病理技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展

1、病理(bngl)技術(shù)的規(guī)范化發(fā)展浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一(dy)醫(yī)院共八十頁 病理學(xué)技術(shù)包括傳統(tǒng)病理學(xué)技術(shù)和現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)。傳統(tǒng)病理學(xué)技術(shù)（HE切片），是病理學(xué)的基礎(chǔ)，大量應(yīng)用于日常(rchng)工作中，是提高病理學(xué)診斷水平和現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)的保證。共八十頁 回顧過去，病理學(xué)的重大發(fā)現(xiàn)，無一不是新技術(shù)的發(fā)明和應(yīng)用的結(jié)果。 同時(shí)新技術(shù)的應(yīng)用，也受到病理學(xué)診斷水平和科研(k yn)能力的制約。共八十頁 目前，我國病理技術(shù)主要還是以常規(guī)HE、特染和免疫組化為主，整體水平并不高，處于中等以下(yxi)水平。在講規(guī)范化的前面，我想先分析一下我國病理科存在的問題：共八十頁 一、 技術(shù)員存在(cnzi)的問題：

2、 共八十頁 （1） 技術(shù)員隊(duì)伍整體素質(zhì)不高，學(xué)歷(xul)偏低。大多數(shù)病理科技術(shù)員都是中專畢業(yè)，也有的是由工人轉(zhuǎn)的，有的是由護(hù)士或其它專業(yè)轉(zhuǎn)的。 共八十頁 我反對(duì)唯學(xué)歷論，學(xué)歷并不能完全(wnqun)代表一個(gè)人的能力，但在大多數(shù)情況下，學(xué)歷還是能力的體現(xiàn)。經(jīng)歷了大學(xué)或研究生的培養(yǎng)和學(xué)習(xí)，他們的知識(shí)面和考慮問題的思路都不一樣，他們更有發(fā)展?jié)摿Α?共八十頁（2）、在主觀上不求上進(jìn)者甚多，我這樣說會(huì)引起技術(shù)員的公憤，但事實(shí)的確如此，沒有理想，不思改進(jìn)，做一天算一天，已是很多技術(shù)員的通病(tngbng)。這就和我們的體制有關(guān)，只有通過崗位競聘，才會(huì)讓技術(shù)員認(rèn)識(shí)到問題的嚴(yán)重性。共八十頁 （3）缺少正規(guī)的

3、培養(yǎng)和學(xué)習(xí)的機(jī)會(huì)，很多技術(shù)員的技術(shù)都是師傅帶徒弟式的方法教的，也有的自學(xué)了；有的盡管出去進(jìn)修(jnxi)了，但學(xué)回來的并不一定是正確的。缺少相互交流的機(jī)會(huì)，技術(shù)會(huì)議少，技術(shù)員出來的機(jī)會(huì)就更少。 共八十頁（4）缺少比較：我到過很多片子做的很差的單位，我發(fā)現(xiàn)醫(yī)生、技術(shù)員的自我感覺都很好，認(rèn)為自己做的很不錯(cuò)，對(duì)“好”沒有概念，如果不知道優(yōu)秀的片子怎么樣，那么對(duì)切片(qi pin)質(zhì)量就不會(huì)有一個(gè)正確的認(rèn)識(shí)。 共八十頁 有的技術(shù)員出去學(xué)習(xí)，也是走馬觀花，覺得沒什么好學(xué)的，別人做的和自己沒什么不一樣(yyng)。諸不知每一個(gè)人的動(dòng)作都有細(xì)微的差異，正因?yàn)檫@些細(xì)微的差異，導(dǎo)致了每個(gè)人切片質(zhì)量的不一樣(yy

