最終滅菌注射劑的質(zhì)量控制

1、 最終滅菌注射劑質(zhì)量控制 1污染微生物的來源內(nèi)源性的影響因素空氣凈化系統(tǒng)水工藝過程物料 外源性的影響因素人員 2芽孢是關鍵控制點G+G-微生物無處不在氣源性微生物革蘭氏陽性菌較多它們可形成芽孢，難以殺滅因此，藥品生產(chǎn)需要HVAC水源性則革蘭氏陰性菌居多不會生成孢子但會形成細菌內(nèi)毒素3一、什么是芽孢？當某些細菌遇到不良生存環(huán)境條件時，為保護自身，在細胞內(nèi)形成一外壁厚而堅硬的體眠體，該體眠體即稱芽孢（Spore）或孢子。由于其對不良環(huán)境的耐受性遠高于生長態(tài)細胞，常被用于挑戰(zhàn)滅菌工藝，以確認被滅菌物品無菌的可靠性。4芽孢的特性主要產(chǎn)生于Gram+ 細菌的兩個屬芽孢桿菌屬 Bacillus梭菌屬 Cl

2、ostridium能抵御各種惡劣環(huán)境，可存活上百萬年，因為它有厚的皮層結構僅含核酸及少量萌發(fā)必需物含水量極低休眠體，內(nèi)生孢子，不可再生（每個細胞只產(chǎn)生一個芽孢）；真菌孢子屬于分生孢子，不具上述特性。5細菌芽胞（孢）的形成及其特性成熟芽孢孢子壁母細胞孢子壁的形成生長態(tài)細胞6熱對活細胞的作用有一種可引發(fā)克雅氏綜合癥 (Creutzfekldt- Jakob）的普里昴 ( prion）病原體，在132下加 一小時才可完全殺滅（克雅氏綜合癥：俗稱人體瘋牛?。┬柩蹙械难挎邨U菌屬(Bacillus)和厭氧菌中的梭狀芽孢桿菌屬(Clostridium)，耐熱性較強它們能產(chǎn)生內(nèi)源性孢子/芽孢，或胞間休眠體，

3、對熱、干燥及化學消毒劑的耐受性大大增強這類芽孢的干熱滅菌溫度一般在100 170，濕熱滅菌的溫度則在80 129之間。7從“欣弗”事件談滅菌工藝欣弗事件的發(fā)生2006年7月安徽華源克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液不良事件報告81例，涉及10個省份8欣弗到底怎么了？9克林霉素磷酸酯注射劑產(chǎn)品的調(diào)查克林霉素磷酸酯氯化鈉注射（100ml:0.6g）采用半無菌工藝生產(chǎn)滅菌條件100、7分鐘貯存條件陰涼有效期1年有些企業(yè)的處方中含有苯甲醇穩(wěn)定性考察有一批留樣的有關物質(zhì)為7.9有關物質(zhì)總雜不得過8.0 單雜不得過5.010克林霉素磷酸酯注射劑產(chǎn)品的調(diào)查克林霉素磷酸酯注射液（2ml:0.3g）滅菌條件100、31

4、0分鐘貯存條件遮光、密閉保存有效期2年處方中含有苯甲醇有關物質(zhì)總雜不得過6.0（2004年底改為8.0）單雜不得過4.011從上述調(diào)查看國內(nèi)滅菌注射劑生產(chǎn)的缺陷對滅菌的認識不正確產(chǎn)品研發(fā)未考慮滅菌工藝的可行性忽視工藝的可行性，盲目跟風報批注射劑用原料藥的雜質(zhì)控制不嚴忽視產(chǎn)品的安全性12中國醫(yī)藥報 2007年1月4日 A6版13無菌藥品常用滅菌工藝的比較類別Fo值微生物存活概率要點說明過度殺滅法Fo1210-6熱穩(wěn)定性產(chǎn)品以殺滅微生物作為實現(xiàn)無菌的手段殘存概率法8Fo710-3不能加熱的產(chǎn)品不能除去病毒、支原體等微生物LRV=log reduction value 過濾對數(shù)下降值一般上游為107

5、下游為1，則LRV=7由于操作較多，最終產(chǎn)品達到的無菌保證水平遠低于除菌過濾的水平14影響濕熱滅菌效果的因素待滅菌產(chǎn)品中含有微生物的種類和數(shù)量待滅菌產(chǎn)品的包裝形式待滅菌產(chǎn)品的裝載方式和裝載數(shù)量濕熱滅菌工藝條件濕熱滅菌設備15無菌保證水平SAL無菌保證水平（Sterility Assurance Level）表示物品被滅菌后的無菌狀態(tài)按國際標準，濕熱滅菌法的無菌保證值不得低于10-6，即滅菌后微生物存活的概率不得大于百萬分之一。16滅菌工藝驗證的必要性滅菌產(chǎn)品的無菌保證不能依賴于最終產(chǎn)品的無菌檢驗，而是取決于生產(chǎn)過程中采用合格的滅菌工藝、嚴格的GMP管理和良好的無菌保證體系滅菌工藝的驗證是無菌保

