生物制品鑒定64張幻燈片

1、一、掌握消毒、滅菌、濾過(guò)除菌、無(wú)菌試驗(yàn) 及熱原質(zhì)試驗(yàn)的概念。二、掌握生物制品常用的防腐劑。三、掌握無(wú)菌試驗(yàn)抽樣的原則；熟悉無(wú)菌試 驗(yàn)方法；了解無(wú)菌試驗(yàn)用培養(yǎng)基。四、掌握生物制品熱原質(zhì)實(shí)驗(yàn)合格標(biāo)準(zhǔn)?！灸康囊蟆康谝还?jié) 消毒滅菌與濾過(guò)除菌消毒殺死物體上的致病性微生物， 但不 一定殺死全部微生物。滅菌將物體上所有的微生物，包括致病的和 非致病的，以及細(xì)菌的芽胞在內(nèi)，全部殺死。 一、消毒滅菌的基本概念（一）定義3防腐: 防止或抑制體外細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法。防腐劑用以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的物質(zhì)。殺菌劑用以殺死細(xì)菌的物質(zhì)稱為殺菌劑。漂白粉、亞硫酸鹽等無(wú)菌: 不含活菌。防止細(xì)菌進(jìn)入機(jī)體或物品 的技術(shù)，稱無(wú)菌操作。

2、消毒滅菌方法物理法化學(xué)法生物學(xué)法二、消毒滅菌（一）物理消毒滅菌法 1、熱力消毒滅菌法（干熱、濕熱） 2、輻射殺菌法（紫外線、電離幅射、微波）3、濾過(guò)除菌法（除菌濾器、適用物品）4、超聲波（機(jī)制：裂解細(xì)菌，主要用于粉碎細(xì) 胞、提取抗原）5、低溫抑菌6（一）物理消毒滅菌法 1、熱力消毒滅菌法高溫殺滅細(xì)菌干熱滅菌法焚燒 最徹底的滅菌方法燒灼 直接用火焰滅菌方法干烤 加熱 160-180； 2 h紅外線 熱效應(yīng) 與干烤類似（一）物理消毒滅菌法 熱力消毒滅菌法濕熱滅菌法巴氏消毒法 較低的溫度61 30min/71 15-30s 殺滅致病菌繁殖體煮沸消毒法 100 5 mim(繁殖體 )；2h(芽胞 )流

3、動(dòng)蒸汽消毒法 水蒸氣100 15-30 mim(繁殖體 )高壓蒸汽滅菌法 最有效的滅菌方法 121 20-30mim89濕熱滅菌與干熱滅菌效果比較同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好1、濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固。2、濕熱的穿透力比干熱大。3、濕熱的蒸汽有潛熱。102、輻射滅菌法日光：污染的衣物、被單等紫外線：不耐熱物品的表面 消毒 手術(shù)室、傳染病房、細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室電離輻射：一次性醫(yī)用塑料制品的 消毒、食品的消毒 113、濾過(guò)除菌法 定義： 許多可溶性的抗原、毒素、類毒素、免疫血清、抗毒素、細(xì)胞因子制品、血液制劑、酶制劑等不耐高溫的溶液，多采用濾過(guò)除菌法達(dá)到滅菌的目的。 用物理阻留的方法將液體或空

4、氣中的細(xì)菌除去，以達(dá)到除菌目的。 濾過(guò)除菌法必須通過(guò)濾器才能達(dá)到除菌目的。濾菌器的種類很多，如薄膜濾菌器、Seitz濾菌器、玻璃濾菌器等。13濾菌器適用范圍血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌。 含有微細(xì)小孔 0.22m，只允許液體或氣體及孔徑 0.22m 的顆粒通過(guò)，細(xì)菌不能濾過(guò)。 （1）薄膜濾菌器 濾膜都是由高分子聚合物制成，如醋酸纖維、巨砜及聚亞乙烯氟等。這類濾膜可耐121高壓蒸汽滅菌。 用于除菌的膜孔徑為0.22m。（更高要求0.15m ）醋酸纖維平面膜裝在不銹鋼支架上進(jìn)行除菌過(guò)濾。巨砜與聚亞乙烯氟濾膜更具有化學(xué)穩(wěn)定性，可用酸或堿清洗處理，而且聚亞乙烯氟濾膜可以反復(fù)滅菌重復(fù)使用。15（2

