醫(yī)學(xué)生物化學(xué)教學(xué)課件

1、生物化學(xué)BIOCHEMISTRY 王澤平生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室篇臀笑舶沖統(tǒng)網(wǎng)塘蓑綴高齋嚨短簇音咳菏劇崇液瘋寓既捉貶哺鄂鈍拆淤畢醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能第1章Structure and Function of Protein血蔫辱樂妓報(bào)閣胸師琳睡蘋峙硝葬績幽薔位褐蟻敲來姥陰嗽摘貶歐洗孜受醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件什么是蛋白質(zhì)?蛋白質(zhì)(protein)是由許多氨基酸(amino acids)通過肽鍵(peptide bond)相連形成的高分子含氮化合物。蝶佛恍信向順撇詣止病族店僅我忙敲邀桿白沽塵艇鯉盜荊廣邏贍腥拿圖漁醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件蛋白質(zhì)研究的歷

2、史1833年，從麥芽中分離淀粉酶；隨后從胃液中分離到類似胃蛋白酶的物質(zhì)。1864年，血紅蛋白被分離并結(jié)晶。19世紀(jì)末，證明蛋白質(zhì)由氨基酸組成，并合成了多種短肽。20世紀(jì)初，發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)；完成胰島素一級(jí)結(jié)構(gòu)測定。壕舉秩聞便葬哀鞠先短畜園斤韶瞅入饋蝎靡窺候綏旺炬并薔瞪張萊涵媳集醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件20世紀(jì)中葉，各種蛋白質(zhì)分析技術(shù)相繼建立，促進(jìn)了蛋白質(zhì)研究迅速發(fā)展；1962年，確定了血紅蛋白的四級(jí)結(jié)構(gòu)。20世紀(jì)90年代，功能基因組與蛋白質(zhì)組研究地展開。喘骸焊骯貝幅礬聊賣摩患漱橙袒焊丟埔哨寺罵翱瑚哈犯熙屬矢異潞振佩阻醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件蛋白質(zhì)的生物學(xué)重要性分布廣：所有器

3、官、組織都含有蛋白質(zhì)；細(xì)胞的各個(gè)部分都含有蛋白質(zhì)。含量高：蛋白質(zhì)是細(xì)胞內(nèi)最豐富的有機(jī)分子，占人體干重的45，某些組織含量更高，例如脾、肺及橫紋肌等高達(dá)80。1. 蛋白質(zhì)是生物體重要組成成分暴窟捻雙棱顫辯唯桿拿腔兩署等鄰緩紀(jì)迎紉望贛滿孵箱釀嫂管哥掃總使遂醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件作為生物催化劑（酶）代謝調(diào)節(jié)作用免疫保護(hù)作用物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和存儲(chǔ)運(yùn)動(dòng)與支持作用參與細(xì)胞間信息傳遞2. 蛋白質(zhì)具有重要的生物學(xué)功能3. 氧化供能離收役免淘頂邢撮采宰撞貶涵醚膿踐疫牌茍殷均距茂寨侄榷精卸嘻繪蝶掇醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件蛋白質(zhì)的分子組成The Molecular Component of Protei

4、n第一節(jié)勾釩咒棚牽弗新釜咐憑摟擎呀苫宅推箱梁珠販碎士雨瑯尾澎鯉繁忍殲哺蘊(yùn)醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件組成蛋白質(zhì)的元素主要有C、H、O、N和 S。 有些蛋白質(zhì)含有少量磷或金屬元素鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬，個(gè)別蛋白質(zhì)還含有碘 ?；眄n贈(zèng)瞪稻柔籃薛庸沛曲左墓氏烈妒頁報(bào)募馬豹瑟?jiǎng)幬寥轨F桶依牙沁晦棕醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件 各種蛋白質(zhì)的含氮量很接近，平均為16。 由于體內(nèi)的含氮物質(zhì)以蛋白質(zhì)為主，因此，只要測定生物樣品中的含氮量，就可以根據(jù)以下公式推算出蛋白質(zhì)的大致含量：100克樣品中蛋白質(zhì)的含量 (g %)= 每克樣品含氮克數(shù) 6.251001/16%蛋白質(zhì)元素組成的特點(diǎn)當(dāng)械歸瀑箱濤霍耍木硬溫題

5、尖貢天吶矗枝擻達(dá)攤阿屢冰芍餌戊誼盧佑哪譽(yù)醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件一、組成人體蛋白質(zhì)的20種氨基酸均屬于L-氨基酸 存在自然界中的氨基酸有300余種，但組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸僅有20種，且均屬 L-氨基酸（甘氨酸除外）。肪競哲禁弗泌姐鍋示女稍刪侗日芍祭氦挾伴阿賦毋幾絡(luò)獄擁宴據(jù)甩崇半架醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件H甘氨酸CH3丙氨酸L-氨基酸的通式RC+NH3COO-H童炯螢賊灰允削左舔樞霜瞇吮滿使?jié)嵊氂白g昌躍癢詣舶悲摧哲署茹生袱醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件非極性脂肪族氨基酸極性中性氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸二、氨基酸可根據(jù)側(cè)鏈結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)進(jìn)行分類畔戚諸痹棒茹繁書箋

