義:蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)指在蛋白質(zhì)中氨基酸的數(shù)目、排列順序及共價連接。氨基酸排列順序從N-端至C-端的。一、蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)主要的化學(xué)鍵:肽鍵，有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵。 一級結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。二、蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu) 蛋白質(zhì)構(gòu)象又分為主鏈構(gòu)象和側(cè)鏈構(gòu)象，主鏈構(gòu)象指多肽鏈上各原子的排布及相互關(guān)系；側(cè)鏈構(gòu)象是指各氨基酸側(cè)鏈基團(tuán)中原子的排布及彼此關(guān)系。 主鏈構(gòu)象決定側(cè)鏈基團(tuán)的排布，側(cè)鏈構(gòu)象影響主鏈構(gòu)象的卷曲和折疊，二者相互依存，相互影響。（一）蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu) (secondary structure)蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu)，即該段

9、肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象 。定義: 主要的化學(xué)鍵：氫鍵 肽單元參與肽鍵的6個原子C1、C、O、N、H、C2位于同一平面，此同一平面上的6個原子構(gòu)成了所謂的肽單元 (peptide unit) 。 -螺旋 ( -helix) -折疊 (-pleated sheet) -轉(zhuǎn)角 (-turn) 無規(guī)卷曲 (random coil) 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)是以一級結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的。一段肽鏈其氨基酸殘基的側(cè)鏈適合形成-螺旋或-折疊，它就會出現(xiàn)相應(yīng)的二級結(jié)構(gòu)。1. -螺旋(-helix)Linus Pauling Robert Corey-螺旋的結(jié)構(gòu)特點:為一右手螺旋

10、，螺旋每圈包含3.6個氨基酸殘基，螺距為0.54nm，每個氨基酸殘基向上平移0.15nm，直徑0.23nm。相鄰2圈螺旋間第1個肽單位的C=O與第4個肽單位的N-H形成氫鍵，氫鍵方向與螺旋縱軸平行。 肽鏈中氨基酸殘基的R基團(tuán)均伸向螺旋的外側(cè)，其空間形狀、大小及電荷對-螺旋的形成和穩(wěn)定有重要的影響。 2.-折疊（sheet)Tu-折疊的結(jié)構(gòu)特點(1) 多肽鏈充分伸展，由若干條肽段或肽鏈平行或反平行排列組成片狀結(jié)構(gòu)。相鄰肽平面呈110夾角，主鏈骨架伸展呈鋸齒狀。 (2) 相鄰主鏈之間靠氫鍵維系。氫鍵的方向與肽鏈長軸垂直。肽鏈中氨基酸的殘基的R側(cè)鏈分布在片層上下。(3) 兩端肽鏈可以是平行的，也可以

11、是反平行的。反平行式更為穩(wěn)定。-轉(zhuǎn)角 第一個氨基酸殘基的C=O與第四個殘基的NH形成氫鍵3. -轉(zhuǎn)角（-turn)無規(guī)卷曲（random coil）無規(guī)卷曲是用來闡述沒有確定規(guī)律性的那部分肽鏈結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)分子中各種二級結(jié)構(gòu)（二）超二級結(jié)構(gòu)(supersecondary structure)超二級結(jié)構(gòu)又稱模體（motif），是指在多肽鏈內(nèi)順序上相互鄰近的二級結(jié)構(gòu)常常在空間折疊中靠近，彼此相互作用，形成規(guī)則的二級結(jié)構(gòu)聚集體。模體常見的形式鈣結(jié)合蛋白中結(jié)合鈣離子的模體鋅指結(jié)構(gòu)（三）蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)(tertiary structure)整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置。即肽鏈中所有原子在三維空間

