第十四章維生素類藥物的分析AnalysisofVitamins課件

1、第十四章 維生素類藥物的分析 Analysis of VitaminsPharmaceutical Analysis1學(xué)習(xí)要求掌握維生素A、維生素B、維生素C、維生素E的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)以及與分析方法間的關(guān)系，它們的專屬鑒別反應(yīng)、主要的含量測(cè)定方法與原理。熟悉維生素A、維生素B、維生素C、維生素E的有關(guān)物質(zhì)、檢查方法與原理。了解維生素D性質(zhì)和分析特點(diǎn)。2 維生素：是維持人體正常代謝機(jī)能所必需 的微量營養(yǎng)物質(zhì)。 脂溶性：VitA、D2、D3、 E、K1 等 水溶性：VitB族(B1、B2、B6、B12)、VitC、 葉酸、煙酸、煙酰胺3維生素的共同特點(diǎn)： 這些化合物或其前體化合物都在天然食物中

2、存在；它們不能供給機(jī)體熱能。也不是構(gòu)成組織的基本原料，主要功用是通過作為輔酶的成份調(diào)節(jié)代謝過程，需要量極?。凰鼈円话阍隗w內(nèi)不能合成，或合成量不能滿足生理需要，必須經(jīng)常從食物中攝?。婚L期缺乏任何一種維生素都會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的疾病。4維生素缺乏導(dǎo)致的病癥維生素A缺乏夜盲癥 、干眼病 （動(dòng)物內(nèi)臟、富含胡蘿卜素的蔬菜水果）維生素B1缺乏腳氣?。ü阮?、豆類、堅(jiān)果類、瘦豬肉及動(dòng)物內(nèi)臟 ）維生素C缺乏壞血病（新鮮蔬菜和水果）維生素D缺乏小兒佝僂病與成人骨軟化病 (足夠的日光 、海魚、動(dòng)物內(nèi)臟、蛋黃)維生素E缺乏一般不缺乏（體內(nèi)駐留時(shí)間長）。 （植物油）5R : -H 維生素A醇 -COCH3 維生素A醋酸酯 -C

3、OC15H31 維生素A棕櫚酸酯第一節(jié) 維生素A一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)環(huán)己烯共軛多烯醇6結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：（1）環(huán)己烯+共軛多烯側(cè)鏈；（2）天然VA側(cè)鏈為全反式；（3）天然來源主要是魚肝油，為醋酸酯，棕櫚酸酯等,目前多由人工合成。7性質(zhì)：1、紫外吸收具有共軛多烯側(cè)鏈紫外吸收。最大吸收波長在325328nm，隨VA存在狀態(tài)以及所用的溶劑，最大吸收波長的位置有所不同。有干擾物質(zhì)存在（VitA2、 VitA3、鯨醇）。8VitA2VitA3鯨醇脫水去氫二聚體92、 不穩(wěn)定性：共軛多烯側(cè)鏈易被氧化，或有金屬離子存在時(shí)氧化環(huán)氧化物VitA醛VitA酸10CHCl33. 與三氯化銻發(fā)生呈色反應(yīng)（鑒別、含量測(cè)定）4. 溶解

4、性：不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑和植物 油等。11條件：無水、無醇CHCl3二、鑒別試驗(yàn)1. 三氯化銻反應(yīng)藍(lán)色紫紅12注意事項(xiàng)：無水水可使三氯化銻水解成氯化氧銻 （SbOCl）白色沉淀，干擾比色。無醇乙醇可以和碳正離子作用使其正電 荷消失。13max326nm一個(gè)吸收峰max350390nm三個(gè)吸收峰2、UV法（BP 2000）去水VitA（VitA3）VitA14153、TLC法 BP 雜質(zhì)對(duì)照品法 顯色劑：三氯化銻 USP 顯色劑：磷鉬酸 規(guī)定斑點(diǎn)顏色和Rf值16三、含量測(cè)定UV法:三點(diǎn)校正法（ChP 2010 第一法）三氯化銻比色法HPLC法（ChP 2010 第二法）171、為何要采用三點(diǎn)