6、證的必要條件滅菌工藝經(jīng)過驗證后，方可正式用于生產(chǎn)17國內(nèi)企業(yè)滅菌工藝驗證常見缺陷無包裝規(guī)格無裝載方式未對每一種產(chǎn)品每一種包裝規(guī)格的每一種裝載方式進行驗證采用留點溫度計監(jiān)測溫度無溫度探頭校準記錄驗證的滅菌工藝與實際工藝不一致未驗證最差滅菌條件設定的驗證合格標準達不到無菌保證水平（SAL）10-6生物指示劑使用不規(guī)范18滅菌工藝檢查要點生產(chǎn)環(huán)境和待滅菌產(chǎn)品中含有微生物的種類和數(shù)量研究和監(jiān)控待滅菌產(chǎn)品的包裝形式、裝載方式和裝載數(shù)量滅菌工藝條件滅菌設備關鍵控制參數(shù)的控制和記錄儀表的校準設備維護和維修滅菌的記錄滅菌工藝的驗證選用的生物指示劑熱分布試驗，找出最冷點位置無菌檢驗樣品的取樣19無菌檢查20無菌

7、檢查的局限性無菌的定義理論上：無菌沒有任何活的微生物實際上：我們無法證明產(chǎn)品中沒有活微生物存在無法對整批產(chǎn)品進行100%檢驗無菌檢驗的結果只是一個基于“可能性”的判斷無菌檢驗用培養(yǎng)基有其局限性只進行細菌和真菌的檢驗對實驗結果的判定是基于“是否在培養(yǎng)基中生長”培養(yǎng)條件（如溫度和時間）是有限的我們的工作環(huán)境及操作是在相對無菌的狀態(tài)21美國非腸道藥物學會注射劑無菌測試結果試驗目的：不合格的可能性(%)試驗批量：60,000支試驗方法：按美國藥典無菌測試方法真實的不合格率測試20支樣品不合格的可能性測試40支樣品不合格的可能性118.2%33.1%564.2%87.2%1596.1%99.8%3099

8、.9%100.0%22上述無菌測試結果的啟示含有少量微生物污染產(chǎn)品的批次也有可能“通過”無菌檢驗一批產(chǎn)品的染菌率越低，根據(jù)無菌檢驗的結果來判定整批產(chǎn)品的無菌，其風險就越大23如何用無菌檢驗來證明整批產(chǎn)品無菌要求有一個取樣計劃來涵蓋整個批號有足夠的取樣量和檢驗量選擇適用的培養(yǎng)基采用經(jīng)驗證的無菌檢驗方法良好的環(huán)境監(jiān)控24檢驗標準制定依據(jù)2003驗證指南 QC-751E注射劑藥液過濾前含菌量測定M-00 061A 注射劑滅菌前藥液污染水平及耐熱性檢查25大容量注射劑舉例滅菌前藥液的含微生物的計算過程：根據(jù)2003版藥品上產(chǎn)驗證指南 lgP=lgN-F0/D121P:滅菌后產(chǎn)品內(nèi)微生物存活概率 N:滅

9、菌前藥液的含耐熱孢子的量 D121:微生物耐熱參數(shù)，系指一定溫度下將微生物殺滅90%或使之下降一個對數(shù)單位所需的時間（分）lgN = lgP+F0/D121= lgP+FT/DT(N值與FT成正比，與DT成反比)該產(chǎn)品（葡萄糖）采用115滅菌32min,產(chǎn)品滅菌的F08,為更嚴格的控制滅菌前產(chǎn)品的生物負載，F(xiàn)0取8計算。26大容量注射劑舉例DT與生產(chǎn)環(huán)境，以及過濾截留得到的微生物有關，需要確認污染微生物的耐熱性，在未檢測到耐熱微生物時，DT通常按1計算。為更嚴格的控制滅菌前產(chǎn)品的生物負載， 取DT 為1計算。lgN =lg10-6 +8/1 N=100CFU/袋（產(chǎn)品規(guī)格為250ml）N=40CFU/100ml27檢測重點污染水平微生物耐熱性28取樣 滅菌前藥液直接取樣，每個樣品取樣大容量注射劑（兩個最小包裝，最少各 100mL）。小容量注射劑兩份，最少各100mL。滅菌后取樣大容量注射劑各約50mL。29檢測方法污染水平檢查先用滅菌的含5吐溫80的pH7.0氯化鈉蛋白胨潤濕0.45m濾膜，然后過濾100mL滅菌前藥液，有抑菌性的藥液需用已驗證量的緩沖液沖洗濾膜，以消除藥液的抑菌性），再以無菌方式將濾膜菌面朝上貼于準備好的胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）上，同時做1個陰性對照。胰