檢測(cè)方法比較

1、激光散射速率法:透射比濁測(cè)定法免疫層析法:激光散射技術(shù)是指用激光作光源，在入射光方向以外，借檢測(cè)散射光強(qiáng)度、頻移及其角度依賴(lài)等而得到粒子重量、尺寸、分布及聚集態(tài)結(jié)構(gòu)等信息的方法 的統(tǒng)稱(chēng)，有著廣闊的用途。就檢測(cè)納米材料而言，主要涉及頻移及其角度依賴(lài)性的檢測(cè)，這 種散射技術(shù)又稱(chēng)動(dòng)態(tài)光散射、準(zhǔn)彈性光散射及光子相關(guān)光譜，分別以測(cè)定參數(shù)的性質(zhì)、能量 轉(zhuǎn)移的大小及測(cè)定方法的原理而得名。散射比濁法是根據(jù)待驗(yàn)樣品在凝固過(guò)程中散射光的變化來(lái)確定 檢測(cè)終點(diǎn)的。在該方法中檢測(cè)通道的單色光源與光探測(cè)器呈90直角，當(dāng)向樣品中加入凝血 激活劑后，隨樣品中纖維蛋白凝塊的形成過(guò)程，樣品的散射光強(qiáng)度逐步增加。當(dāng)樣品完全凝 固以

2、后，散射光的強(qiáng)度不再變化，通常是把凝固的起始點(diǎn)作為0%，凝固終點(diǎn)作為100%， 把50%作為凝固時(shí)間。光探測(cè)器接收這一光學(xué)的變化，將其轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，經(jīng)過(guò)放大再被 傳送到監(jiān)測(cè)器上進(jìn)行處理，描出凝固曲線(xiàn),是測(cè)定入射光強(qiáng)度由于溶液中粒子的散射而降低的程度，它并不直接測(cè)定散射的光強(qiáng)。這一點(diǎn)與分光光度測(cè)定法極為類(lèi)似。用這種方法時(shí)，多用聚乙二醇 （PEG）作為反應(yīng)增強(qiáng)劑。這種非離子型聚合物可以降低抗原抗體復(fù)合物的溶解度。是近幾年來(lái)國(guó)外興起的一種快速診斷技術(shù)，其原理是將特異的 抗體先固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶，當(dāng)該干燥的硝酸纖維素一端浸入樣品（尿液或血清） 后，由于毛細(xì)管作用，樣品將沿著該膜向前移動(dòng)，當(dāng)移

3、動(dòng)至固定有抗體的區(qū)域時(shí)，樣品中相 應(yīng)的抗原即與該抗體發(fā)生特異性結(jié)合，若用免疫膠體金或免疫酶染色可使該區(qū)域顯示一定的 顏色，從而實(shí)現(xiàn)特異性的免疫診斷。目的：評(píng)估透射免疫比濁法和速率散射比濁法檢測(cè)C反應(yīng)蛋白（CRP）的靈敏度和特異性.方法： 用免疫透射比濁法和速率散射比濁法同時(shí)檢測(cè)了 80例各種患者血清中CRP濃度.結(jié)果：兩種方 法在 820 mg/L、2040 mg/L、4080 mg/L、80160 mg/L、160300 mg/L 范圍內(nèi)測(cè)定 C反應(yīng)蛋白的相關(guān)系數(shù)是0.990、0.996、0.995、0.992、0.997,說(shuō)明兩種方法的相關(guān)性是良好 的，而在低值18 mg/L的測(cè)定中兩方法

