病原生物與免疫學基礎第五章免疫學應用課件

1、第五章 免疫學應用 免疫學的臨床應用有兩個方面：一是應用免疫學的理論來闡明疾病的發(fā)病機理及發(fā)展規(guī)律；二是應用免疫學的原理來診斷和防治疾病。第一節(jié) 免疫學預防 人工免疫是指人工給機體注入特異性抗原或抗體，使機體獲得特異性免疫力，達到預防疾病的目的稱免疫學預防 。 用微生物及其代謝產物以及人和動物的免疫血清、細胞等（來自于生物體）制成的供預防、治療和診斷用的生物制劑稱為生物制品。 一、人工主動免疫制劑 人工的方法給機體接種抗原，使機體獲得特異性免疫力的方法。常用的生物制品主要是疫苗和類毒素。 第一代疫苗： 死疫苗、活疫苗。 第二代疫苗：亞單位疫苗、基因工程疫苗。 第三代疫苗： DNA疫苗又稱核酸疫

2、苗。（二）類毒素 細菌外毒素經0.30.4甲醛處理，失去 毒性，保留抗原性制成類毒素。 （一）疫苗死疫苗與活疫苗的比較 死疫苗 活疫苗 制劑特點 死病原體，強毒株 活病原體，減毒株接種量及次數(shù) 量較大，23次 量較小，1次保存及有效期 易保存，有效期1年 不易保存，4數(shù)周免疫效果 較差，維持數(shù)月2年 較好，維持35年甚至更長安全性 安全 較差，有毒力恢復危險 二、人工被動免疫制劑 人工的方法給機體注射特異性抗體的免疫血清，使機體獲得特異性免疫力稱為人工被動免疫。常用的生物制品有： （一）抗毒素 通常是用類毒素多次免疫馬，取其血清分離、純化而制成的。 （二）人免疫球蛋白制劑 是從大量的人混合血漿

3、或胎盤血中分離制成，分別稱為人血漿丙種球蛋白和胎盤球蛋白。 （三）特異性免疫球蛋白 是由含有對某種病原微生物具有高效價免疫球蛋白的血清制備，用于特定病原微生物感染的應急預防和治療。 人工主動免疫與人工被動免疫的比較 人工主動免疫 人工被動免疫 輸入物質 抗原 抗體等免疫效應物質 免疫力產生時間 14周 輸入后立即生效 免疫力維持時間 數(shù)月數(shù)年 23周 應用 特異性預防 緊急預防或治療 第二節(jié) 免疫學治療一、以抗體為基礎的免疫治療（一）抗感染血清：抗毒素血清、抗病毒血清、人丙種 球蛋白等。 （二）抗淋巴細胞丙種球蛋白：（三）單克隆抗體：抗細胞表面的單克隆抗體 、抗細胞 因子的單克隆抗體、抗體導向

4、藥物治療二、以細胞因子及其拮抗劑為基礎的免疫 細胞因子療法是應用重組細胞因子對疾病進行治療。例如，IFN-主要用于病毒感染性疾病和腫瘤的治療；IFN-用于治療多發(fā)性硬化癥；IL-2最早被批準用于腎細胞瘤、黑色素瘤的治療；應用紅細胞生成素治療腎性貧血等。 三、細胞為基礎的免疫學治療 （一）骨髓移植 1自體骨髓移植 2異體骨髓移植 3臍血干細胞移植 （二）免疫效應細胞 1同種淋巴細胞被動轉移 2自體免疫效應細胞過繼免疫療法 四、免疫增強劑和免疫抑制劑 免疫增強劑有左旋咪唑、西咪替丁、卡介苗、短小棒狀桿菌、轉移因子、免疫核糖核酸、胸腺肽、豬苓、靈芝等。 免疫抑制劑有環(huán)磷酰胺、硫唑嘌呤、環(huán)孢素A、FK

5、-506、抗淋巴細胞血清、抗全T細胞血清、單克隆抗體、雷公藤、青蒿素等。免疫抑制劑大多有明顯的毒副作用，如骨髓抑制、肝、腎毒性、導致嚴重感染等。第三節(jié) 免疫學診斷 免疫學檢驗的方法具有高度的特異性和敏感性，臨床上運用其作為疾病的輔助性診斷手段或對機體免疫狀態(tài)進行評估，也是許多基礎醫(yī)學學科研究的重要手段。一、抗原或抗體的檢測（一）抗原抗體檢測的原理 體外抗原和相應抗體結合，在一定條件下出現(xiàn)肉眼可見反應現(xiàn)象。實踐中常用已知的抗原或抗體來檢測相應的抗體或抗原，并可進行定性、定量、定位的檢測。（二）常用的抗原抗體檢測方法1.凝集反應：直接凝集反應和間接凝集反應 2.沉淀反應 ：單項瓊脂擴散試驗、雙項瓊