4、ng)。 共八十頁 還有一些技術(shù)員，把一些不規(guī)范的甚至是錯(cuò)誤的東西當(dāng)成了經(jīng)驗(yàn)(jngyn)來宣傳、使用和推廣。 共八十頁（5）人的惰性 當(dāng)技術(shù)發(fā)展到一定階段(jidun)，或者做了一段時(shí)間后，就會(huì)慢慢的產(chǎn)生惰性，墨守成規(guī)，不思更新，好的規(guī)章制度也會(huì)慢慢的消失，然后固步自封，業(yè)務(wù)水平停頓甚至倒退。共八十頁（6）不能正確擺正自己的位置。程天民院士曾經(jīng)說過，診斷與技術(shù)是二個(gè)輪子，缺一不可，互為依存。我認(rèn)為這個(gè)說法(shuf)不夠確切，容易讓人主次不分。醫(yī)生與技術(shù)員的風(fēng)險(xiǎn)與價(jià)值是不能等同的。 共八十頁 有的技術(shù)員什么事情都要和醫(yī)生比，當(dāng)二者出現(xiàn)差異后，醫(yī)技關(guān)系(gun x)就開始緊張，有的就和醫(yī)生頂著

5、干，有的自暴自棄，也有的目空無人，孤芳自賞。 共八十頁 我覺的任何事物都有主次，紅花總要綠葉配，但不能因?yàn)榫G葉重要就可以(ky)代替紅花。 共八十頁病理科也是一樣(yyng)，醫(yī)生是主角，技術(shù)員是配角，技術(shù)員就是要配合醫(yī)生做好工作，你既然干了技術(shù)這個(gè)工作，就應(yīng)該有這樣的思想準(zhǔn)備，應(yīng)該正確的面對(duì)現(xiàn)實(shí)。病人來看病，總是沖著醫(yī)生的診斷水平來的，不會(huì)因?yàn)槟愕钠幼龅煤脹_著你來。 共八十頁 我覺得病理科更像一輛火車：主任是車頭(ch tu)，醫(yī)生是車箱，技術(shù)員是火車的輪子。技術(shù)是決定火車額定速度的動(dòng)力。最終火車開的好不好，還要靠大家齊心協(xié)力。 共八十頁常聽技術(shù)員說現(xiàn)在技術(shù)員的地位越來越低了，于是就感到技

6、術(shù)工作沒前途。 我想這有二方面的因素：第一(dy)，你的工作是否已經(jīng)做好。 共八十頁 第二(d r)，隨著社會(huì)的發(fā)展，改革的深入，對(duì)知識(shí)重視，醫(yī)生與技術(shù)員之間的差異會(huì)增大，我想這也是正常的，我們不是整天叫中國要尊重知識(shí)嗎，不能因?yàn)閷?duì)自己不利就不滿意了，我們只有服從這個(gè)社會(huì)，而不能叫社會(huì)服從我們。共八十頁人與人、工作與工作之間由于機(jī)遇不同，性質(zhì)不同，社會(huì)地位就會(huì)不同，沒必要比來比去。但如果(rgu)你不用心去做每一件事，任何一個(gè)工作對(duì)你來說都不會(huì)有好前途。只要你把本職工作做好了，別人就會(huì)尊重你。工作只有分工不同，沒有貴賤之分。共八十頁在國外，很多國家的病理科技術(shù)員要比醫(yī)生早上班4個(gè)多小時(shí)，也就是

7、說在醫(yī)生到科前，你就要把昨天取材的組織做好，放在他的桌上。我想遲早，中國也會(huì)走上這條路。工作是一個(gè)謀生(mushng)的手段，敬業(yè)，也是為了更好的保住自己的飯碗。共八十頁二、醫(yī)生(yshng)的原因：共八十頁 很多人會(huì)說，技術(shù)員工作(gngzu)做的不好，和醫(yī)生沒什么關(guān)系，其實(shí)不然。最簡單的如取材，如果醫(yī)生取材厚薄不均，組織就處理不好，HE切片和免疫組化質(zhì)量都會(huì)有影響。 共八十頁（1）醫(yī)生工作和學(xué)習(xí)的態(tài)度，在很大程度(chngd)上影響著技術(shù)員，如果醫(yī)生不喜歡學(xué)習(xí)，技術(shù)員一般也不會(huì)學(xué)習(xí)。前面我說過新技術(shù)的應(yīng)用，會(huì)受到病理診斷水平和科研能力的制約。如果醫(yī)生什么都不懂，什么工作都不開展，技術(shù)員的業(yè)