5、）Seitz濾菌器 濾菌器用金屬制成，中嵌以石棉濾板。濾板的孔徑分三級(jí)：K最大，澄清用；EK較小，可除去一般細(xì)菌；EK-S最小，可阻止所有細(xì)菌甚至大的病毒通過(guò)。由于石棉是致癌物質(zhì)，石棉濾板在國(guó)際上已禁止使用。無(wú)石棉的Seitz濾板仍可應(yīng)用于生產(chǎn)。（3）玻璃濾菌器 濾板系用玻璃細(xì)砂在一定溫度下壓成濾板，鑲嵌在玻璃漏斗中制成玻璃濾菌器。按孔徑大小一般分為G1G6六種型號(hào)，G5和G6的濾器能阻止細(xì)菌通過(guò)。（二） 化學(xué)消毒滅菌法 （1）含氯消毒劑 （漂白粉） （2）過(guò)氧化物類消毒劑 （3）醛類消毒劑（甲醛） （4）雜環(huán)類氣體消毒劑（環(huán)氧乙烷） （5）醇類消毒劑 （6）季銨鹽類消毒劑 （新潔爾滅） （7

6、）其它消毒劑（洗必太、碘酊）類別作用機(jī)制常用種類酚類蛋白變性，細(xì)胞膜損傷石炭酸醇類蛋白變性乙醇氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸鉀、過(guò)氧乙酸、碘酒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞表面活性劑蛋白變性，細(xì)胞膜損傷新潔而滅染料干擾氧化、抑制繁殖龍膽紫酸堿類破壞膜、壁，蛋白凝固醋酸、生石灰烷化劑蛋白質(zhì)、核酸烷基化環(huán)氧乙烷常用消毒劑的主要種類各種消毒劑的應(yīng)用種類用途石炭酸地面、器具表面、皮膚消毒乙醇皮膚、體溫計(jì)消毒高錳酸鉀皮膚、尿道、蔬菜、水果消毒紅汞皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消毒硫柳汞皮膚消毒、手術(shù)部位消毒過(guò)氧乙酸塑料、玻璃器材消毒碘酒皮膚消毒新潔而滅手術(shù)洗手、浸泡手術(shù)器械龍膽紫淺表創(chuàng)傷消毒四、生物制品的抑菌防腐

7、(1)硫柳汞（0.01%） (2)氯仿（0.5%） (3)硝酸汞苯 (4)石炭酸 (5)福爾馬林 除活疫苗及凍干制品均加防腐劑常用種類類別作用機(jī)制用途硫柳汞重金屬鹽重金屬離子與菌體蛋白的巰基結(jié)合使酶變性疫苗、類毒素及血液制品氯仿抗毒素、胎盤蛋白石炭酸酚類蛋白變性，細(xì)胞膜損傷腸道死菌疫苗 甲醛 醛類對(duì)菌體蛋白進(jìn)行烷化，使酶失活疫苗滅活劑、毒素的解毒劑常用生物制品防腐劑主要種類及用途新型消毒劑（無(wú)污染消毒劑）臭氧O3（O3 = O2 + O）1、綠色消毒劑2、新生態(tài)氧，破壞膜結(jié)構(gòu)及膜內(nèi)脂蛋白、脂多糖，直接破壞病毒DNA和RNA3、瞬間殺毒，殺菌能力是氯的6003000倍4、應(yīng)用廣泛24雙錐常溫臭氧