6、脂擴散試驗和對流免疫電泳。3.免疫標記技術： 酶免疫技術；熒光免疫技術；放射核素標記技術；金免疫技術；化學發(fā)光免疫技術。1凝集反應 顆粒性抗原與相應抗體結合，在一定條件下出現(xiàn)可見的凝集現(xiàn)象稱為凝集反應。 （1）直接凝集反應 玻片法：已知的抗體鑒定未知的抗原。 試管法：已知的抗原測定患者血清中相應 抗體的含量。（2）間接凝集反應 將可溶性抗原吸附在與反應無關的載體顆粒表面做成診斷試劑，再與標本中相應的抗體結合，可出現(xiàn)載體顆粒的被動凝集現(xiàn)象。 間接凝集抑制試驗：將已知的抗體與標本可溶性抗原先反應，再加入致敏的顆粒，如標本中含有抗原就會結合、消耗先加入的已知抗體，致敏的膠乳顆粒不再出現(xiàn)凝集，該反應稱

7、間接凝集抑制試驗。 2沉淀反應 可溶性抗原與相應抗體結合，在一定條件下出現(xiàn)可見沉淀物的現(xiàn)象。 沉淀反應的應用有環(huán)狀法、絮狀法、瓊脂擴散法和免疫比濁法。臨床常用的有瓊脂擴散法。 （1）單向瓊脂擴散試驗 （2）雙向瓊脂擴散試驗 （3）對流免疫電泳試驗 單向瓊脂擴散試驗示意圖雙向瓊脂擴散試驗示意圖3免疫標記技術 是用熒光素、酶、放射性同位素等標記物標記抗體或抗原來進行的抗原抗體反應。 （1）酶免疫技術 是用酶標記抗體或抗原，通過酶催化相應底物顯色，觀察顏色的有無或深淺來判定抗原或抗體的有無或含量。 酶聯(lián)免疫吸附試驗 （ ELISA） 將抗原或抗體吸附在固相載體表面，加入標本，再加入酶標記的抗體或抗抗

8、體，洗滌去未結合的物質，加入酶的底物，通過顏色變化來判定抗原或抗體的存在與否及其含量。常用的有間接法和雙抗體夾心法，間接法是檢測抗體最常用的方法，而雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法。 ELISA試驗原理示意圖 （2）免疫熒光法 用熒光素標記抗體，用熒光抗體浸染標本，如有相應抗原存在，則熒光抗體與其結合，不易被洗脫，熒光顯微鏡下可見抗原抗體復合物呈現(xiàn)熒光，借此可對標本中的抗原進行鑒定和定位。 常用的有直接法和間接法。免疫熒光技術原理示意圖 （3）放射性核素標記技術 用放射性同位素標記 抗原或抗體來進行抗原抗體反應，通過測定反應物的同位素放射性來反映抗原或抗體的量。常用的方法為放射免疫分析 。

9、（4）金免疫技術 是以膠體金作為標記物，用于抗原抗體的檢測。（5）化學發(fā)光免疫技術 是將化學發(fā)光分析與免疫反應相結合，用于檢測為兩抗原或抗體的一種新型免疫標記測定技術。二、細胞免疫功能的檢測（一）T細胞數(shù)量檢測 通過檢測T細胞表面的CD（CD3分子）抗原來了解外周血T細胞數(shù)量和亞群的變化。一般采用免疫熒光法測定。正常外周血淋巴細胞中熒光陽性細胞占60%80%。 （二）T細胞亞群檢測 T細胞的不同亞群各有其特有的分化抗原，如CD4T細胞, CD8T細胞，因此可用其相應的單克隆抗體進行檢測。正常值為CD4 占淋巴細胞數(shù)的25.5%51.5%，CD8占淋巴細胞數(shù)的10.0%24.4%；CD4CD8為1.82.2。 （三）T細胞功能檢測 1淋巴細胞轉化試驗 淋巴細胞轉化試驗是檢測T細胞功能的體外試驗。當T細胞在體外培養(yǎng)時受到有絲分裂原 PHA 、ConA 等刺激后能轉化為淋巴母細胞，根據(jù)T細胞的轉化率，來判斷機體細胞免疫狀態(tài)。正常值為70%左右。 2檢測細胞免疫功能的皮膚試驗（1）植物血凝素(PHA)皮膚試驗 PHA是一種常用的非特異性有絲分裂原, 皮內注射后與注射局部的T淋巴細胞表面的相應絲裂原受體結合,刺激T細胞發(fā)生有