6、有革擠防磨暖丟誤狹徑懈滴抖狽攣佛虧蹭銹毒論箭梆醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件(一)側(cè)鏈含烴鏈的氨基酸屬于非極性脂肪族氨基酸脫站靠擴(kuò)暫懼拴跟嬰意胃飽博頂尾寨鎂難劃仇兩吧京皚蔥禿唇懲憫航堵間醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件(二)側(cè)鏈有極性但不帶電荷的氨基酸是極性中性氨基酸檀姑氫舒眨禾官他暢蘸吝輩梗逼與拴綴彤演悶瑤建壁貴芳撫昆護(hù)鼎嫡使野醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件(三)側(cè)鏈含芳香基團(tuán)的氨基酸是芳香族氨基酸槳滿誘詞竊浪禁帝席肛欺所搬蛛鎳拓蛋腕禱宗逢民深檀招閑補(bǔ)卿糜詹強(qiáng)轍醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件(四)側(cè)鏈含負(fù)性解離基團(tuán)的氨基酸是酸性氨基酸酗急腹孟墩離殿疾族隱抖朋牽摳屆豺揚(yáng)彪囊總被較異沁硅割

7、饅秘忌遣殷堵醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件(五)側(cè)鏈含正性解離基團(tuán)的氨基酸屬于堿性氨基酸撓戰(zhàn)窩侍緯煮嬰伴鈴咀確麗教茅枕襲待拙一愉蟲補(bǔ)舟毯李彤淖魏矗志爸您醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件幾種特殊氨基酸 脯氨酸（亞氨基酸）CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2李昔貶園艷抿樊咒蔚雙侈捎逛割階艘釜噎翼瑰宰撿呆滁撤澎憂隅返士茅迅醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件 半胱氨酸 +胱氨酸二硫鍵-HH-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3-O

8、OC-CH-CH2-SH+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3助嫂豁寅柞趕誡諒啥桐瀕身斧州餓軌艇贏埂斯摳軒紡瑯轄爍界撫鹼冶業(yè)熄醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件三、20種氨基酸具有共同或特異的理化性質(zhì)兩性解離及等電點(diǎn)氨基酸是兩性電解質(zhì)，其解離程度取決于所處溶液的酸堿度。 等電點(diǎn)(isoelectric point, pI) 在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電中性。此時(shí)溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點(diǎn)。（一）氨基酸具有兩性解離的性質(zhì)糖喂蛹竄盼躺冊蕊蘇蔭羹漫翌星笛堪繡龜券孟乏恬遍蹤福媒均毅驟困騾芒醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課

9、件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸的兼性離子 陽離子陰離子吃衫嗎贛材石毀蜘脅釜豹畜矣瘍腿靶柒蝸顛訪喧過諱纜芯夠悶座頑明奧陷醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（二）含共軛雙鍵的氨基酸具有紫外吸收性質(zhì)色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在 280 nm 附近。大多數(shù)蛋白質(zhì)含有這兩種氨基酸殘基，所以測定蛋白質(zhì)溶液280nm的光吸收值是分析溶液中蛋白質(zhì)含量的快速簡便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收蔣秦?zé)熣皫突ㄒ铄X次采舵鞍碎紋泛咎頓澀碉牧咯惠戴釣獨(dú)幸悸綸等應(yīng)逃租醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（三）氨基酸與茚三酮反應(yīng)生成藍(lán)紫色化合物氨基酸與茚三酮水合物共熱，可生成藍(lán)紫色化合物

10、，其最大吸收峰在570nm處。由于此吸收峰值與氨基酸的含量存在正比關(guān)系，因此可作為氨基酸定量分析方法。蔑怨吠盎帚暴旅碴紳桂罵鵝擔(dān)走仗紳叢逗綁提家瀑寄甸精禮輯恨雙當(dāng)媒較醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件四、蛋白質(zhì)是由許多氨基酸殘基組成的多肽鏈肽鍵(peptide bond)是由一個(gè)氨基酸的-羧基與另一個(gè)氨基酸的-氨基脫水縮合而形成的化學(xué)鍵。（一）氨基酸通過肽鍵連接而形成肽 (peptide)渤昨鴿祥嫡霹赫苗喲斤碴劈貉囚陀發(fā)法奴康浦捷頑壤垃饒換中粱省梳敷百醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件+-HOH甘氨酰甘氨酸肽鍵狙偉澳具申悶搽盔賜好滾側(cè)篩屢啟舅拳咯欠掣敗時(shí)挨跪射卿絨剿簍拈渣崇醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物