8、滅菌罐25選擇適當(dāng)防腐劑低毒低破壞有效價(jià)廉方便易貯存第二節(jié) 生物制品無(wú)菌試驗(yàn) 生物制品不得含有雜菌（有專門規(guī)定者除外），滅活菌苗、疫苗不得含有活的本菌、本毒。在制造過(guò)程中應(yīng)由制造部門按各制品制造及檢定規(guī)程規(guī)定進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)，分裝后的制品須經(jīng)質(zhì)量檢定部門做最后檢定。 生物制品無(wú)菌試驗(yàn)：生物制品在制造過(guò)程中按各個(gè)制品制造及檢定規(guī)程規(guī)定進(jìn)行的無(wú)菌試驗(yàn)。一、抽樣（一）原液及半成品 原液及半成品應(yīng)每瓶分別進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)，其抽樣量應(yīng)至少為0.1%，但不得少于1.0ml。1、大罐稀釋的制品抽樣數(shù)量不得少于10ml。2、原液及半成品每開瓶一次，應(yīng)如上法抽驗(yàn)。10001支（瓶）以上者抽檢40支（瓶）（二）成品 每亞

9、批均應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)，樣品應(yīng)隨機(jī)抽取，應(yīng)具有代表性（包括分裝過(guò)程的前、中、后樣品）。分裝量在100支（瓶）或以下者抽檢不少于5支101500支（瓶）者抽檢不少于10支（瓶）50110000支（瓶）者抽檢不少于20支（瓶)29凍干血液制品無(wú)菌抽樣 凍干血液制品1、單瓶裝量20ml以上的凍干血液制品 每柜凍干200瓶以下者抽檢2瓶 200瓶及以上者抽檢4瓶2、單瓶裝量620ml的凍干血液制品抽檢量加倍。3、單瓶裝量5ml及5ml以下者，按一般成品抽檢量 抽檢。（三）凡規(guī)定需作支原體檢查的制品，均應(yīng)在半成品時(shí)按亞批進(jìn)行檢查，成品可不再做。（1）檢查制品中本身菌體是否存活應(yīng)采用適于本菌發(fā)育生長(zhǎng)的培養(yǎng)基（

10、在半成品時(shí)檢查，有專門規(guī)定者除外）。 檢查需氧性和厭氧性雜菌應(yīng)采用硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基。檢查不含汞類防腐劑制品中的需氧性和厭氧性雜菌時(shí)，該培養(yǎng)基中可不加硫乙醇酸鹽。二.無(wú)菌試驗(yàn)用培養(yǎng)基 檢查霉菌和腐生菌應(yīng)采用改良馬丁培 養(yǎng)基。 檢查混濁制品可采用不含瓊脂的硫乙 醇酸鹽培養(yǎng)基。檢查活菌苗時(shí)可加大 瓊脂含量，做成斜面。（2）檢查支原體應(yīng)采用豬胃消化液半固 體或牛心消化液半固體培養(yǎng)基。（3）生物制品無(wú)菌試驗(yàn)用培養(yǎng)基可用經(jīng)檢定合格的干燥培養(yǎng)基配制。（4）無(wú)菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度。乙型溶血性鏈球菌（32210株）應(yīng)達(dá)到10-8，短芽胞桿菌（7316株）和生孢子梭狀芽胞桿菌（64941株）應(yīng)達(dá)到10-7，白色念

11、珠菌（ATCc 10231）和臘葉芽枝霉應(yīng)達(dá)到10-6。（5）生物制品無(wú)菌試驗(yàn)培養(yǎng)基由質(zhì)量檢定部門與培養(yǎng)基制造部門一同進(jìn)行靈敏度試驗(yàn)。每當(dāng)更換主要原材料時(shí)，應(yīng)進(jìn)行靈敏度試驗(yàn)，合格后方可應(yīng)用。（6）各生產(chǎn)單位質(zhì)量檢定部門應(yīng)定期抽檢無(wú)菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度，檢定所應(yīng)定期抽檢各所的無(wú)菌試驗(yàn)培養(yǎng)基。三、無(wú)菌試驗(yàn)方法 （一）直接接種法 1、菌苗、疫苗、類毒素、抗毒素類制品 每安瓿裝量5.0ml以上者（不含5.0ml）取樣不應(yīng)少于1.0ml 裝量在5.0ml以下者（含5.0ml）取樣不得少于0.5ml 裝量不足0.5ml者，全部吸取。 含防腐劑的制品接種量與培養(yǎng)基的比例： 用苯酚或氯仿作防腐劑者至少為1:2