4、的相關(guān)系數(shù)為0.928.結(jié)論：速率散射免疫比濁法在低值 和高值測(cè)定中可以得到較為準(zhǔn)確的CRP檢測(cè)結(jié)果.【摘要】目的：評(píng)估透射免疫比濁法和速率散射比濁法檢測(cè)C反應(yīng)蛋白(CRP)的靈敏度和特異性.方法：用免 疫透射比濁法和速率散射比濁法同時(shí)檢測(cè)了 80例各種患者血清中CRP濃度.結(jié)果:兩種方法在820mg / L、 2040mg/ L、4080mg/ L、80160mg/ L、160300mg/ L范圍內(nèi)測(cè)定C反應(yīng)蛋白的相關(guān)系數(shù)是0.990、 0. 996、0. 995、0. 992、0. 997.說(shuō)明兩種方法的相關(guān)性是良好的，而在低值18mg / L的測(cè)定中兩方法 的相關(guān)系數(shù)為0. 928.結(jié)論

5、：速率散射免疫比濁法在低值和高值測(cè)定中可以得到較為準(zhǔn)確的CRP檢測(cè)結(jié)果.【關(guān)鍵詞】透射免疫比濁法散射免疫比濁法C反應(yīng)蛋白在急性應(yīng)急性疾病時(shí)如大手術(shù)、重度創(chuàng)傷、心肌梗 死、嚴(yán)重感染、腫瘤等，血漿中某些蛋白濃度可明顯增高或降低，這種現(xiàn)象稱(chēng)為急性時(shí)相反應(yīng),這些蛋白統(tǒng)稱(chēng) 為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白.最具有代表性的急性時(shí)相蛋白首推C反應(yīng)蛋白(CRP),CRP是目前臨床上最有用的急性 時(shí)相反應(yīng)的一個(gè)敏感指標(biāo).CRP作為炎癥標(biāo)志物，本身盡管為非特異性的，但對(duì)于細(xì)菌感染、各種炎癥過(guò)程及組 織壞死與損傷及其恢復(fù)期的篩檢、監(jiān)測(cè)、病情評(píng)估與療效判斷，都具有重要的意義J.CRP的檢測(cè)方法目前使 用比較多的有膠乳凝集試驗(yàn)、免疫

6、沉淀法、免疫濁度法和標(biāo)記免疫測(cè)定法等，而其中的透射免疫比濁法和速 率散射比濁法是目前公認(rèn)為檢測(cè)CRP較為精確的兩種方法.為了評(píng)估兩種方法的靈敏度和特異性，我們收集 了 80份血清，用免疫透射比濁法和速率散射比濁法分別進(jìn)行CRP的檢測(cè)，并作了結(jié)果比較.一、材料與方法1、 標(biāo)本來(lái)源樣本血清來(lái)源于80例本院門(mén)診和住院病人,其中骨折病員21例,確診的惡性腫瘤病人15例,急性肺 炎病員22例，冠心病病人10例,外科手術(shù)病員12例.采集空腹血后及時(shí)分離血清，并置-20C保存?zhèn)溆?2、儀 器日立7170型自動(dòng)生化分析儀,BeckmanArray 360特定蛋白檢測(cè)系統(tǒng).3、試劑透射免疫比濁法試劑盒及配 套的

7、校準(zhǔn)品由上?；骺萍加邢薰咎峁?，批號(hào)為ISEP03.速率散射免疫比濁法：Beckman公司提供的C反應(yīng) 蛋白試劑及C反應(yīng)蛋白定標(biāo)卡，定標(biāo)液,批號(hào)為M2070527. 4、方法(1)免疫透射比濁法將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋配制 成5個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品-10mg/L、19mg / L、38mg / L、76mg / L、162mg / L,進(jìn)行5點(diǎn)定標(biāo)，形成標(biāo)準(zhǔn)曲 線(xiàn).樣本為20 uL,試劑1為180 uL,試劑2為35uL,吸光度為340nm,5分鐘后進(jìn)行透射比濁.(2)速率散射免 疫比濁法將該公司配備的定標(biāo)卡進(jìn)行校準(zhǔn)，樣本量為200l,試劑量為50,0. 5分鐘完成比濁測(cè)定.5、統(tǒng)計(jì)方法 檢驗(yàn)結(jié)果以xs表