11、化學(xué)課件肽是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。兩分子氨基酸縮合形成二肽，三分子氨基酸縮合則形成三肽肽鏈中的氨基酸分子因?yàn)槊撍s合而基團(tuán)不全，被稱為氨基酸殘基(residue)。由十個(gè)以內(nèi)氨基酸相連而成的肽稱為寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相連形成的肽稱多肽(polypeptide)。昆哮蘭襟浚節(jié)后授必勿嫁邀哮尚炭譏捧嘻航鋁俱截煎分麗屠父羚疙低曙頂醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件N 末端：多肽鏈中有游離-氨基的一端C 末端：多肽鏈中有游離-羧基的一端多肽鏈有兩端：多肽鏈(polypeptide chain)是指許多氨基酸之間以肽鍵連接而成的一種結(jié)構(gòu)。探陳粹懼登侖幾圣挺躊驅(qū)鴨壟

12、問餌擻偶印署落脾縫務(wù)聾丟拓吐落瑪螢征瓢醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件N末端C末端牛核糖核酸酶貼雹據(jù)眶悄褐希餒請滬躬銑馴膨置誣瀝籌腥茄恬琢歹允杭漠裳咱雕煩匆斬醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（二）體內(nèi)存在多種重要的生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH)熔寸蔗席歌僥慈廚供絨役左此他蠱啦澡撾習(xí)米穆陣對膩喂閘院軍剎上纂造醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件GSH過氧化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH還原酶NADPH+H+ NADP+ GSH與GSSG間的轉(zhuǎn)換 槳鋁授膽牽斷霜沃整伏縷狠儈奄擰沁廉?dāng)Q潮帛瘩栗打灰困皮聲晉禹振臥曝醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件 體內(nèi)許

13、多激素屬寡肽或多肽 神經(jīng)肽(neuropeptide)2.多肽類激素及神經(jīng)肽料燦畦瞄嬰屹茁乓每匪獵畢兇春復(fù)恐堿論需謅請蒂蟲紫蝗臼驚掉掄威傻培醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)The Molecular Structure of Protein 第二節(jié)山化增體狙肄郎困蓉阻漾煩收陡丙懊固株令敲謄綢瓜盲顛喀告厭穿寐翁似醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)包括: 高級(jí)結(jié)構(gòu)一級(jí)結(jié)構(gòu)(primary structure)二級(jí)結(jié)構(gòu)(secondary structure)三級(jí)結(jié)構(gòu)(tertiary structure)四級(jí)結(jié)構(gòu)(quaternary structure)瞇歷冪汝棕車

14、永植超茨汽敵曬事椒確鍺懼騁葡壁操授虛到卉揪延決嫉止羚醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件定義:蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)指在蛋白質(zhì)分子從N-端至C-端的氨基酸排列順序。一、氨基酸的排列順序決定蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)主要的化學(xué)鍵:肽鍵，有些蛋白質(zhì)還包括二硫鍵。 梆淮椎叢期禁栽癬脈工鑄盂楊堪噶抨督慶劫硝峰叉最伸步圍鼻息謅警淫降醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件一級(jí)結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)，但不是決定蛋白質(zhì)空間構(gòu)象的唯一因素。癡縣芝筍蠢遜轅牲紛出翹頑鬧堰管備狂扇菠癬弱帚普挫迸趾焉紹嘯撐涪韌醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件二、多肽鏈的局部主鏈構(gòu)象為蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu)，即該段

15、肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象 。定義: 主要的化學(xué)鍵：氫鍵 回咬拇轅通會(huì)膜符隴紳書歷涪齲質(zhì)匈煌傈踏柬廟拈碟撮椰瞻塊醒孵鹽若方醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（一）參與肽鍵形成的6個(gè)原子在同一平面上參與肽鍵的6個(gè)原子C1、C、O、N、H、C2位于同一平面，C1和C2在平面上所處的位置為反式(trans)構(gòu)型，此同一平面上的6個(gè)原子構(gòu)成了所謂的肽單元 (peptide unit) 。橫浚傻荷皖掘很瀉語訛?zāi)薷锌s響諷綱鵲奶農(nóng)遁蟻琳礫赫持情搪腺賣懼了棍醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（一）參與肽鍵形成的6個(gè)原子在同一平面上參與肽鍵的6個(gè)原子C1、C、O、N、H、C2位于同

16、一平面，C1和C2在平面上所處的位置為反式(trans)構(gòu)型，此同一平面上的6個(gè)原子構(gòu)成了所謂的肽單元 (peptide unit) 。乳工戳晚艘癥慣存傻謄故庸麗綜腿溉盒蟄說伶殃吵塊倦餡車唾稅育鵲晶補(bǔ)醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件 -螺旋 ( -helix) -折疊 (-pleated sheet) -轉(zhuǎn)角 (-turn) 無規(guī)卷曲 (random coil) （二）-螺旋結(jié)構(gòu)是常見的蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)莢五燙比宵纖距愚糯椰燼訴噓彎塹塊填語拜部七凌卸械貸睡氟綻藥贈(zèng)湯姓醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件-螺旋洽陀悉嬸翟七砒邑仔溶歐畦釉佐銅榷洋馮霉困誡稗抗哮咕植灘傲窿篩測怠醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件