12、的排布位置。定義:磷酸甘油酸激酶的結(jié)構(gòu)域 結(jié)構(gòu)域(domain)： 是蛋白質(zhì)構(gòu)象中特定空間區(qū)域。在較大蛋白質(zhì)分子中，由多肽鏈上相鄰的超二級結(jié)構(gòu)緊密聯(lián)系，形成獨立的結(jié)構(gòu)單位。主要的化學(xué)鍵(次級鍵):氫鍵離子鍵疏水相互作用 又稱疏水鍵，是穩(wěn)定三級結(jié)構(gòu)最主要的作用力范德華力二硫鍵（共價鍵）A氫鍵； B.二硫鍵；C. 疏水作用；D.鹽鍵；E. 范德華力 肌紅蛋白 (Mb) 一級結(jié)構(gòu):153個氨基酸的排列順序二級結(jié)構(gòu):A-H 共8個-螺旋,之間以無規(guī)卷曲相連三級結(jié)構(gòu):球狀分子,親水R基位于表面,疏水R基位于分子內(nèi)部,形成疏水口袋,血紅素位于口袋中亞基之間的結(jié)合主要是疏水作用,氫鍵和離子鍵。四、蛋白質(zhì)的四

13、級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為蛋白質(zhì)的四級結(jié)構(gòu)。有些蛋白質(zhì)分子含有二條或多條多肽鏈，每一條多肽鏈都有完整的三級結(jié)構(gòu)，稱為蛋白質(zhì)的亞基 (subunit)。由2個亞基組成的蛋白質(zhì)四級結(jié)構(gòu)中，若亞基分子結(jié)構(gòu)相同，稱之為同二聚體(homodimer)，若亞基分子結(jié)構(gòu)不同，則稱之為異二聚體(heterodimer)。 血紅蛋白的四級結(jié)構(gòu) 某些蛋白質(zhì)分子可進(jìn)一步聚合成聚合體(polymer)。聚合體中的重復(fù)單位稱為單體（monomer)，聚合體可按其中所含單體的數(shù)量不同而分為二聚體、三聚體寡聚體（oligomer)和多聚體（polymer)。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系

14、The Relation of Structure and Function of Protein第三節(jié)（一）一級結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ)一、蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系牛核糖核酸酶的一級結(jié)構(gòu)二硫鍵 天然狀態(tài)，有催化活性 尿素、 -巰基乙醇 去除尿素、痕量-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性分子伴侶(molecular chaperon)1. 防止新生肽鏈的錯誤折疊和聚合2. 肽鏈快速折疊成正確的維構(gòu)型并成熟為具有完整結(jié)構(gòu)和功能的蛋白質(zhì)HSP (heat shock protein)伴侶蛋白在蛋白質(zhì)折疊中的作用（二）一級結(jié)構(gòu)是功能的基礎(chǔ) 一級結(jié)構(gòu)相似的蛋白質(zhì)具有相似的高級結(jié)構(gòu)與功能胰島素氨基酸殘基序號A5A

15、6A10B30人ThrSerIleThr豬ThrSerIleAla狗ThrSerIleAla兔ThrGlyIleSer牛AlaGlyValAla羊AlaSerValAla馬ThrSerIleAla對一級結(jié)構(gòu)的比較,可以反應(yīng)分子進(jìn)化一些廣泛存在于生物界的蛋白質(zhì)如細(xì)胞色素(cytochrome C)，比較它們的一級結(jié)構(gòu)，可以幫助了解物種進(jìn)化間的關(guān)系。 分子病: 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)改變引起疾病稱為“分子病”。 因為蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)中氨基酸排列順序是由于遺傳密碼所決定，氨基酸的改變最根本原因是DNA堿基順序的改變所致，因此了解一級結(jié)構(gòu)的就能從分子水平診斷和治療遺傳病。鐮狀紅細(xì)胞貧血例：鐮刀形紅細(xì)胞貧血N-v