8、務(wù)水平也無法提高。 共八十頁 2）將就 很多醫(yī)生不管技術(shù)員切片(qi pin)做的多差，能將就的就將就，造就了技術(shù)員的惰性，我認(rèn)為這是對(duì)病人的不負(fù)責(zé)，對(duì)技術(shù)員的不負(fù)責(zé)，也是對(duì)自己不負(fù)責(zé)。共八十頁（3）看不起技術(shù)。 這樣的病理醫(yī)生其實(shí)很多，認(rèn)為技術(shù)員只是操作工，培養(yǎng)個(gè)2-3個(gè)月就可以做得很好（當(dāng)然這很大程度也有我們技術(shù)員自己造成的，技術(shù)水平越差，醫(yī)生就越看不起，你越看不起，就做的越差，這是一種(y zhn)惡性循環(huán)）。 共八十頁 這就要求我們的醫(yī)生與技術(shù)員，要懂得如何尊重別人(birn)。 尊重別人，就是尊重自己。要讓別人尊重你，首先你要尊重別人。共八十頁 而目前我國大多數(shù)的技術(shù)員（包括(bok

9、u)我自己）只是涉及到病理技術(shù)的一小部分，只學(xué)會(huì)了一點(diǎn)皮毛，要學(xué)好技術(shù)，和國際接軌，還有很長的一段路要走。 共八十頁 重視技術(shù)，提高技術(shù)水平，可以減少由于制片質(zhì)量引起(ynq)的誤診，最終受益的是我們的醫(yī)生和病人。共八十頁 三、 錢 金錢，是造成很多病理科醫(yī)技關(guān)系緊張的原因之一。在中國，病理醫(yī)生的高風(fēng)險(xiǎn)、高技術(shù)并未在價(jià)值上體現(xiàn)出來，與臨床醫(yī)生相比，相差甚遠(yuǎn)。于是有的醫(yī)生就把目光投向了技術(shù)員的口袋，覺得技術(shù)員的業(yè)務(wù)水平與風(fēng)險(xiǎn)不能與自己相比，自己應(yīng)該比技術(shù)員拿的多。這種觀點(diǎn)對(duì)不對(duì)，應(yīng)該說完全正確。但是，在中國這是一個(gè)社會(huì)體制問題(wnt)，我們也認(rèn)為醫(yī)生的收入太少了，多一點(diǎn)也應(yīng)該。無論從社會(huì)地位，

10、經(jīng)濟(jì)收入上，醫(yī)生與技術(shù)員本身就存在差異，。 共八十頁如何(rh)解決1、不斷的向社會(huì)呼吁，提高人們對(duì)病理的認(rèn)識(shí)，提高病理收費(fèi)，價(jià)格是價(jià)值的體現(xiàn)。2、 醫(yī)技雙方應(yīng)該齊心協(xié)力(q xn xi l)，多想想如何從醫(yī)院多爭取錢，如何提高業(yè)務(wù)水平，用技術(shù)賺錢，在合法的條件下拓展業(yè)務(wù)賺錢。3、合理的分配醫(yī)技人員比例，把醫(yī)生從簡單勞動(dòng)中解放出來。最終以年薪制代替目前的工資獎(jiǎng)金制。共八十頁1、 其他原因：1） 有科研(k yn)能力的與沒科研(k yn) 能力的病理科之間的差異2）大醫(yī)院與小醫(yī)院之間的差異3）經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)與落后地區(qū)的差異 共八十頁 如何解決這些問題：1、 首先技術(shù)員要正確認(rèn)識(shí)自己，擺正自己的位