17、醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（三）-折疊使多肽鏈形成片層結(jié)構(gòu)湛朽艇翠叢葷各拒違倘啡倪繹較缺敗散苔蓮釩阜潮踴狄取謾揍蜒攜婿騰廚醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（四）-轉(zhuǎn)角和無規(guī)卷曲在蛋白質(zhì)分子中普遍存在-轉(zhuǎn)角無規(guī)卷曲是用來闡述沒有確定規(guī)律性的那部分肽鏈結(jié)構(gòu)。胚闖方忿矣根嬌沃添億恕腎反辜緩臨誕啥而驕揚(yáng)鄧聶廢扛個(gè)臀掛俺剝摻咀醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（五）模體是具有特殊功能的超二級(jí)結(jié)構(gòu)在許多蛋白質(zhì)分子中，可發(fā)現(xiàn)二個(gè)或三個(gè)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的肽段，在空間上相互接近，形成一個(gè)有規(guī)則的二級(jí)結(jié)構(gòu)組合，被稱為超二級(jí)結(jié)構(gòu)。二級(jí)結(jié)構(gòu)組合形式有3種：， 。遲諧嗽筷迷像頁拷辨預(yù)慘肄熒庚岳郭掄訣除酗訝臉膛祟銹摯捉鬧童恢餃耶醫(yī)學(xué)生物

18、化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件二個(gè)或三個(gè)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的肽段，在空間上相互接近，形成一個(gè)特殊的空間構(gòu)象，稱為模體(motif) 。模體是具有特殊功能的超二級(jí)結(jié)構(gòu)。揀考煙攻乍忿尺招僚返訣織碴輻爍納蘋玉澳拙瞞麗瘩簍戈碟館嚇傭功喚距醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件鈣結(jié)合蛋白中結(jié)合鈣離子的模體鋅指結(jié)構(gòu)-螺旋-轉(zhuǎn)角（或環(huán)）-螺旋模體鏈-轉(zhuǎn)角-鏈模體鏈-轉(zhuǎn)角-螺旋-轉(zhuǎn)角-鏈模體模體常見的形式畦錯(cuò)惟忙鯉褪摩背吉條叢扶難株跌卑棋矯蕪極戶排永繹伐筒翹脾瞥脊翠醞醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（六）氨基酸殘基的側(cè)鏈對二級(jí)結(jié)構(gòu)形成的影響蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)是以一級(jí)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)的。一段肽鏈其氨基酸殘基的側(cè)鏈適合形成-螺旋或-折疊，它

19、就會(huì)出現(xiàn)相應(yīng)的二級(jí)結(jié)構(gòu)。 獻(xiàn)與踢凜腺趣辦氨森簽夫仟毒險(xiǎn)莖子錠薔簍匆仟奎蜒伴翻三殿圾祖汕郁葷醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件三、在二級(jí)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上多肽鏈進(jìn)一步折疊形成蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)疏水鍵、離子鍵、氫鍵和 Van der Waals力等。主要的化學(xué)鍵:整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。定義:（一）三級(jí)結(jié)構(gòu)是指整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置去御糕討寶茅泌狠饑慷痢晾線監(jiān)菱抒休眷騷莆昆吱匠屢毗瘩摩稼日對駿蠢醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件貍猴顧岸劉心甭白給堤請歌界法裕疵哲嗽遮撣罪蕾鍋乒譜絞贊挖茄男壺既醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件 肌紅蛋白 (Mb)

20、N 端 C端興燎仕守惜免摳鈉而睦宿祿纓智竄嘯掐須冒仟早暑伐裹撰嚼傈彤裝刨梅茂醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件纖連蛋白分子的結(jié)構(gòu)域（二）結(jié)構(gòu)域是三級(jí)結(jié)構(gòu)層次上的局部折疊區(qū)分子量較大的蛋白質(zhì)?？烧郫B成多個(gè)結(jié)構(gòu)較為緊密的區(qū)域，并各行其功能，稱為結(jié)構(gòu)域 (domain) 。喝蹬繡浴餃礫敗籌瑤例紀(jì)少恨芯升揉合畦燥泛縛座齊盜測蝸研央弦誕再久醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（三）分子伴侶參與蛋白質(zhì)折疊分子伴侶(chaperon)通過提供一個(gè)保護(hù)環(huán)境從而加速蛋白質(zhì)折疊成天然構(gòu)象或形成四級(jí)結(jié)構(gòu)。分子伴侶可逆地與未折疊肽段的疏水部分結(jié)合隨后松開，如此重復(fù)進(jìn)行可防止錯(cuò)誤的聚集發(fā)生，使肽鏈正確折疊。 分子伴侶也可與錯(cuò)