8、示，以SPSS10. 0軟件包中Studentt檢驗(yàn)作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.二、結(jié)果不同CRP濃度同時(shí)以?xún)?種方法檢測(cè)所得結(jié)果如表1所示.三、討論人體CRP與相應(yīng)的抗血清在液相中反應(yīng)，生成抗原抗體復(fù)合物， 并產(chǎn)生濁度，其濁度的高低與標(biāo)本中的CRP濃度呈正比，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),即可計(jì)算出標(biāo)本中的CRP的濃度，這是 透射免疫比濁法的測(cè)定原理.速率散射免疫比濁法是一種抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動(dòng)態(tài)測(cè)定法J,將各單位時(shí)間 內(nèi)CRP與抗血清形成復(fù)合物的速率及復(fù)合物顆粒產(chǎn)生的散射信號(hào)連接在一起，即形成動(dòng)態(tài)動(dòng)力學(xué)的速率散射 免疫比濁法.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩種方法在820mg / L、2040mg / L,4080mg / L,801

9、60mg / L,160 300mg / L范圍內(nèi)測(cè)定C反應(yīng)蛋白的相關(guān)系數(shù)是0. 990、0. 996、0. 995、0. 992、0. 997,說(shuō)明兩種方法 的相關(guān)性是良好的.而在低值18mg / L的測(cè)定中兩方法的相關(guān)系數(shù)為0. 928，由于在透射免疫比濁法檢測(cè) 中，如果抗原抗體復(fù)合物的數(shù)量太少，對(duì)光通量的影響不大，如果復(fù)合物分子太小則阻擋不了光線(xiàn)的通過(guò)，在低 濃度的C反應(yīng)蛋白血清測(cè)定中會(huì)有所影響.而速率散射免疫比濁法是以測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)抗原抗體反應(yīng)復(fù)合物 形成的最快時(shí)間段的信號(hào)值，產(chǎn)生的散射信號(hào)最強(qiáng),形成最大速率散射信號(hào)峰值.理論上講，該測(cè)定不受本底散 射信號(hào)的干擾，使檢測(cè)快速，靈敏度高,

10、對(duì)檢測(cè)微量的C反應(yīng)蛋白比較理想6.在高濃度的C反應(yīng)蛋白測(cè)定中， 由于抗原過(guò)量，透射比濁法測(cè)定時(shí),CRP濃度明顯超出了檢出限上限，發(fā)生測(cè)定結(jié)果顯著低于實(shí)際含量.而在速 率散射免疫比濁分析中，為保證準(zhǔn)確性和精確度，儀器設(shè)計(jì)有抗原過(guò)量檢測(cè)系統(tǒng),提示應(yīng)將待測(cè)樣本進(jìn)一步稀 釋?zhuān)匦逻M(jìn)行檢測(cè),以獲取全部抗原的真實(shí)濃度.由此看來(lái)，在比較試驗(yàn)中,速率散射免疫比濁法在低值和高值 測(cè)定中可以得到較為準(zhǔn)確的結(jié)果.目前巳有測(cè)定超敏CRP的免疫增強(qiáng)透射比濁法在日立7170A生化分析儀 上的應(yīng)用的報(bào)道,其檢測(cè)范圍在0. 12512. 5mg/L,具有更高的靈敏度，可以參考推廣應(yīng)用.參考文獻(xiàn)1 馮仁豐.急性相和C反應(yīng)蛋白J.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,1999,14(5)： 258259.2楊振修.C反應(yīng)蛋白的檢測(cè)J.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,1999,14(5)： 261262. 3Young B,GleesonM,Cripps AW. C-reactive protein： a critical reviewJ. Pathlogy,1991,23： 118224. 4楊溢.免疫比濁法測(cè)定血清C 一反應(yīng)蛋白(CRP)的評(píng)價(jià)J.四川 省衛(wèi)生管理干部學(xué)院學(xué)報(bào),2003,22(3)： 16