11、置，樹立(shl)遠(yuǎn)大的理想，要有責(zé)任感和緊迫感，懂得自尊，自強(qiáng)，自愛。共八十頁2、 多學(xué)習(xí)理論知識(shí)，多向同行學(xué)習(xí)，學(xué)會(huì)總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，學(xué)會(huì)理論與實(shí)際相結(jié)合，學(xué)會(huì)新的技術(shù)(jsh)，學(xué)會(huì)用腦干活。共八十頁 3、需要醫(yī)生和科主任的大力支持，沒有醫(yī)生的支持，提高病理技術(shù)是一句空話。 4、科學(xué)的管理和規(guī)范化操作(cozu)，是解決質(zhì)量問題的關(guān)鍵。共八十頁病理技術(shù)很多是憑經(jīng)驗(yàn)工作，由于經(jīng)驗(yàn)的隨意性較大，導(dǎo)致質(zhì)量(zhling)的不穩(wěn)定性。和國際接軌，是我們的奮斗目標(biāo)，在這背景下，中華病理學(xué)會(huì)提出了病理技術(shù)規(guī)范化操作。 共八十頁 病理技術(shù)有很多小竅門，有的是在犧牲制片質(zhì)量的前提下發(fā)明的，使用者往往自己不知道(

12、zh do)。每個(gè)地方操作方法不同，導(dǎo)致制片質(zhì)量各不相同。共八十頁規(guī)范化操作是病理制片質(zhì)量的保證，而量化的管理(gunl)增加了病理制片質(zhì)量的穩(wěn)定性。共八十頁 所謂規(guī)范化，就是在操作過程中，對(duì)使用試劑種類、pH值、濃度、溫度、時(shí)間以及操作的步驟都有詳細(xì)(xingx)的規(guī)定，盡可能的減少人為的影響，減少各種變量，減少影響制片質(zhì)量的條件。特別是在做分子技術(shù)時(shí)，更應(yīng)嚴(yán)格按操作規(guī)程做。共八十頁所謂量化，就是把以前(yqin)經(jīng)驗(yàn)的東西用量來判定。 共八十頁下面(xi mian)我就講一下病理技術(shù)的規(guī)范化操作共八十頁一、建立完善(wnshn)的規(guī)章制度 沒有規(guī)矩不成方圓，沒有制度(zhd)就沒有質(zhì)量的保

13、證。共八十頁共八十頁共八十頁共八十頁有了制度(zhd)最重要的是要去執(zhí)行 二、建全監(jiān)督機(jī)制 成立省質(zhì)量控制中心，定期進(jìn)行(jnxng)室間質(zhì)控和室內(nèi)質(zhì)控檢查 共八十頁室間質(zhì)控全省各醫(yī)療機(jī)構(gòu)的病理科都必須嚴(yán)格實(shí)施質(zhì)量管理，按規(guī)定參與質(zhì)控檢查工作，接受室間質(zhì)控的評(píng)價(jià)。組織專家(zhunji)定期對(duì)全省各級(jí)醫(yī)院病理科進(jìn)行基本設(shè)施、設(shè)備、人員結(jié)構(gòu)、開展工作項(xiàng)目、完成質(zhì)量進(jìn)行抽檢考評(píng)，并與等級(jí)醫(yī)院、文明醫(yī)院評(píng)審掛鉤。共八十頁室內(nèi)(sh ni)質(zhì)控各項(xiàng)制度、規(guī)范應(yīng)該健全、完善，做到有章可依，落實(shí)到人。每天自檢制片質(zhì)量，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題，確保質(zhì)量穩(wěn)定，并做好評(píng)價(jià)、記錄、以及整改措施。嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)本驗(yàn)收、報(bào)告發(fā)送、

