上皮性卵巢癌中內(nèi)皮抑素與血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)

1、上皮性卵巢癌中內(nèi)皮抑素與血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá) 作者：程麗，隋麗華，劉梅梅，李文輝【關(guān)鍵詞】 內(nèi)皮抑素； 血管內(nèi)皮生長因子；卵巢腫瘤；免疫組織化學(xué)0引言腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移與腫瘤新生血管的生成密切相關(guān)。內(nèi)皮抑素(Endostatin)是近期發(fā)現(xiàn)的血管生成抑制劑，它能選擇性地抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖并可誘導(dǎo)其凋亡1。血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）是目前發(fā)現(xiàn)的最為關(guān)鍵的血管形成刺激因子，在實(shí)體瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用2，它能提高血管的通透性，引起血漿蛋白外滲，為新生血管提供必需的基質(zhì)。本試驗(yàn)采用免疫組化方法對上皮性卵巢癌的Endosta

2、tin和VEGF蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測，旨在探討兩者在上皮性卵巢癌中的表達(dá)和意義。1資料與方法1.1標(biāo)本來源48例標(biāo)本取自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院19951999年卵巢癌腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)手術(shù)切除標(biāo)本，包括漿液性腺癌30例，粘液性腺癌12例，子宮內(nèi)膜樣癌6例。標(biāo)本按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期，、期18例，、期30例。標(biāo)本按組織學(xué)分級分為G1 11例，G2 21例，G3 16例。所有患者術(shù)前均未接受化療和(或)放療。另取18例良性卵巢瘤組織和18例正常卵巢組織標(biāo)本作為對照，所有標(biāo)本均經(jīng)100ml/L中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4m厚連續(xù)切片。1.2免疫組化染色（SP法）兔抗人Endostatin多

3、克隆抗體為美國Neomarkers公司產(chǎn)品，鼠抗人VEGF單克隆抗體購自北京晶美生物技術(shù)開發(fā)公司。SP試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。用已知陽性標(biāo)本切片和磷酸鹽緩沖液分別作陽、陰性對照，DAB顯色，蘇木精對比染色，光鏡觀察。1.3判定標(biāo)準(zhǔn)1.3.1Endostatin光鏡下細(xì)胞胞漿顯示為棕色，判斷標(biāo)準(zhǔn)以高倍鏡下隨機(jī)選擇5個視野中平均陽性細(xì)胞比例50%為高表達(dá)，50%為低表達(dá)。1.3.2VEGF陽性細(xì)胞胞漿顯示為棕黃色，也有的病例細(xì)胞膜同時(shí)表達(dá)。判斷標(biāo)準(zhǔn)以高倍鏡下隨機(jī)選擇5個視野中平均陽性細(xì)胞數(shù)所占比例計(jì)，陽性細(xì)胞比例10%為陽性表達(dá)，10%為陰性表達(dá)。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS10.0

4、統(tǒng)計(jì)軟件包處理數(shù)據(jù)；率的檢驗(yàn)采用2檢驗(yàn)；預(yù)后分析采用多因素COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型以及單因素分析。2結(jié)果2.1各類卵巢組織中Endostatin 和 VEGF表達(dá)的比較惡性腫瘤內(nèi)的Endostatin高表達(dá)率明顯高于良性腫瘤和正常卵巢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=25.42,P0.01）。VEGF在惡性腫瘤中的表達(dá)率明顯高于良性腫瘤及正常卵巢，相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=40.49,P0.05），見表1。2.2Endostatin和VEGF在卵巢上皮性癌中的表達(dá)及其與臨床病理的關(guān)系見表2。2.3各臨床、病理因素對卵巢惡性腫瘤預(yù)后的影響COX模型結(jié)果顯示，在各因素中，僅臨床分期與患者的總生存期密切相關(guān)，是一

5、項(xiàng)獨(dú)立的預(yù)后因素（P=0.022）,相關(guān)系數(shù)為0.959，晚期卵巢癌患者（、期）的預(yù)后差，而Endostatin高表達(dá)以及VEGF陽性表達(dá)與預(yù)后無關(guān)（P=0.91，P=0.68）。從相關(guān)系數(shù)來看Endostatin(r=0.212)和VEGF(r=0.198)蛋白的表達(dá)對生存時(shí)間的影響均無顯著性。表1各類卵巢組織中Endostatin和VEGF表達(dá)的相關(guān)性比較（略）表2卵巢上皮性癌中Endostatin 和VEGF的表達(dá)及其與臨床病理的關(guān)系（略）2.4上皮性卵巢癌標(biāo)本中Endostatin與VEGF表達(dá)的相關(guān)性兩者同時(shí)高表達(dá)或陽性為26例，低表達(dá)或陰性為8例，而同時(shí)低表達(dá)和陽性為10例，高表達(dá)

