槐米中蘆丁、槲皮素的提取、分離及含量測(cè)定

1、Shanxi University綜合化學(xué)實(shí)驗(yàn)論文槐米中蘆丁、槲皮素的提取、分離及含量測(cè)定學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院姓名專業(yè)化學(xué)年級(jí)2011級(jí)指導(dǎo)老師2014年4月20日槐米中蘆丁、槲皮素的提取、分離及含量測(cè)定（山西大學(xué) 化學(xué)化工學(xué)院，山西 太原030006）摘要：采用堿溶液沉淀法，從槐米中提取蘆丁，用稀酸催化水解，得到水解產(chǎn)物槲皮 素，并用紫外分光光度法進(jìn)行定性、定量測(cè)定。關(guān)鍵詞：槐米；蘆??；槲皮素；堿溶液沉淀法；紫外光譜槐米中含有多種黃酮類物質(zhì)，如蘆丁、槲皮素等。其中槲皮素具有廣泛的生 理和藥理活性，它具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌等作用，槲皮素對(duì)惡性腫瘤生 長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的抑制作用是近年來一個(gè)十分活躍的研

2、究課題。蘆?。≧utin）亦稱蕓香苷（Rutionside），廣泛存在于多種植物中?；泵字?含量最高達(dá)1216%。蘆丁為維生素P類藥物，有助于保持毛細(xì)血管的正常彈性 和調(diào)節(jié)毛細(xì)管壁的滲透作用，臨床上用于治療高血壓的輔助藥物和毛細(xì)管性止血 藥。此外，對(duì)放射性傷害所引起的出血癥也有一定的治療作用。蘆丁為淡黃色針狀結(jié)品，含3分子結(jié)品水，其熔點(diǎn)為174-178C，不含水的 蘆丁熔點(diǎn)188C。蘆丁在沸水的溶解度相當(dāng)大（1:200），而在冷水中的溶解度很 ?。?:10000），溶于熱甲醇（1:7），冷甲醇（1:100），熱乙醇（1:30），冷乙醇 （1:300），難溶于乙酸乙酯，不溶于苯、氯仿、乙醇及石油

3、醚等溶劑，蘆丁分子 結(jié)構(gòu)中含有酚羥基，呈弱堿性，易溶于堿液中呈黃色，酸化后又析出，所以可用 水煮沸的方法提取。H0RutinQuercetin蘆丁中的苷鍵屬于縮醛結(jié)構(gòu)，易為稀酸催化水解，水解產(chǎn)物主要有苷元槲 皮素（quercetin）、鼠李糖和葡萄糖。槲皮素，即蕓香苷元，為黃色針品體，含 2分子結(jié)品水的槲皮素熔點(diǎn)313-314C，不含結(jié)品水的槲皮素熔點(diǎn)316C，溶于 熱乙醇(1:23)、冷乙醇(1:300)、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮等溶劑，不溶于苯、 氯仿、乙醚、石油醚和水中。利用紫外分光光度法先分別掃描出蘆丁、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品的紫外譜圖，再分別 掃描出樣品蘆丁、槲皮素的紫外譜圖，進(jìn)行對(duì)照后，根據(jù)吸

4、收峰峰形、最大吸收 峰位置是否一致，即可定性；根據(jù)朗伯一比爾定律，配置槲皮素標(biāo)品的系列溶液 做成標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可定量測(cè)出槲皮素的含量。1實(shí)驗(yàn)部分1.1試劑與儀器試劑：槐米、石灰乳、鹽酸、1 %硫酸水溶液、乙醇、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)樣品、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣品儀器：回流冷凝管、1000 ml三口燒瓶、250 ml圓底燒瓶、500 ml燒杯、50 ml容量瓶、25 ml容量瓶、研缽、電熱套、機(jī)械攪拌、離心機(jī)、布氏漏斗、紫外分光光度儀1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1蘆丁的提取(1)將粉碎好的槐米20g倒入裝有回流冷凝管的1000 ml三口燒瓶中，加入200 ml沸水，攪拌下加入石灰乳，調(diào)節(jié)pH 8-9，加熱微沸。30 min后，