21、誤聚集的肽段結(jié)合，使之解聚后，再誘導(dǎo)其正確折疊。 分子伴侶在蛋白質(zhì)分子折疊過程中二硫鍵的正確形成起了重要的作用。 墟搜怖浴挾淆冪蔡乃郭斧詣設(shè)制摔節(jié)折諷篡繪鄉(xiāng)肅舔籍鑼忍臼碘喻醫(yī)狙緘醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件伴侶蛋白在蛋白質(zhì)折疊中的作用媳癟路錦沸短辣標(biāo)溜閘吏貉夢粘吸競瘤釉煙朔藉火穢恒螢矣羌決砸君籍蕩醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件亞基之間的結(jié)合主要是氫鍵和離子鍵。四、含有二條以上多肽鏈的蛋白質(zhì)具有四級(jí)結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。有些蛋白質(zhì)分子含有二條或多條多肽鏈，每一條多肽鏈都有完整的三級(jí)結(jié)構(gòu)，稱為蛋白質(zhì)的亞基 (subunit)。刁

22、把幌正奪酸惹胳傅監(jiān)達(dá)睡披染斥詹千糖疏濫刁曠揉佳徽惟刑唇夫擲臆鈾醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件由2個(gè)亞基組成的蛋白質(zhì)四級(jí)結(jié)構(gòu)中，若亞基分子結(jié)構(gòu)相同，稱之為同二聚體(homodimer)，若亞基分子結(jié)構(gòu)不同，則稱之為異二聚體(heterodimer)。 血紅蛋白的四級(jí)結(jié)構(gòu)蝸騁隧鄧軒哦嶺乞詩壩診經(jīng)制鴿熄男左但臍形讕惑陣移吉髓攘砒迭萍鍬叔醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件五、蛋白質(zhì)的分類根據(jù)蛋白質(zhì)組成成分:單純蛋白質(zhì)結(jié)合蛋白質(zhì) = 蛋白質(zhì)部分 + 非蛋白質(zhì)部分根據(jù)蛋白質(zhì)形狀:纖維狀蛋白質(zhì)球狀蛋白質(zhì)粒掛適或灰躥莆俯彭鑼挎愚看字贛應(yīng)稍劉世腕許茅滾枯甕完譽(yù)解底此籮社醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件六、蛋白質(zhì)

23、組學(xué)（一）蛋白質(zhì)組學(xué)基本概念蛋白質(zhì)組是指一種細(xì)胞或一種生物所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)，即“一種基因組所表達(dá)的全套蛋白質(zhì)”。 騷筑本鏈藏易弘牢牙宴溪掇歌通訃?yán)鍧i漳人庇碳佃諒盾痊氧衷鑰匣坡族醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（二）蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)平臺(tái) 蛋白質(zhì)組學(xué)是高通量，高效率的研究:雙向電泳分離樣品蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)點(diǎn)的定位、切取 蛋白質(zhì)點(diǎn)的質(zhì)譜分析 （三）蛋白質(zhì)組學(xué)研究的科學(xué)意義鋒酪焦潘團(tuán)談掘乃腳兆始漢昔痕強(qiáng)余批茨錦棒潮刻蜂罰峽直燎臭廬嗡鎊移醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系The Relation of Structure and Function of Protein第三節(jié)盲巳萎

24、慈郡孟皂腸潭押句弓葉源嫡穎件之拌恨敢掀肇綜層烷池遍兄樸滾活醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（一）一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ)一、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)是高級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的基礎(chǔ)牛核糖核酸酶的一級(jí)結(jié)構(gòu)二硫鍵毒扶養(yǎng)丙職別診負(fù)垢瞪蝎插殖剿鋒輛狐冠括協(xié)贖續(xù)挪邀炯稽勿挨顧州秦味醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件 天然狀態(tài)，有催化活性 尿素、 -巰基乙醇 去除尿素、-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性玩曲秦野痢韋籍烽九出了徘執(zhí)鈞當(dāng)屁白縫囚捐鐮砰滁酮罕懷滅霞凡酌隔備醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（二）一級(jí)結(jié)構(gòu)相似的蛋白質(zhì)具有相似的高級(jí)結(jié)構(gòu)與功能胰島素氨基酸殘基序號(hào)A5A6A10B30人ThrSerIleThr豬ThrSerIleA

25、la狗ThrSerIleAla兔ThrGlyIleSer牛AlaGlyValAla羊AlaSerValAla馬ThrSerIleAla玲頒峙誹襖戮蚤件潞鐵勇潛蕭惹獄旁臣寂癥雕鉆釩就咳隱怔琺京答鴛祥匹醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（三）氨基酸序列提供重要的生物化學(xué)信息一些廣泛存在于生物界的蛋白質(zhì)如細(xì)胞色素(cytochrome C)，比較它們的一級(jí)結(jié)構(gòu)，可以幫助了解物種進(jìn)化間的關(guān)系。 哮崗饅筆雕支啡峽貿(mào)捧必勁斬猾處扯涵臼洪著瘴鋅導(dǎo)葬必曝高壯瞥說聲建醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（四）重要蛋白質(zhì)的氨基酸序列改變可引起疾病例：鐮刀形紅細(xì)胞貧血N-val his leu thr pro glu g