16、al his leu thr pro glu glu C(146)HbS 肽鏈HbA 肽 鏈N-val his leu thr pro val glu C(146)關(guān)鍵部位氨基酸變換，嚴(yán)重影響蛋白質(zhì)功能二、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系（一）蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)決定其生物學(xué)功能 蛋白質(zhì)的功能不僅與一級結(jié)構(gòu)有關(guān)，更重要的依賴于蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象。例：各種蛋白質(zhì)前體的加工與激活 酶原的激活 激素前體的激活賴?yán)i天天天天甘異賴?yán)i天天天天纈組絲SSSS46183甘異纈組絲SSSS腸激酶胰蛋白酶活性中心胰蛋白酶原的激活過程 蛋白質(zhì)分子可與某些小分子物質(zhì)相互作用，致使構(gòu)象發(fā)生輕微的改變，生物學(xué)效應(yīng)隨之發(fā)生較大的改變。

17、這種作用稱為變構(gòu)作用或別構(gòu)效應(yīng)。 （二）蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象變化與功能肌紅蛋白/血紅蛋白含有血紅素輔基血紅素結(jié)構(gòu) 血紅素與蛋白質(zhì)穩(wěn)定結(jié)合主要靠兩種作用：一是血紅素分子中丙氨酸側(cè)鏈與肽鏈中氨基酸側(cè)鏈相連，另一種作用肽鏈中組氨酸殘基還與Fe2+形成配位結(jié)合。 血紅蛋白(hemoglobin，Hb)血紅蛋白具有4個亞基組成的四級結(jié)構(gòu)，每個亞基可結(jié)合1個血紅素并攜帶1分子氧。Hb亞基之間通過8對鹽鍵，使4個亞基緊密結(jié)合而形成親水的球狀蛋白。 Hb與Mb一樣能可逆地與O2結(jié)合， Hb與O2結(jié)合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分?jǐn)?shù)（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。血紅蛋白亞基構(gòu)象變化可影響亞基與氧結(jié)合

18、肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線協(xié)同效應(yīng)(cooperativity)一個寡聚體蛋白質(zhì)的一個亞基與其配體結(jié)合后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象，稱為協(xié)同效應(yīng)。 如果是促進(jìn)作用則稱為正協(xié)同效應(yīng) (positive cooperativity)如果是抑制作用則稱為負(fù)協(xié)同效應(yīng)(negative cooperativity)變構(gòu)效應(yīng)(allosteric effect)蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變伴隨其功能的變化，稱為變構(gòu)效應(yīng)。Hb與Mb在空間結(jié)構(gòu)上的不同,決定 它們在體內(nèi)發(fā)揮不同的生理功能蛋白質(zhì)構(gòu)象改變可引起疾病蛋白質(zhì)構(gòu)象疾?。喝舻鞍踪|(zhì)的折疊發(fā)生錯誤，盡管其一級結(jié)構(gòu)不變，但蛋白

19、質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴(yán)重時可導(dǎo)致疾病發(fā)生。蛋白質(zhì)構(gòu)象改變導(dǎo)致疾病的機(jī)理：有些蛋白質(zhì)錯誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的病理改變。這類疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、克-雅病、瘋牛病等。瘋牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一組人和動物神經(jīng)退行性病變。正常的PrP富含-螺旋，稱為PrPcPrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為-折疊的PrPsc，從而致病。PrPc-螺旋PrPsc-折疊細(xì)胞型致病型瘋牛病中的蛋白質(zhì)構(gòu)象改變1982 , the Prion Theor

20、y庫魯病(kuru)第四節(jié)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)及其分離純化一、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團(tuán)，在一定的溶液pH條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)。 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時，蛋白質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時溶液的pH稱為蛋白質(zhì)的等電點。蛋白質(zhì)的等電點( isoelectric point, pI)（一）兩性解離及等電點（二）蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)屬于生物大分子之一，分子量可自1萬至100萬之巨，其分子的直徑可達(dá)1100nm，為膠粒范圍之內(nèi)。顆粒表面電荷水化膜蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素:（三）蛋白質(zhì)的變性與凝固在某些理