14、登記、歸檔、資料借閱等規(guī)章制度。定期檢查實(shí)驗(yàn)用試劑及儀器性能，并完整的作好維修(wixi)、維護(hù)、庫存等記錄。共八十頁HE切片(qi pin)的規(guī)范化管理1、固定液的種類、濃度，固定的時(shí)間，溫度。2、脫水：脫水液濃度，脫水的時(shí)間，溫度。以及更換試劑的方法。3、浸蠟的溫度及包埋時(shí)的注意點(diǎn)。4、染色(rns)的控制和染色(rns)液的更換。5、脫水、透明、封片。共八十頁 檢查切片（石蠟、冰凍）的完整性：厚薄均勻、無皺褶(zhu zh)、無刀痕、無污染、色彩分明、樹膠適當(dāng)、無氣泡、編號(hào)清楚。對(duì)有問題的重新處理，并做好記錄。共八十頁冰凍(bngdng)的規(guī)范化管理1、快速冷凍，防止冰晶2、合適的冷凍室

15、溫度3、固定液的選擇4、切片必須(bx)快速固定5、切片、染色必須在10分鐘內(nèi)完成共八十頁免疫組化的規(guī)范化操作(cozu)1、固定液的選擇和固定的時(shí)間2、緩沖液的PH值3、反應(yīng)的溫度與時(shí)間4、適當(dāng)?shù)目贵w稀釋比及有效期5、抗原修復(fù)方法的選擇6、合理的使用檢測系統(tǒng)7、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和內(nèi)源性生物素（設(shè)立陽性片與陰性(ynxng)片）8、正確的陽性結(jié)果與定位共八十頁特殊染色(rns)規(guī)范化操作1、水質(zhì)（蒸餾水或雙蒸水）2、器皿要干凈，不能使用金屬鑷子3、注意(zh y)試劑的有效期限和保存方法4、注意：pH值，溫度，濃度和時(shí)間5、鏡下控制分化共八十頁 特別(tbi)要注意的是： 規(guī)范化不是教條，

16、規(guī)范化不是一成不變，規(guī)范化不是墨守成規(guī)，規(guī)范化也應(yīng)該不斷地創(chuàng)新。共八十頁謝 謝WWW.D謝 謝共八十頁共八十頁固定(gdng) 固定是技術(shù)室工作的第一步，也是在整個(gè)制片過程中無法補(bǔ)救的一步。所謂“固定”，就是(jish)組織離體后，用各種辦法使其細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)盡量接近其生活狀態(tài)時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過程。 共八十頁 固定的目的是為了防止組織細(xì)胞自溶與腐敗，防止細(xì)胞內(nèi)的酶對(duì)蛋白質(zhì)的分解作用，使細(xì)胞內(nèi)的各種成分如蛋白質(zhì)、脂肪(zhfng)、碳水化合物、酶類轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持原有的結(jié)構(gòu)和生活時(shí)相仿。另外，組織固定后，均呈一定的硬化狀態(tài)，增加了組織的韌性，而且不易變形，有利于以后的組織處理。 共八十

17、頁 所以組織一旦離體必需及時(shí)固定(gdng)，固定(gdng)液的量應(yīng)為組織的5倍以上。固定(gdng)的關(guān)鍵主要與固定(gdng)的及時(shí)性、固定(gdng)液的選擇、固定(gdng)液的濃度、固定(gdng)的溫度和時(shí)間有關(guān)。最常用的固定(gdng)液為10福爾馬林。由于10福爾馬林受到福爾馬林的質(zhì)量、使用時(shí)的揮發(fā)和取材時(shí)帶入水分的影響，濃度容易被降低致組織固定(gdng)不足，而高濃度的福爾馬林，降低了對(duì)組織的穿透性，形成周圍固定(gdng)好而中央固定(gdng)不到的現(xiàn)象。所以可以適當(dāng)?shù)脑黾痈栺R林的濃度，以12左右為佳。 共八十頁 pH7.0中性(zhngxng)福爾馬林對(duì)大多數(shù)抗原