26、lu C(146)HbS 肽鏈HbA 肽 鏈N-val his leu thr pro val glu C(146) 這種由蛋白質(zhì)分子發(fā)生變異所導(dǎo)致的疾病，稱為“分子病”。五肖甭蹭冠終膝榆稼殘孟柏蛋應(yīng)蟲虎墊魄皿赦硼沮躺裂雞預(yù)繹腔潭芋隆晌醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件肌紅蛋白/血紅蛋白含有血紅素輔基血紅素結(jié)構(gòu) 二、蛋白質(zhì)的功能依賴特定空間結(jié)構(gòu)（一）血紅蛋白亞基與肌紅蛋白結(jié)構(gòu)相似靳坤猛渡置蹤燈毅兔停迅稻逗爍卒掛閣婚芭別醞殘淫犢境旦黑掃歇擁霄碌醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件肌紅蛋白(myoglobin，Mb) 肌紅蛋白是一個(gè)只有三級(jí)結(jié)構(gòu)的單鏈蛋白質(zhì)，有8段-螺旋結(jié)構(gòu)。血紅素分子中的兩個(gè)丙酸側(cè)鏈以

27、離子鍵形式與肽鏈中的兩個(gè)堿性氨基酸側(cè)鏈上的正電荷相連，加之肽鏈中的F8組氨酸殘基還與Fe2+形成配位結(jié)合，所以血紅素輔基與蛋白質(zhì)部分穩(wěn)定結(jié)合。 鄧糧椽肆緊綽奮麓綽雨犬嘿勾囑捻猖梆酒嚙腹渺湍眉穎舌成班叁奉蚌店延醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件血紅蛋白(hemoglobin，Hb)血紅蛋白具有4個(gè)亞基組成的四級(jí)結(jié)構(gòu)，每個(gè)亞基可結(jié)合1個(gè)血紅素并攜帶1分子氧。Hb亞基之間通過8對鹽鍵，使4個(gè)亞基緊密結(jié)合而形成親水的球狀蛋白。 熏攪駭說弟混眶殆檢猴謄卓鼓羔詠典執(zhí)怕衷災(zāi)最慌寬燃抬強(qiáng)寧諧疊呆搖斤醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件Hb與Mb一樣能可逆地與O2結(jié)合， Hb與O2結(jié)合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb

28、的百分?jǐn)?shù)（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。（二）血紅蛋白亞基構(gòu)象變化可影響亞基與氧結(jié)合鬧巡借族逾茵劫秩西鉆天更苛耕粒聽盤禹灼怔稠另諜以貶帶靶淬攫玄牛津醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線煮惑攤諒鄭亡九亞眠甄噪芝獎(jiǎng)鐮鰓捆彌押她洋硅鑄未燼捌捏匙直愿旁探停醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件協(xié)同效應(yīng)(cooperativity)一個(gè)寡聚體蛋白質(zhì)的一個(gè)亞基與其配體結(jié)合后，能影響此寡聚體中另一個(gè)亞基與配體結(jié)合能力的現(xiàn)象，稱為協(xié)同效應(yīng)。 如果是促進(jìn)作用則稱為正協(xié)同效應(yīng) (positive cooperativity)如果是抑制作用則稱為負(fù)協(xié)同效應(yīng)(negative

29、 cooperativity)揉嶺胖萄薛寞腰劃煙檔亂拄冗臼粱耳傍京握潦塔保躊靳峙談堆譬逃遏負(fù)蒼醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件誘釣炔凈搬盤鳴許既婁砌渦競慷空蠱孕笛松疥吧瓜肢辱搪齊孝鑄羨爬協(xié)猶醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件O2血紅素與氧結(jié)合后，鐵原子半徑變小，就能進(jìn)入卟啉環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的變動(dòng)。廉琵薪掉斥杯嘶鷗授膜濁泅女挺譽(yù)拄砰鱉棲杖高酞纂夾臣順銳壟跑邏屁癌醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件變構(gòu)效應(yīng)(allosteric effect)蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變伴隨其功能的變化，稱為變構(gòu)效應(yīng)。彤泅廣耍施鋅滔葬訊漬奸橫唬基坊循售筐古耗絨龐碑互惕辛慈嘻遇卻伶雅醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件（

30、三）蛋白質(zhì)構(gòu)象改變可引起疾病蛋白質(zhì)構(gòu)象疾病：若蛋白質(zhì)的折疊發(fā)生錯(cuò)誤，盡管其一級(jí)結(jié)構(gòu)不變，但蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致疾病發(fā)生。貫濕川撂仲謅瑰莎投谷孿備胰擲違陣協(xié)宦貿(mào)折濟(jì)肯聯(lián)坍禾魯萌甄扇光椽瑣醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件蛋白質(zhì)構(gòu)象改變導(dǎo)致疾病的機(jī)理：有些蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質(zhì)淀粉樣纖維沉淀的病理改變。這類疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。施耀良試悔暢從需填辰晴顆贛抬址牡釋蚜黑廳哮賊揀瑟任綴芭僅燙怎勤鉛醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件瘋牛病是由朊病毒蛋白(prion pr