5、校正法？維生素A原料藥中?；煊须s質(zhì)，如維生素A2、維生素A3等，這些雜質(zhì)在維生素A的最大吸收波長附近有吸收，采用三點(diǎn)校正法可以消除這些雜質(zhì)的干擾。2、測(cè)定原理1）在310340nm范圍內(nèi)，雜質(zhì)吸收呈一直線，且隨波長的增大吸收度下降。2）物質(zhì)對(duì)光吸收呈加和性。三點(diǎn)校正法183、波長的選擇： 一點(diǎn)選在維生素A的最大吸收波長處（1），其它兩點(diǎn)選在1的兩側(cè)。第一法（等波長差法）波長為1=328nm、2=316nm、3=340nm；測(cè)定對(duì)象：VA醋酸酯第二法（等吸收比法）波長為1=325nm、2=310nm、3=334nm；測(cè)定對(duì)象：VA醇194、測(cè)定方法首先判斷用哪個(gè)吸收度(A328 or A328(

6、校正)）進(jìn)行含量計(jì)算。第一法：供試液濃度為915IU/ml，溶劑為環(huán)己烷，在300、316、328、340、360nm五個(gè)波長處測(cè)定吸收度。1）最大吸收波長在326329nm之間，計(jì)算吸收度比值A(chǔ)i /A328，并與規(guī)定值相減，差值不超過0.02，則用A328計(jì)算含量。202）如果最大吸收波長在326329nm之間，5個(gè)波長下的差值有一個(gè)或幾個(gè)超過0.02，這時(shí)先計(jì)算A328（校正）：A328（校正）=3.52（2 A328 - A316 - A340） A328（校正）- A328-100% A328 再計(jì)算21若所得的數(shù)值在3%，則仍用A328計(jì)算含量；若所得的數(shù)值在-15%-3%之間，則

7、用A328（校正）計(jì)算含量；若所得的數(shù)值小于-15%或大于+3%，或最大吸收波長不在326329nm之間，則應(yīng)采用第二法測(cè)定。22三點(diǎn)校正法第一法步驟小結(jié)：最大吸收波長是否在326-329nm間 符合- ，不符合第二法： 測(cè)定指定波長吸收度 ：計(jì)算（A指定波長/A328）比值,并與規(guī)定值比較 符合- ，不符合： 計(jì)算校正吸收度，并與實(shí)測(cè)值比較，判斷是否需要校正：計(jì)算328nm處樣品的E 1cm1% ：計(jì)算效價(jià)及標(biāo)示量的百分含量維生素A醋酸酯的換算：IU/g = E 1cm1% 1900 IU/丸 標(biāo)示量% = 100% 標(biāo)示量23第二法 （皂化法，適用于維生素A醇）第一法無法消除雜質(zhì)干擾時(shí)用此

8、法242526275、討論 1）維生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直線方程式法推導(dǎo)而來：維生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法推導(dǎo)而來。 2）在應(yīng)用三點(diǎn)校正法時(shí)，除其中一點(diǎn)在最大吸收波長處測(cè)定外，其余兩點(diǎn)均在最大吸收峰的兩側(cè)進(jìn)行測(cè)定。如果儀器波長精度不準(zhǔn)確時(shí)，會(huì)產(chǎn)生較大誤差。因此，在測(cè)定前務(wù)必要校正波長，并可用全反式維生素A進(jìn)行測(cè)定，比較測(cè)定結(jié)果和比值是否與對(duì)照品相符合，以進(jìn)一步核對(duì)儀器波長是否準(zhǔn)確。測(cè)定的樣品應(yīng)不得少于兩份。 3）中國藥典（2010年版）收載的維生素A軟膠囊采用三點(diǎn)校正法測(cè)定。 28 VitAD膠丸中VitA的含量測(cè)定 精密稱取本品(規(guī)格10000VitAIU/丸)裝量差