18、有很好的保存作用，普通福爾馬林略差，通過大量實(shí)驗(yàn)證明，二者有差異但并不十分明顯，通過對(duì)抗原修復(fù)液、檢測系統(tǒng)和修復(fù)方法的不同選擇，可以減少二者的差異。 共八十頁 由于HE染色時(shí)細(xì)胞核的最佳著色點(diǎn)pH為3.5-4.5,中性福爾馬林對(duì)蘇木素染色有一定影響,細(xì)胞核容易發(fā)灰。而病理診斷，主要(zhyo)還是以HE切片為主，就常規(guī)HE規(guī)范化而言，用普通福爾馬林比中性福爾馬林要好（這僅為我個(gè)人觀點(diǎn)，爭議會(huì)很大，需病理同仁們進(jìn)一步探討）。共八十頁共八十頁 如果每95毫升12的福爾馬林液內(nèi)加入適量的冰醋酸效果會(huì)更佳。當(dāng)然如果根據(jù)(gnj)常規(guī)切片、免疫組織化學(xué)和分子生物學(xué)的需要不同選用二種或二種以上不同的固定液

19、分開制片是最好的解決辦法。共八十頁 脫水(tu shu) 所謂脫水就是(jish)利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來，以利于有機(jī)溶劑的滲入，這一過程稱為脫水。脫水是否徹底，直接關(guān)系到組織是否能充分透明。一般我們總認(rèn)為脫水主要跟高濃度酒精有關(guān)，而忽視了與低濃度的酒精關(guān)系 。低濃度的酒精可以減少細(xì)胞的收縮，使組織更好切。 脫水的關(guān)鍵是如何使低濃度的酒精脫水時(shí)間和高濃度的酒精脫水時(shí)間的正確搭配。 共八十頁 其實(shí)75-80%濃度的酒精具有極強(qiáng)的穿透力，在短時(shí)間(shjin)內(nèi)可以置換出大量的水份，而高酒精容易使蛋白質(zhì)凝固，在組織的表面形成一層硬殼，使酒精難以滲透到組織塊中間去，導(dǎo)致組織脫水不佳；其實(shí)高濃

20、度酒精里只需脫去從低濃度到高濃度之間的水份，如果純酒精時(shí)間(shjin)過久，或在脫水時(shí)加溫過高（超過36），使用丙酮等等，都容易導(dǎo)致組織收縮過度和組織發(fā)硬、發(fā)脆。 共八十頁 組織脫水引起的組織發(fā)脆有二種原因(yunyn)：一種是組織脫水過度，其現(xiàn)象是切起來組織如粉狀或組織特別硬，出現(xiàn)一絲一絲的現(xiàn)象或出現(xiàn)一棱一棱的現(xiàn)象；另一種是假脆，是脫水不足引起的，切起來也是組織硬，也會(huì)出現(xiàn)一棱一棱的現(xiàn)象，還會(huì)使組織整塊整塊往外崩，這種現(xiàn)象主要表現(xiàn)在子宮肌瘤和纖維結(jié)締組織多的組織中；嚴(yán)重脫水不足的組織中間發(fā)軟，甚至還會(huì)有水。共八十頁 為了使組織脫水恰到好處，大小標(biāo)本應(yīng)該分開脫水，一般情況下，大標(biāo)本脫水時(shí)間（

21、35），75酒精1.5小時(shí)，85酒精1.5-2小時(shí)、95酒精（2道）各1.5-2小時(shí)、純酒精（2道）各1小時(shí)。小標(biāo)本脫水時(shí)間應(yīng)相應(yīng)縮短。脫水時(shí)間長短(chngdun)，與室溫高低、固定程度、組織類型、厚薄有密切的相關(guān)。純酒精只需要脫去5%的水份，所以并不需要很長時(shí)間。組織在高濃度酒精里隨著時(shí)間的延長，硬度、脆度也在不斷增加。共八十頁 我們?cè)趯?shí)踐中發(fā)現(xiàn)，室溫在12-15時(shí)，可作為一個(gè)臨界溫度范圍。當(dāng)室溫高于此溫度范圍時(shí)，組織容易脫水，可適當(dāng)縮短脫水時(shí)間；而室溫低于該溫度范圍時(shí)，應(yīng)適當(dāng)延長(ynchng)脫水時(shí)間。從規(guī)范化角度出發(fā)，應(yīng)該盡可能的減少變量，也就是：溫度、濃度和作用時(shí)間。如果一年四季都