6、和陰性為4例，表明Endostatin和VEGF在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)間有相關(guān)性（2=5.56,C=0.322,P0.05），而在正常卵巢組織中兩者無相關(guān)性。3討論腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移需要不斷地有新生血管的生成， 抑制腫瘤血管生成可抑制腫瘤生長。 Endostatin是一種近年來發(fā)現(xiàn)的強(qiáng)有效的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長抑制劑。 有研究結(jié)果證實(shí)VEGF與卵巢惡性腫瘤的增殖、 浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。 本研究發(fā)現(xiàn)上皮性卵巢癌中Endostatin的高表達(dá)和VEGF的陽性表達(dá)與良性卵巢和正常卵巢組織相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 提示了來源于膠原的活性Endostatin 在病理性和生理性抗血管生成的生物學(xué)功能的差異。

7、 此外還發(fā)現(xiàn)， Endostain在晚期（、 ）卵巢癌患者中的表達(dá)強(qiáng)于早期（、 ）卵巢癌患者， 這與Hata等3的研究結(jié)果相一致， Endostatin mRNA 表達(dá)量的變化與卵巢癌的臨床分期有關(guān)。 提示了在卵巢癌疾病進(jìn)展過程中， 機(jī)體內(nèi)的調(diào)節(jié)系統(tǒng)會產(chǎn)生大量的Endostatin等血管生成抑制劑來抗衡機(jī)體內(nèi)高水平的血管生成趨勢以抑制腫瘤的生成。 Shen等4發(fā)現(xiàn)， 在卵巢腫瘤的各期中均有VEGF表達(dá)， 但表達(dá)的程度有顯著差異。 這與本研究結(jié)果相一致， 即晚期（、）臨床患者的VEGF表達(dá)高于早期（、 ）臨床患者。Brustmann等5報(bào)道VEGF陽性表達(dá)率還與腫瘤細(xì)胞有絲分裂活性呈正相關(guān)。 在

8、上皮性卵巢癌組織中VEGF的表達(dá)與Endostatin呈正相關(guān)，表明在腫瘤生長過程中血管生成因子與抑制因子之間關(guān)系密切。兩者的表達(dá)均隨臨床病期的進(jìn)展而增加，可能是由于卵巢癌細(xì)胞為了滿足其生長和浸潤，產(chǎn)生了大量VEGF,機(jī)體內(nèi)的調(diào)節(jié)系統(tǒng)同時(shí)也會產(chǎn)生大量的Endostatin來抗衡機(jī)體內(nèi)高水平的血管生成，但是這種代償作用仍不能達(dá)到正常生理狀態(tài)，最終因?yàn)檎{(diào)節(jié)失衡導(dǎo)致腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。有研究表明，Endostatin能下調(diào)腫瘤細(xì)胞VEGF mRNA 和蛋白的表達(dá)，通過減少內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合成酶（eNOS）在ser1177上磷酸化，抑制eNOS的激活，顯著減少VEGF誘導(dǎo)的一氧化氮的釋放，從而抑制VEG

9、F介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移和血管形成6。在卵巢癌中，Endostatin和VEGF的這種相互作用在卵巢癌的發(fā)生和進(jìn)展中起著重要的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：是否可以將外源性Endostatin應(yīng)用于臨床卵巢癌患者的治療，人為提高體內(nèi)血管生成抑制劑表達(dá)來減緩或抑制腫瘤的生長，從而達(dá)到生物治療卵巢腫瘤的目的。本研究尚需擴(kuò)大病例標(biāo)本例數(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1Sauter BV, Martinet O, Zhang WJ, et al. Adenovirusmediated gene transfer of endostatin in vivo results in high level of tr

10、ansgene expression and inhibition of tumor growth and metastasesJ. Proc Natl Acad Sci U S A， 2000, 97(9):48024807.2Du P, Wei J G, Li HP, et al. Expression of vascular endothelial growth factor in nude rat liver after planting human hepatocellular carcinoma cells J. Di si Junyi Daxue Xuebao (J Fourth

11、 Mil Med Univ), 2001,22(12):10851088.3Hata K,Fujiwaki R,Nakayama K,et al.Expression of the Endostatin gene in epithelial ovarian cancerJ.Clin Cancer Res,2002,7(8):24052409.4Shen GH,Ghazizadeh M,Kawanami O,et al.Prognostic significance of vascular endothelial growth factor expression in human ovarian carcinomaJ.Br J Cancer，2002,83(2):196203.5Brustmann H, Naude S. Vascular endothelial growth factor expression in serous ovarian carcinoma: relationship with high mitotic activity and high FIGO stageJ . Gynecol Oncol, 2003，84(1):4752.6Hajitou A, Grignet C, Devy L, et a