9、異項(xiàng)下（平均裝量0.08262g/丸）的內(nèi)容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測(cè)定最大吸收波長為328nm，并在下列波長處測(cè)得吸收度，求本品中維生素A的含量。29A300 ：0.354A316 ：0.561A328 ：0.628A340 ：0.523A360 ：0.216A300 /A328 ：0.555A316/A328 ：0.907A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.811A360/A328 ：0.299 規(guī)定比值30A300 /A328 ：0.564

10、A316/A328 ：0.893A328/A328 ：1.000A340/A328 ：0.833A360/A328 ：0.344 0.555 0.907 1.000 0.811 0.299 + 0.010.01 0 + 0.02 + 0.04 =3132 優(yōu)點(diǎn)：簡便、快速 缺點(diǎn)：呈色不穩(wěn)定 （510s內(nèi)） 水分干擾（反應(yīng)需要無水條件） 專屬性差（有關(guān)物質(zhì)的干擾） 三氯化銻有腐蝕性（注意安全）max 618nm620nm2、 三氯化銻比色法(標(biāo)準(zhǔn)曲線法)333、HPLC法（ChP2010新增的分析方法） 適用于維生素A醋酸酯原料及其制劑中維生素A的含量測(cè)定。34第二節(jié) 維生素E一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 名

11、稱：消旋生育酚醋酸酯 母核：苯駢二氫吡喃衍生物 苯環(huán)上有一乙?；姆恿u基 側(cè)鏈：脂肪烷烴35化學(xué)性質(zhì)：1、易溶于有機(jī)溶劑，不溶于水2、UV:284nm(乙醇) 3、酯鍵易水解4、對(duì)氧敏感，易氧化36橙紅色二、鑒別1. 硝酸反應(yīng)（chp2010）取本品約30mg，加無水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，搖勻，在75加熱15分鐘，溶液應(yīng)顯橙紅色。37生育紅（橙紅色）生育酚HNO3強(qiáng)氧化劑38O2.三氯化鐵聯(lián)吡啶反應(yīng)紅色39生育酚對(duì)-生育醌O弱氧化劑403. UV法284nm254nm414. TLC法薄層板 硅膠G展開劑 環(huán)己烷 -乙醚（4 ：1）顯色劑 硫酸（105 5） VitE Rf = 0

12、.742三、檢查：游離生育酚 硫酸鈰滴定液（0.01mol/L）指示劑：二苯胺（亮黃灰紫） 2. 試劑1. 原理：利用游離生育酚的還原性，將硫酸鈰還原成硫酸亞鈰433、方法 取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）不得過 1.0ml。44四、含量測(cè)定1. GC法（ChP2010）載氣N2固定液硅酮（OV-17）擔(dān)體硅藻土或高分子多孔小球柱溫265檢測(cè)器FID內(nèi)標(biāo)正三十二烷色譜條件適用性試驗(yàn) n 500， R245462、JP-RP-HPLC法樣品 dl生育酚固定相十八烷基硅烷鍵合硅膠流動(dòng)相甲醇-水（49

13、 ：1）檢測(cè)波長292nm R2.6 RSD0.8%色譜條件47原理：利用生育酚的易氧化性指示劑：二苯胺（亮黃灰紫）3、鈰量法48氨基嘧啶環(huán)CH2噻唑環(huán)(季銨堿)Cl- HCl第四節(jié) 維生素B1一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)493. 硫色素反應(yīng)4. 堿性：嘧啶環(huán) 伯氨，噻唑環(huán) 季銨 可與酸成鹽 與生物堿 含量測(cè)定 非水堿量法1. 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性2. UV:246nm(鹽酸液)501. 硫色素反應(yīng)（維生素B1專屬反應(yīng)）二、鑒別試驗(yàn)51H+H+2. 沉淀反應(yīng)H+523、硝酸鉛反應(yīng)4、氯化物反應(yīng)53三、含量測(cè)定1. 非水溶液滴定法（ChP2010）喹那啶紅亞甲藍(lán)（紫紅天藍(lán)）加入醋酸汞的目的消除氫鹵酸

