革蘭染色和血漿凝固酶實(shí)驗(yàn)

1、 器具：接種環(huán)（上）和接種針（下） 柄約22cm25mm絕緣柄約7.5cm金屬柄約14.5cm58cm安裝環(huán)(針)的螺口(約8mm)細(xì)菌涂片的制備操作原則：無菌操作（燒灼滅菌）Aseptic area10-20cm外焰焰芯內(nèi)焰菌液采取法細(xì)菌涂片的制備一、細(xì)菌涂片的制備 一般制備涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片 干燥 固定【操作步驟】固定的目的：使細(xì)菌的細(xì)胞凝固，使菌體與玻片粘得更牢固；可改變菌體對(duì)染料的通透性；加熱固定可殺死細(xì)菌，比較安全。 結(jié)晶紫 1 碘液 1 95% 乙醇 30” 復(fù)紅 1 沖洗 濾紙干燥 油鏡觀察沖洗沖洗沖洗二、革蘭染液染色初染媒染脫色復(fù)染【操作步驟】紫色（G）革蘭氏

2、染色步驟示意圖革蘭氏染色甲菌乙菌初染結(jié)晶紫媒染碘液脫色乙醇復(fù)染稀釋復(fù)紅紫色（G）紅色（G-）革蘭氏染色步驟示意圖【結(jié)果】細(xì)菌被染成紫色者，稱為革蘭陽性菌；而細(xì)菌染成紅色者，稱為革蘭陰性菌；陽性菌紫色 陰性菌紅色【意義】鑒別細(xì)菌，用本法染色可將細(xì)菌分成兩大類。了解致病性指導(dǎo)選擇用藥【革蘭氏染色法的原理 】 1、細(xì)胞壁通透性學(xué)說 2、等電點(diǎn)學(xué)說 3、化學(xué)學(xué)說 通透性學(xué)說G+菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)致密，肽聚糖層厚，脂質(zhì)含量少，乙醇不易進(jìn)入。G-菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)疏松，肽聚糖層薄，含大量脂質(zhì)，乙醇易滲入。 等電點(diǎn)學(xué)說G+菌等電點(diǎn)（pI23）G-菌等電點(diǎn)（pI45） 在相同pH條件下G+菌所帶負(fù)電荷比G-菌多，所以與帶正電荷的結(jié)晶紫染料結(jié)合較牢固，不易脫色?；瘜W(xué)學(xué)說G+菌菌體內(nèi)含有大量核糖核酸鎂鹽，可與碘、結(jié)晶紫等染料牢固結(jié)合，使已著色的細(xì)菌不易被乙醇脫色G-菌 菌體內(nèi)含核糖核酸鎂鹽很少，故易被脫色注 意 事 項(xiàng)涂片的厚度。固定的程度。染色的時(shí)間控制：一一半一。沖洗的方法，不要對(duì)著涂片區(qū)。95% 乙醇脫色時(shí)間。實(shí)驗(yàn)報(bào)告（作業(yè)）簡(jiǎn)要寫出革蘭氏染色原理、操作步驟繪制革蘭染色鏡下細(xì)菌圖原理和意義 致病性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，使人或動(dòng)物血漿發(fā)生凝固，因此，測(cè)定血漿凝固酶的有無是鑒定葡萄球菌致病性的重要依據(jù)。血漿凝集試驗(yàn)步驟： 血漿 血漿12 金葡（1環(huán)） 白葡（1環(huán)） + + 凝集（+）不