5、趁熱用四層紗布過濾，得濾液。殘?jiān)瑯犹崛∫淮?，將兩次濾液合并，用鹽酸調(diào)節(jié)pH 3-4。稍冷后，放置冰箱中冷卻，待全部固體析出后，離心，用兩層濾紙抽濾，70C以下干燥，得3.5g青黃色固體。1.2.2.蘆丁的水解稱取1g制得的蘆丁，放入250mL圓底燒瓶中，加入1%硫酸水溶液100 ml,回流。微沸回流約40 min，瓶中黃棕色渾濁液逐漸變?yōu)榈狞S色液體，顏色不 再改變冷卻，抽濾，70C下干燥，制得0.58g黃色固體。1.2.3紫外光譜測(cè)定蘆丁和槲皮素的標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)液(實(shí)驗(yàn)室已配好)。分別稱取0.6mg蘆丁提取物和0.5mg槲皮素的提取物，用乙醇溶解在 50mL容量瓶中。以無水乙醇做空白溶液，紫外分光

6、光度法先分別掃描出蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、蘆 丁提取物的紫外譜圖，得圖1-1。由圖可知，蘆丁提取物的吸收峰峰形與蘆丁標(biāo) 準(zhǔn)物相同、最大吸收峰位置與蘆丁提取物一致，可定性確定提取物為蘆丁，且蘆 丁的吸收峰位置為258nm和363nm。同上一步，測(cè)槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品、槲皮素提取物的紫外譜圖，得圖1-2。由 圖可知，槲皮素提取物的吸收峰峰形與槲皮素標(biāo)準(zhǔn)物相同、最大吸收峰位置與槲 皮素提取物一致，可定性確定提取物為槲皮素，且得槲皮素的最大吸收峰位置為 256nm 和 373nm。稱得2.6mg槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品于50 ml容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度， 得濃度為52 mg/l的溶液分別移取上述貯液1ml、2 ml、3 ml

7、、4 ml、5 ml、 6 ml于25 ml容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，制得濃度分別為2.08、4.16、 6.24、8.32、10.4、12.48 ml/l的槲皮素標(biāo)準(zhǔn)溶液。以上步所測(cè)槲皮素吸收 波長(zhǎng)373nm為測(cè)定波長(zhǎng)，分別測(cè)出上述溶液的A值，以槲皮素濃度(單位為 2.08 mg/l)為橫坐標(biāo)，A值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得圖1-3?？芍鶞y(cè)溶 液中槲皮素的含量在橫軸對(duì)應(yīng)的數(shù)值為5.2109。2結(jié)果與討論2.1數(shù)據(jù)處理槐米中蘆丁的含量:3.5g x100% = 17.24%20.30g蘆丁中槲皮素的含量： x100% = 54.72%1.06g提取物中槲皮素的純度測(cè)定由實(shí)驗(yàn)測(cè)得槲皮素提

8、取物中槲皮素的濃度：5.2109 x 2.08mg /1 = 10.84mg /1根據(jù)濃度計(jì)算可得槲皮素的含量：10.84mg/1x 0.051 x100% = 90.33%0.6mg3注意事項(xiàng)及討論3.1注意事項(xiàng)槐米必須粉碎，以提高提取效率。要用沸水提取，破壞槐米中酶的活性，防止黃酮苷類化合物發(fā)生水解， 而不能加涼水慢慢加熱提取。提取過程中，不斷加入石灰乳清夜，使加入石灰乳可以達(dá)到堿性溶解的 目的，又可除去槐花米中所含的大量粘液質(zhì)，應(yīng)控制其堿性pH89，過高過低 都會(huì)降低收率。蘆丁析出后，可以用離心的方法代替過濾，離心后上清液倒掉。3.2討論本實(shí)驗(yàn)利用酶在高溫失去活性，與蘆丁在熱水中的溶解度

9、大，而在冷水中溶 解度小的原理，提取蘆丁，同時(shí)由于蘆丁在水中分離，因而采用離心分離的手段。 并采用酸催化水解蘆丁制備槲皮素。并在已知標(biāo)準(zhǔn)物的情況下對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定性、 定量測(cè)定。參考文獻(xiàn)1宗淑梅，王海英，沈麗霞.槐米中槲皮素的提取與含量測(cè)定.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2013,24； 308-309. 馬溶，龐光昌.蘆丁對(duì)現(xiàn)代文明病的作用.食品科學(xué)，2013,34 (07)； 307-311.馮啟蒙，徐聰.槐米中提蘆丁純化工藝研究.價(jià)值工程，2012； 307-308.童靖，郭曉蓉，房文亮，夏云.槐米中蘆丁提取工藝研究.中外醫(yī)學(xué)（臨床醫(yī)學(xué)）， 2011， （26）； 41-41.趙宇新.槐米中主要成分變化規(guī)律與受熱溫度的相關(guān)性.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011， 17 （19）； 108-110.楊娜，朱開梅，顧生玖.從槐米中提取槲皮素方法的研究進(jìn)展.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010， 21 （12）； 3340-3341.趙文彬，劉金榮，樊