14、鹽對(duì)非水滴定的干擾。542. UV法246nm553. 硫色素?zé)晒夥∟aOH56自學(xué)-維生素D:了解雜質(zhì)檢查中麥角甾醇的檢查；2. 初步掌握正相高效液相色譜法的應(yīng)用。57L抗壞血酸第五節(jié) 維生素C一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)581. 強(qiáng)還原性：烯二醇結(jié)構(gòu)59502. 結(jié)構(gòu)與糖類相似，具糖的性質(zhì)- 糖類的顯色反應(yīng)3. UV特征(243nm)4. 溶解性：易溶于水，水溶液呈酸性。605.酸性：一元酸C3OH，pKa = 4.17C2OH，pKa = 11.57616. 水解反應(yīng)：與堿反應(yīng)62二、鑒別試驗(yàn)1. 與氧化劑的反應(yīng)631) 與AgNO3反應(yīng)(ChP2010)2)與2，6 - 二氯靛酚反應(yīng)(ChP2010

15、)氧化型玫瑰紅色藍(lán)色OH（還原型）643) 與堿性酒石酸銅反應(yīng)（USP）4) 與KMnO4反應(yīng)652. 糖類的反應(yīng)糠醛：3. UV0.01mol/L HCL液中，max243nm66 指示劑：淀粉指示液三、含量測(cè)定1. 碘量法（ChP2010）原理67 取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6方法68酸性環(huán)境：減慢VitC被O2氧化速度新沸冷H2O：趕走水中O2 立即滴定：減少O2的干擾附加劑干擾的排

16、除：討論片劑 滑石粉 過濾注射劑 抗氧劑 丙酮Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5692. 2，6 - 二氯靛酚滴定法原理方法自身指示劑終點(diǎn)法70討論（1）酸性環(huán)境（HPO3-HAc）： 穩(wěn)定VitC（2）快速滴定（2min內(nèi) ）： 防止其他還原性物質(zhì)干擾（3）剩余比色測(cè)定71（4）缺點(diǎn) 需經(jīng)常標(biāo)定貯存一周干擾多 氧化力較強(qiáng) （5）專屬性比碘量法高，多用于維生素C 制劑的分析。不穩(wěn)定72在三氯醋酸或鹽酸存在下，經(jīng)水解、脫羧、失水后，加入吡咯即產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物的藥物應(yīng)是 A. 氯氮卓 B. 維生素A C. 普魯卡因 D. 鹽酸嗎啡 E. 維生素C習(xí) 題73中國藥典（2005年版

17、）采用以下何法測(cè)定維生素E含量 A. 酸堿滴定法 B. 氧化還原法 C. 紫外分光光度法 D. 氣相色譜法 E. 非水滴定法74 下列藥物的堿性溶液，加入鐵氰化鉀后，再加正丁醇，顯藍(lán)色熒光的是 A. 維生素A B. 維生素B1 C. 維生素C D. 維生素D E. 維生素E75既具有酸性又具有還原性的藥物是 A. 維生素A B. 咖啡因 C. 苯巴比妥 D. 氯丙嗪 E. 維生素C76 測(cè)定維生素C注射液的含量時(shí)，在操作過程中要加入丙酮，這是為了 A. 保持維生素C的穩(wěn)定 B. 增加維生素C的溶解度 C. 使反應(yīng)完全 D. 加快反應(yīng)速度 E. 消除注射液中抗氧劑的干擾77能發(fā)生硫色素特征反應(yīng)的藥物是 A. 維生素A B. 維生素B1 C. 維生素C D. 維生素E E. 煙酸78 可發(fā)生以下反應(yīng)或現(xiàn)象