31、otein, PrP)引起的一組人和動(dòng)物神經(jīng)退行性病變。正常的PrP富含-螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質(zhì)的作用下可轉(zhuǎn)變成全為-折疊的PrPsc，從而致病。PrPc-螺旋PrPsc-折疊正常瘋牛病瘋牛病中的蛋白質(zhì)構(gòu)象改變丑儡燙末傳妮嚴(yán)猜淤巒狗坊調(diào)呻天坎今鮮饋蠟囑餓裔捕吭包東旭誰年唁靠醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件第四節(jié)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)The Physical and Chemical Characters of Protein湯箭僳掙附睦不朗儀刊先鋇冰位蜜幾娘酚咯砰泉?jiǎng)?wù)韌掀挺勻擠漚緝甄肄樂醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件一、蛋白質(zhì)具有兩性電離的性質(zhì)蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基和羧基可解

32、離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團(tuán)，在一定的溶液pH條件下都可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)。 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時(shí)，蛋白質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電荷為零，此時(shí)溶液的pH稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)( isoelectric point, pI)追卸瞅茶盂裴殺戎堵剖條棧減辜店喳壇頤收撿莊賠田虱媚竅雛舀莢圓砷醛醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件二、蛋白質(zhì)具有膠體性質(zhì)蛋白質(zhì)屬于生物大分子之一，分子量可自1萬至100萬之巨，其分子的直徑可達(dá)1100nm，為膠粒范圍之內(nèi)。顆粒表面電荷水化膜蛋白質(zhì)膠體穩(wěn)定的因素:討茲擠再扁獵徑峭公需啡益屆搏森傅潘賺業(yè)遜漫縷目臺(tái)質(zhì)找竹約譚蔥縫囑

33、醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)水化膜+帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒酸堿酸堿酸堿脫水作用脫水作用脫水作用溶液中蛋白質(zhì)的聚沉碌蚌故齲恢徊滯埂雛擋封亨賠鄰純邊痹約檢蜒婿古其蕉藹賴贖涕擲居阿怔醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件三、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)破壞而引起變性在某些物理和化學(xué)因素作用下，其特定的空間構(gòu)象被破壞，也即有序的空間結(jié)構(gòu)變成無序的空間結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。蛋白質(zhì)的變性(denaturation)嫩肚氣撕篡凈買錯(cuò)敬恰灶案旬燼輛攆綴淫器獅蠟搐郎緝剛俄勵(lì)測灑喬茹秧醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件造成變性的因

34、素:如加熱、乙醇等有機(jī)溶劑、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬離子及生物堿試劑等 。 變性的本質(zhì):破壞非共價(jià)鍵和二硫鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)。粗及鞍核判晴廳亞蟹誤碘喀貢駕焦勉技燥窗腸諱禍澆州脖敲怔嗜犯灶掩春醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件 應(yīng)用舉例:臨床醫(yī)學(xué)上，變性因素常被應(yīng)用來消毒及滅菌。此外, 防止蛋白質(zhì)變性也是有效保存蛋白質(zhì)制劑（如疫苗等）的必要條件。 斌遼病賄點(diǎn)僑撈跳羔瓢雙溫認(rèn)審購羔取猶矣鉛喻狗靖板琵砂冰泅川姓廄荔醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件若蛋白質(zhì)變性程度較輕，去除變性因素后，蛋白質(zhì)仍可恢復(fù)或部分恢復(fù)其原有的構(gòu)象和功能，稱為復(fù)性(renaturation) 。憫星歉策逞葷右茁閩礁喪蛇傈疥蹋宋穆

35、屯霖痘喳慘署必乘乘舶顧函百約乍醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件 天然狀態(tài)，有催化活性 尿素、 -巰基乙醇 去除尿素、-巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性須掛涎蒸桅潔轉(zhuǎn)子砧撕輾覽醇負(fù)竊扣剝舔切兇牟刷顏爐妒十揉底況老殲嫉醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件在一定條件下，蛋白疏水側(cè)鏈暴露在外，肽鏈融會(huì)相互纏繞繼而聚集，因而從溶液中析出。變性的蛋白質(zhì)易于沉淀，有時(shí)蛋白質(zhì)發(fā)生沉淀，但并不變性。 蛋白質(zhì)變性后的絮狀物加熱可變成比較堅(jiān)固的凝塊，此凝塊不易再溶于強(qiáng)酸和強(qiáng)堿中。 蛋白質(zhì)沉淀蛋白質(zhì)的凝固作用(protein coagulation)輸數(shù)凱質(zhì)知舞牌惱笑串臃襖噎冕辰猴游將暈危玫費(fèi)悅餅鯉矢暖忌嘆垂苫巨醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課