21、化因素的作用下，蛋白質(zhì)中維系其空間結(jié)構(gòu)的次級鍵（甚至二硫鍵）斷裂，使其空間結(jié)構(gòu)遭受破壞，造成其理化性質(zhì)的改變和生物學(xué)活性的喪失。蛋白質(zhì)的變性(denaturation)造成變性的因素:如加熱、乙醇等有機(jī)溶劑、強酸、強堿、重金屬離子及生物堿試劑等 。 變性的本質(zhì):破壞非共價鍵和二硫鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。若蛋白質(zhì)變性程度較輕，去除變性因素后，蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能，稱為復(fù)性(renaturation) 。 天然狀態(tài)，有催化活性 尿素、 -巰基乙醇 去除尿素、-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象。蛋白質(zhì)沉淀中性鹽有機(jī)溶劑生物堿試劑重金屬離子蛋白質(zhì)變性后的絮狀

22、物加熱可變成比較堅固的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。 蛋白質(zhì)的凝固作用(protein coagulation)凝固是蛋白質(zhì)變性后進(jìn)一步發(fā)展的結(jié)構(gòu)。變性的蛋白質(zhì)容易沉淀，變性的蛋白質(zhì)不一定沉淀，沉淀的蛋白質(zhì)不一定變性，凝固的蛋白質(zhì)均已變性而且不再溶解。 應(yīng)用舉例:臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用來消毒及滅菌。此外, 防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如疫苗等）的必要條件。 （四）蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)1. 茚三酮反應(yīng) 2. 雙縮脲反應(yīng) 蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反應(yīng)可用來檢測蛋白質(zhì)水解程度。3酚試劑反應(yīng) 蛋白質(zhì)分子中酪氨酸的酚基

23、與酚試劑作用，生成藍(lán)色絡(luò)合物,該藍(lán)色物質(zhì)在650nm下有強吸收。在一定范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)濃度與A650光吸收成正相關(guān)，因此可以用來進(jìn)行蛋白質(zhì)定量 （五）蛋白質(zhì)的紫外吸收光譜特性 蛋白質(zhì)分子中酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸含有共軛雙鍵，在280nm紫外光譜處，有特征性的最大吸收峰。 280nm的吸收值常用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)濃度估算公式 C=1.45A2800.74A260來。二、蛋白質(zhì)的分離和純化 破碎組織和細(xì)胞，將蛋白質(zhì)溶解于溶液中的過程稱為蛋白質(zhì)的提取。 將溶液中蛋白質(zhì)相互分離而取得單一蛋白組分的過程稱為蛋白質(zhì)的純化。 （一）改變蛋白質(zhì)的溶解度鹽析(salt precipitation)是

24、用高濃度的中性鹽將蛋白質(zhì)從溶液中析出的方法。鹽析、有機(jī)溶劑沉淀、調(diào)節(jié)pH值、改變溫度硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉 對不同的蛋白質(zhì)進(jìn)行鹽析時，需要采用不同的鹽濃度和不同的pH有機(jī)溶劑沉淀法：酒精、甲醇、丙酮等能破壞蛋白質(zhì)的水化膜使蛋白質(zhì)沉淀，在等電點時沉淀的效果更好。 為防止蛋白質(zhì)的變性，常需在低溫條件下快速進(jìn)行（二）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同的分離方法離心(centrifugation) 利用機(jī)械的快速旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力，將不同密度的物質(zhì)分離開的方法。 蛋白質(zhì)溶液在高速離心時，由于離心力的作用，蛋白質(zhì)會下沉，這就是蛋白質(zhì)的沉降現(xiàn)象。 蛋白質(zhì)分子在單位力場的沉降速度稱沉降系數(shù)（S）。通常情況下，分子愈大，沉降愈快，沉降系數(shù)愈高。 2. 透析與超濾應(yīng)用正壓或離心力使蛋白質(zhì)溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。透析(dialysis)超濾法（ultrafiltration）利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開的方法。透析法分離蛋白質(zhì)和脫鹽 超濾