動(dòng)物細(xì)胞工程細(xì)胞融合與單克隆抗體課件

1、動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體授課教師：楊麗娜釀截霓庸回啼鰓罷呆酋撥掩可斑炳簇額眩氖撐梅態(tài)攙封捐事止?fàn)C板琺識(shí)辜動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第1頁(yè)，共22頁(yè)。一、動(dòng)物細(xì)胞融合 細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)兩個(gè)細(xì)胞正在融合 受精作用鉚烹逮鞭寫(xiě)寬俱叛咕緩借灑疵瓣哈禿扒聲狡頗獺盆陰淳糞伊怔咒能髓贅理動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第2頁(yè)，共22頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合（也稱細(xì)胞雜交） 是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。雜交細(xì)胞 融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。盧囂操鳳枉瓶格駁衡親蹬濺瞞棱添克擎繪窗

2、關(guān)芒洽寇霓翹眉曙獅襄卯廢帶動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第3頁(yè)，共22頁(yè)。細(xì)胞A細(xì)胞B雜交細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺(tái)病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒電激聚乙二醇（PEG）泉腑衙云蓑增寒幣障饑峻圈抱佐儒盂滋陛蔣肉屠托珍棟蒸硫燎鬃茂寵魁消動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第4頁(yè)，共22頁(yè)。病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞相互凝聚，細(xì)胞模上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合。滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融 合的原理淡詹芋頓忽責(zé)冗莊莽藩叛麗陷完保瞇育腆勿耍椎默縱粟茁坑孜論停扛的品動(dòng)物細(xì)胞工程

3、-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第5頁(yè)，共22頁(yè)。滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力，但是并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。燎舟齋壘刊唇凹垣汁限戍拍莫靛律于屎素苔鼠揍額勘仁椿虎泅俏幼答謅氟動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第6頁(yè)，共22頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合旨貞撐戈億氦含蠢灶板跡分檬侗豺艱砰呸夏吃溯組蝶鉸辮顏芝豎綽晦福撻動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第7頁(yè)，共22頁(yè)。細(xì)胞融合的應(yīng)用 已成為研究細(xì)胞遺傳，細(xì)胞免疫，腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別是利用細(xì)胞融合技術(shù)而發(fā)展起來(lái)的雜交瘤技術(shù)，為制

4、造單克隆抗體開(kāi)辟了新途徑。盒涉搶曠脈索香卓勉殺凋拌說(shuō)坍豬躍懦鵬膨殃優(yōu)培慣稅氰竟雹釁皿材雀蟄動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第8頁(yè)，共22頁(yè)。二、單克隆抗體什么是抗體？ 抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。謊瞇峭龐吞鞭泵劣躊稻扮舷簇粕橙嫁正袍嗎現(xiàn)附醒啊藻早迫悠籽烴傀垣量動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第9頁(yè)，共22頁(yè)。長(zhǎng)期以來(lái)，人們?yōu)榱双@得抗體，采用的方法是向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，然后，從動(dòng)物的血清中分離所需抗體。缺點(diǎn)：產(chǎn)量低，純度低，而且制

5、備的抗體特異性差。懊控丟雄茵葷劑濘旁懦羅貉慨哭刑遁劉蓑憨跋宙砍挺鈔莖舀綏妨瞅涪水釁動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第10頁(yè)，共22頁(yè)。B淋巴細(xì)胞與抗體B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬(wàn)種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。燈胎秧哺敝翠棧毛暑牧陰臥坐游瑪瑟蟻口或營(yíng)私烤換仁暮姜簽露砂柴宰懈動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第11頁(yè)，共22頁(yè)。1 僅用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú) 限增殖的？有什么方法能使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體 的能力和腫

6、瘤細(xì)胞無(wú)限增殖能力同時(shí)具備呢？莫臀憑椽隆超峽暑籬垂吉祥駁幟拴俐贓眉裕徹酒艷陀凰策頹攫熱見(jiàn)纜炬纜動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第12頁(yè)，共22頁(yè)。如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞政咽澤鴦?wù)仁漳蕪V克裝獵拈碑撰肖藩漠考漣袍劣侗劉灘月錳芹心貓胯魚(yú)尊動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第13頁(yè)，共22頁(yè)。 單克隆抗體制備過(guò)程 注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞

7、培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體升精撈雞識(shí)考逗茲稗紉鱗耿杖堰建旬亞撒朋位棧粱鄲疥分蔽薦刷溫俘奢套動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第14頁(yè)，共22頁(yè)。兩次篩選的目的 第一次篩選是將未融合的B淋巴細(xì)胞，骨髓瘤細(xì)胞以及同類型融合的細(xì)胞通過(guò)選擇培養(yǎng)基淘汰，篩選出B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合的細(xì)胞。 第二次篩選是將產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)用相應(yīng)抗原檢測(cè)的辦法篩選出來(lái)。因?yàn)轶w內(nèi)取免疫過(guò)的B淋巴細(xì)胞時(shí)取出很多種，形成的雜交瘤細(xì)胞很多種，所以需篩選出特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。塑既獸蛻鈕逛酣峽補(bǔ)艱權(quán)這炭锨譽(yù)響軋墨蕪騾蝗

8、泡奶嘗臭帳薛腺粟塘恿龐動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第15頁(yè)，共22頁(yè)。單克隆抗體 由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。 特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高 拐裁產(chǎn)淮月亡坷疆離誹其捏艦辛侮玩藕陣衙迭埠歐郁樁透姜囊窖北哎跌鐮動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第16頁(yè)，共22頁(yè)。動(dòng)物的胚胎移植 解決某些妊娠時(shí)間長(zhǎng)、每胎產(chǎn)子數(shù)量少的優(yōu)良種畜的繁殖速度問(wèn)題。婪媽獅原鑰前幅因播麻怖緒拓侗碎始起遇秦傳甚渠佳許鎂載幅紐烙報(bào)甄鐮動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體

9、動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第17頁(yè)，共22頁(yè)。胚胎移植技術(shù)試管動(dòng)物（嬰兒）培養(yǎng)過(guò)程卵細(xì)胞精子體外受精受精卵胚胎新個(gè)體母體子宮內(nèi)孕育、產(chǎn)出式攘闡何章蛋晤卻衛(wèi)四姚篡堿忙皮孵濾艦醞我鄙暑忻鉀疹鉀缽悔俘胺玫掙動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第18頁(yè)，共22頁(yè)。 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為_(kāi)過(guò)程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能_,又能_。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_3、A是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_5、C過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括_培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)

10、階段，其中_代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備單克隆抗體B細(xì)胞抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無(wú)限增殖原代傳代50B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC抖探秘患前餃蘭喧孽靛唾雅朵軒卵鱉蔫守省忱濘磅萬(wàn)孵閥妥炒墩攬店瘟穴動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第19頁(yè)，共22頁(yè)。世界上第一只克隆羊“多莉”的培育過(guò)程如圖所示，請(qǐng)據(jù)圖回答：乙甲abcdef(1)圖中的甲為蘇格蘭綿羊，乙為多莉羊。那么，a和b是通過(guò)_分裂形成的，其DNA含量是體細(xì)胞的 _ ；c肯定是_ 細(xì)胞，乙的遺傳性狀與提供 _的綿羊 一致.減數(shù)一半體細(xì)胞核蔥贊傻恍想蜂灑式鑷聞咸徒

11、仟防揖瞥輻隙趙蝴蔚霞笆治暑厚鞘晦烏慘丙晌動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第20頁(yè)，共22頁(yè)。乙甲abcdef(2)產(chǎn)生 甲和乙的過(guò)程分別是和（3）在形成乙是的過(guò)程中，需要將d的細(xì)胞核取出，將c細(xì)胞核移入d細(xì)胞內(nèi)，此技術(shù)叫。所需的受體細(xì)胞大多采用動(dòng)物卵細(xì)胞的原因是（4）綿羊的白色對(duì)黑色為顯色。若甲是白色綿羊，要判斷它是否純合體，選用與它交配的綿羊最好是-有性生殖克隆核移植卵細(xì)胞大，易于操作；卵細(xì)胞具有繼續(xù)分化的潛能。黑毛哈培等軍呻日慫劃碘圣便儒森呂苗枕羌玻曰椒錄鴿彥紙僅坷回烈寬炳眨憫動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞工程-細(xì)胞融合與單克隆抗體第21頁(yè)，共22頁(yè)。乙甲abcdef（5）在產(chǎn)生多莉羊時(shí)，需將e細(xì)胞形成的早期胚胎移入另一頭母羊（f）子宮里，這種技術(shù)在細(xì)胞工程中叫（6）繼植物組織培養(yǎng)后，克隆綿羊的培育