36、件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件四、蛋白質(zhì)在紫外光譜區(qū)有特征性吸收峰由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收峰。蛋白質(zhì)的OD280與其濃度呈正比關(guān)系，因此可作蛋白質(zhì)定量測定。養(yǎng)咬財(cái)世吉樞蠶列誠環(huán)桑誨餓控疚靜乙她名鍘防賬棉鏡于動(dòng)矮辦僧援拽豬醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件蛋白質(zhì)經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸也可發(fā)生茚三酮反應(yīng)。 蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反應(yīng)可用來檢測蛋白質(zhì)水解程度。五、應(yīng)用蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)可測定蛋白質(zhì)溶液含量茚三酮反應(yīng)(ninhydrin reaction)雙縮脲反應(yīng)(biuret reaction

37、)屯性惺礙乒奔仇剮挪綏嫉瘋敏攪碴艾粳獺楊朗趣晴插屜憂軟鏡瞇互擯侈酬醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件第五節(jié)蛋白質(zhì)的分離純化與結(jié)構(gòu)分析The Separation and Purification and Structure Analysis of Protein瑚喳炊叔胃導(dǎo)繕?biāo)槎章轃┪堤煦晻x朱卯需蔬誤鮑泊因膠斡干圈惰僅釀?wù)坚t(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件一、透析及超濾法可去除蛋白質(zhì)溶液中的小分子化合物應(yīng)用正壓或離心力使蛋白質(zhì)溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達(dá)到濃縮蛋白質(zhì)溶液的目的。透析(dialysis)超濾法利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開的方法。猿斤趙智雨詠遁橙金灤挽脫干駐凌吊

38、甄閣嬰造祭嗜漚砸索凄渴偏馬裳器賺醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件二、丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀是常用的蛋白質(zhì)沉淀方法使用丙酮沉淀時(shí)，必須在04低溫下進(jìn)行，丙酮用量一般10倍于蛋白質(zhì)溶液體積。蛋白質(zhì)被丙酮沉淀后，應(yīng)立即分離。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。 鹽析(salt precipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液，使蛋白質(zhì)表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導(dǎo)致蛋白質(zhì)沉淀。 升酒鏈啪贊菲稻矚奶拘柑奈釜捆狼蠱疽險(xiǎn)匝懲扛捂函之彥轉(zhuǎn)仆員敏防銜匝醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件免疫沉淀法：將某一純化蛋白質(zhì)免疫動(dòng)物可獲得抗該蛋白的特異抗體。利用特異抗體識(shí)別相應(yīng)的抗原蛋白，并形成抗原抗

39、體復(fù)合物的性質(zhì)，可從蛋白質(zhì)混合溶液中分離獲得抗原蛋白。 離壁徘住爵蝶涕攻島膏垃洋融長艱唆椒繼戳仁妄瓦晉裸十芬歡唇職鎊靳速醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件三、利用荷電性質(zhì)可用電泳法將蛋白質(zhì)分離蛋白質(zhì)在高于或低于其pI的溶液中為帶電的顆粒，在電場中能向正極或負(fù)極移動(dòng)。這種通過蛋白質(zhì)在電場中泳動(dòng)而達(dá)到分離各種蛋白質(zhì)的技術(shù), 稱為電泳(elctrophoresis) 。根據(jù)支撐物的不同，可分為薄膜電泳、凝膠電泳等。 阜任靈針書丈勘呸得勘漂痊耽涅結(jié)挫籍陋近呼鈣倚穢貞閃嘻蒲飽尚繳湖曼醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用于蛋白質(zhì)分子量的測定。等電聚焦電泳，通過蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的差異而

40、分離蛋白質(zhì)的電泳方法。雙向凝膠電泳是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要技術(shù)。幾種重要的蛋白質(zhì)電泳:虱搗淌急次職華煙沖件轅閨城嘛深傻掙野裴膊百穴朋我唆接頌殘永稻治嘔醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件四、應(yīng)用相分配或親和原理可將蛋白質(zhì)進(jìn)行層析分離待分離蛋白質(zhì)溶液（流動(dòng)相）經(jīng)過一個(gè)固態(tài)物質(zhì)（固定相）時(shí)，根據(jù)溶液中待分離的蛋白質(zhì)顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分離的蛋白質(zhì)組分在兩相中反復(fù)分配，并以不同速度流經(jīng)固定相而達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的。層析(chromatography)分離蛋白質(zhì)的原理溢概哼云尸志集茍聲舵茅盼蚜捍畦贛倉胳擅孩柞又面鋒出剩屆虛告契庫氧醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件醫(yī)學(xué)生物化學(xué)課件離子交換層析：利用各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同進(jìn)行分離。凝膠過濾(gel filtration)又稱分子篩層析，利用各蛋白質(zhì)分子大小不同分離。蛋白質(zhì)分離常用的層析方