12、0； 用汞作防腐劑者或制品內(nèi)含有甲醛、抗生素者至少為1:50。 先按此比例接種于硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基內(nèi)增菌，2025培育34天后移種至硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、適宜的瓊脂斜面、改良馬丁培養(yǎng)基各2管，每管0.5ml。（1）含防腐劑的制品（2）不含防腐劑的制品 不含防腐劑制品，裝量在5.0ml以下者（包括5.0ml）每10支安瓿混合。 裝量在5.0ml以上者每7支安瓿混合。 將混合后的樣品直接接種一組培養(yǎng)基分別置2025、3035培育，培育時(shí)間共為8天。 （3）混濁和接種后不能判定結(jié)果的制品 可取規(guī)定量的樣品接種于不含瓊脂的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（200ml）內(nèi)進(jìn)行增菌培養(yǎng)，34天后移種。培養(yǎng)基種類和支數(shù)、培育溫度

13、同含防腐劑的制品，培育8天后判定結(jié)果。 樣品每瓶裝量不足1.0ml者，抽取全量 120ml以下者（不含20ml），抽取1.0ml以上，每支裝量為15ml的培養(yǎng)基，接種1.0ml。2、血液制品 應(yīng)接種的培養(yǎng)基支數(shù)依取樣的總量而定。接種硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基與改良馬丁培養(yǎng)基支數(shù)之比為2:1。 接種后將硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基總支數(shù)的1/2置3035培育，其余置2025培育，改良馬丁培養(yǎng)基置2025培育，培育時(shí)間不少于14天。（二）薄膜過(guò)濾法： 濾膜孔徑為0.220.3m。規(guī)定抽檢樣品數(shù)： 每瓶裝量100ml及100ml以下者取全量 100ml以上者取半量 加入滅菌薄膜過(guò)濾器內(nèi)，加壓或減壓過(guò)濾。最好采用全封閉式一

14、次性微孔過(guò)濾集菌器。無(wú)菌取出過(guò)濾后的濾膜在培養(yǎng)基中培養(yǎng)。人血白蛋白、人丙種球蛋白41四、無(wú)菌試驗(yàn)判定（1）無(wú)雜菌生長(zhǎng)判為合格。（2）如有雜菌生長(zhǎng)，可復(fù)試，但抽樣量加 倍。如復(fù)試仍有雜菌生長(zhǎng)，判為不合格 第三節(jié) 生物制品熱原質(zhì)試驗(yàn)熱原質(zhì)：菌體中脂多糖，多數(shù)由革蘭陰性菌產(chǎn)生，注入人或動(dòng)物體內(nèi)能引起發(fā)熱反應(yīng)的物質(zhì)。生物制品熱原質(zhì)試驗(yàn)概念 將一定劑量的供試品靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定期間內(nèi)觀察家兔體溫升高情況，以判定供試品中所含熱原質(zhì)的限度是否符合規(guī)定的一種方法。X一、供試家兔 健康無(wú)傷，雌者無(wú)孕。體重1.72.5kg。 測(cè)溫前至少3日應(yīng)用同一飼料喂養(yǎng)。此期間，體重應(yīng)不減輕，精神、食欲、排泄等不得有異常

15、。 未曾用于熱原質(zhì)試驗(yàn)的家兔，應(yīng)在試驗(yàn)前13日內(nèi)預(yù)檢體溫一次，不注射藥液。1h測(cè)溫1次，連續(xù)測(cè)4h。4h內(nèi)體溫均在38.039.8 ，且最高與最低溫差不超過(guò)0.5 者方可使用。 動(dòng)物自動(dòng)測(cè)溫儀47 凡熱原質(zhì)試驗(yàn)用過(guò)的家兔，若供試品判為符合規(guī)定，家兔休息48小時(shí)后可重復(fù)使用。對(duì)血液制品、抗毒素和其他同一過(guò)敏原的供試品在5天內(nèi)可重復(fù)使用。 二、試驗(yàn)前準(zhǔn)備(1)試驗(yàn)用的注射器、針頭及一切與供試液接觸的器皿，洗凈后應(yīng)經(jīng)250至少30分鐘或180至少2小時(shí)干烤滅熱原質(zhì)。(2)測(cè)溫探頭的精確度應(yīng)為0.1。每只家兔注射前、后應(yīng)使用同一支測(cè)溫探頭。(3)熱原質(zhì)檢查前12日，供試驗(yàn)用家兔盡可能處于同一溫度環(huán)境中