22、在一個(gè)恒定的溫度下（35）最好，有條件的應(yīng)該買全封閉自動(dòng)脫水機(jī)。 共八十頁 更換脫水液，應(yīng)以量為基礎(chǔ)，定量更換。根據(jù)我科經(jīng)驗(yàn)，如試劑用量為500ml，每500個(gè)蠟塊更換一次為宜。在更換脫水液時(shí)，不提倡全部試劑向前退的方法，因?yàn)榇朔ú荒鼙ＷC低濃度的酒精的濃度（往往會(huì)偏高），也不能用比重計(jì)去測量脫過水的酒精濃度，因?yàn)槊撨^水的酒精內(nèi)含有(hn yu)大量的脂肪、蛋白質(zhì)，比重計(jì)不能反映出酒精的真正濃度。 共八十頁 所以我們認(rèn)為85% 的酒精不能退到85%的酒精里，95%的酒精不能退到85%的酒精里，無水酒精不能退到95%的酒精里，而第二道的95%的酒精可以退到第一道95%的酒精里，第二道無水酒精也可以

23、退到第一道無水酒精里。要保證各梯度(t d)酒精的真正濃度。只有這樣才能做好每一批組織。 共八十頁 脫水(tu shu)原則： 合理調(diào)整各濃度酒精的脫水時(shí)間，在最短的時(shí)間內(nèi)，把水份脫干凈，使組織收縮(shu su)最小，硬度最適中，切片最舒展、最好切。共八十頁 蘇木素染色時(shí)間要根據(jù)(gnj)染料的新舊、溫度、切片的類型而定，一般為515分鐘。經(jīng)水略洗后，用鹽酸酒精分化是關(guān)鍵，分化程度必須用顯微鏡控制。分化水洗后，可用溫水或自來水藍(lán)化，并充分水洗（流水沖洗5分鐘以上），以防鹽酸殘留導(dǎo)致切片褪色。我們不提倡使用堿性溶液（釋氨水、肥皂水等）促藍(lán)，盡管藍(lán)化效果很好，但從實(shí)踐的結(jié)果來看，用堿性溶液促藍(lán)的

24、切片容易褪色。染液的更換也該應(yīng)量化，蘇木素1500張/500ml，依紅3000張/500ml 。共八十頁 HE染色的關(guān)鍵在于深淺適度，對(duì)比鮮明，一般有經(jīng)驗(yàn)的，肉眼就能判斷，但偶而也會(huì)出現(xiàn)失誤，所以用顯微鏡控制(kngzh)是最保險(xiǎn)的方法。其關(guān)鍵的步驟在于蘇木素染好后的分化及藍(lán)化過程，在藍(lán)化結(jié)束后，應(yīng)在顯微鏡下觀察細(xì)胞核著色是否合適，核結(jié)構(gòu)是否清晰，胞漿內(nèi)是否有殘留的蘇木素等等。染色理想的切片在顯微鏡下應(yīng)是：細(xì)胞核與細(xì)胞漿藍(lán)紅相映，鮮艷美麗；核漿對(duì)比明顯，核膜及核染色質(zhì)顆粒清晰可見。 共八十頁脫水(tu shu)和封片 切片脫水應(yīng)從低濃度的酒精到高濃度的酒精，80%酒精1道，95%酒精2道，純酒精2道，二甲苯2道。濃度低的酒精比濃度高的酒精更容易脫水，但也容易使伊紅褪色，故脫水時(shí)間可短一點(diǎn)，每道13分鐘，純酒精每道510分鐘。為增加酒精與二甲苯的相融性，切片更透徹(tuch)，可在二甲苯前面增加一道正丁醇；石碳酸二甲苯液也有此效，但石碳酸是弱酸性液體，如不洗凈，可引起切片的褪色，不利于切片久存，故不作推薦。 共八十頁 切片經(jīng)二甲苯透明后，用中性樹膠封固。為增加切片的透明度