16、。實(shí)驗(yàn)室溫度保持在1525。試驗(yàn)的全過(guò)程中室溫變化不得大于3，(4)應(yīng)保持安靜，避免強(qiáng)光照射和噪音干擾?？諝庵邪焙繎?yīng)低于20ppm。三、試驗(yàn) 試驗(yàn)前家兔應(yīng)禁食2小時(shí)以上再開始測(cè)量正常體溫，共測(cè)兩次，間隔3060分鐘，兩次溫差不得大于0.2；同組兔間正常體溫之差不得大于1.0。用測(cè)溫探頭測(cè)量時(shí)，家兔固定3060分鐘后開始檢溫。 每批供試品初試用3只，復(fù)試用5只家兔。 測(cè)家兔正常體溫后15分鐘內(nèi)，按規(guī)定劑量自耳邊靜脈緩緩注入預(yù)熱至38的供試品，每隔30分鐘測(cè)量體溫1次，連測(cè)6次。四、結(jié)果判斷 每只兔的正常體溫與注射供試品后最高升溫之差，為該兔的應(yīng)答。出現(xiàn)負(fù)值的規(guī)定如下：降溫值0.4為兔溫正常波動(dòng)

17、范圍，以“0”計(jì)。降溫值0.6需重試。降溫值0.4-0.6時(shí)，若供試組家兔中僅一只降溫在此范圍內(nèi)，以“0”計(jì)，若供試組家兔中有2只或2只以上降溫在此范圍內(nèi)，應(yīng)重試。（一）肌內(nèi)注射制品判定標(biāo)準(zhǔn)1、初試結(jié)果判定 符合下列情況之一者，判為合格： 3兔升溫均低于0.8，且3兔升溫總和不超1.8 3兔中1只升溫達(dá)0.8，其他升溫均低于0.8，并且3兔升溫總和不超過(guò)1.8。特殊者按指定標(biāo)準(zhǔn)：干擾素單只不超過(guò)0.6 。 3兔中有2只升溫0.8或0.8以上；3兔升溫總和超過(guò)2.4。 3兔中1只升溫超過(guò)0.8；3兔升溫總和超過(guò)1.8。有下列情況之一者，復(fù)試一次：有下列情況之一者，判為不合格： 2、復(fù)試結(jié)果判定

18、符合下列情況者，判為合格： 初、復(fù)試8兔中，有2只或2只以下升溫0.8或0.8以上，并且升溫總和不超過(guò)4.0。有下列情況之一者，判為不合格：初、復(fù)試8兔中，有2只以上升溫0.8或0.8以上，并且升溫總和超過(guò)4.0。（二）靜脈注射制品判定標(biāo)準(zhǔn)符合下列情況者，判為合格：1、初試結(jié)果判定 3兔升溫均低于0.6，并且3兔升溫總和不超過(guò)1.4。有下列情況之一者，復(fù)試一次： 3兔中1只體溫升高0.6或0.6以上；3兔升溫總和超過(guò)1.4。有下列情況之一者，判為不合格： 3兔中2只體溫升高0.6或0.6以上；3兔升溫總和為1.8或超過(guò)1.8。2、復(fù)試結(jié)果判定符合下列情況者，判為合格： 初、復(fù)試8兔中，2只或2只以下升溫0.6或0.6以上，并且升溫總和不超過(guò)3.5。有下列情況之一者，判為不合格： 初、復(fù)試8兔中，2只以上升溫0.6或0.6以上；初、復(fù)試8兔升溫總和超過(guò)3.5。第四節(jié) 國(guó)家標(biāo)