細(xì)菌性食源性疾病及其病原學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程課件

1、上海市疾病預(yù)防控制中心陳悅細(xì)菌性食源性疾病及其病原學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程 細(xì)菌性食源性疾病由細(xì)菌通過攝食而進(jìn)入人體的，使人體患感染性或中毒性的一類疾病。屬食源性疾病范疇，主要包括細(xì)菌性腸道傳染病和細(xì)菌性食物中毒細(xì)菌性腸道傳染病屬我國法定傳染病，主要包括霍亂、痢疾、傷寒、副傷寒及新近參照傳染病管理的由腸出血性大腸埃希菌O157引起的出血性腸炎細(xì)菌性食物中毒人體攝入了被細(xì)菌或其毒素污染的食品后所出現(xiàn)的非傳染性急性、亞急性疾病細(xì)菌性食源性疾病處置程序 細(xì)菌性食物中毒應(yīng)急處理程序（附圖1 ） 首接單位可能是區(qū)縣疾控中心或區(qū)縣衛(wèi)監(jiān)所 衛(wèi)生監(jiān)督所負(fù)責(zé)調(diào)查處理，疾控檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)配合檢驗(yàn) 細(xì)菌性腸道傳染病應(yīng)急處置程序（附圖1

2、 ） 聯(lián)合應(yīng)急處理小組中疾控中心負(fù)責(zé)流調(diào)和病人采樣，衛(wèi)生監(jiān)督所負(fù)責(zé)衛(wèi)生調(diào)查和食品環(huán)節(jié)采樣 現(xiàn)場調(diào)查 根據(jù)患者的臨床癥狀，核實(shí)診斷，初步判斷是否屬食物中毒或食源性疾病 現(xiàn)場流行病學(xué)個(gè)案調(diào)查 衛(wèi)生學(xué)調(diào)查 確定常見細(xì)菌性食源性疾病和食物中毒的樣品采集種類與范圍和相關(guān)檢驗(yàn)項(xiàng)目 細(xì)菌性食源性疾病的主要臨床特征（附表1） 細(xì)菌性食源性疾病有關(guān)癥狀與病原學(xué)檢驗(yàn)項(xiàng)目、檢驗(yàn)樣品關(guān)系（附表2）樣品采集流程樣品采集與送檢流程 無菌采樣方法采集及時(shí)做好樣品標(biāo)記，完整填寫采樣送檢申請單（見附表4） 詳細(xì)填明檢樣名稱、來源、送檢時(shí)間、中毒情況、患者主要臨床癥狀、檢驗(yàn)項(xiàng)目等 樣品采集數(shù)量 學(xué)校等集體單位至少采集新發(fā)病人或具

3、有典型的臨床癥狀、未經(jīng)過抗生素治療的樣品（糞便或肛拭）10份 可疑食品應(yīng)采集5份（留樣食品、原配料、半成品）食品容器、用具和加工設(shè)備等環(huán)節(jié)采樣510份 食堂或盒飯公司從事食品從業(yè)人員進(jìn)行肛拭采樣 樣品采集注意事項(xiàng) 采樣用的試管、瓶子、盛器、剪刀、鑷子、棉拭等均應(yīng)無菌采樣用的生理鹽水、卡里運(yùn)送培養(yǎng)基及有關(guān)試劑等都應(yīng)該滿足新鮮、無菌的要求，同時(shí)應(yīng)符合采樣所需要的試劑量，卡里運(yùn)送培養(yǎng)基為5ml/管為宜肛拭、食品和環(huán)節(jié)等采樣，其采樣量須滿足必須開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求，如肛拭采樣至少要用2根棉拭，食品采樣應(yīng)盡量多于25g（ml）以上采樣的同時(shí)，應(yīng)及時(shí)做好樣品標(biāo)記，完整填寫采樣單。立即將檢樣送檢驗(yàn)室，并有交

4、接手續(xù) 各類樣品采集方法（1）可疑食物、水樣：將殘余食物或水樣用滅菌鑷子或匙采取后置于滅菌容器中。體積較大的魚、肉應(yīng)在表面消毒后取內(nèi)部檢樣。罐頭樣品可直接送檢 環(huán)節(jié)樣品：炊事用具如鍋、碗、刀、抹布、操作人員的手等用棉拭涂擦采樣，菜墩用刀刮取表面后將刮取物放入滅菌容器中 各類樣品采集方法（2）糞便、肛拭：糞便標(biāo)本應(yīng)盡量在病程早期和治療前采集，同時(shí)應(yīng)采集新鮮糞便，選取有膿血、粘液部分3-5克、水樣便取含絮狀物的2-5ml，盛于無菌容器中及時(shí)送檢。若無法獲得糞便時(shí)，可用保存液或增菌液濕潤過的棉拭子插入肛門4-5cm深處（小兒2-3cm），輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)一圈，擦取直腸表面的黏液后取出，盛入運(yùn)送培養(yǎng)基或保存液

5、中送檢。注意為保證多個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目的開展，同一病人應(yīng)至少采集2支肛拭 各類樣品采集方法（3）嘔吐物：直接放入無菌容器中及時(shí)送檢 咽拭樣品：采集時(shí)應(yīng)將棉簽檫拭咽喉及扁桃體紅腫處（特別是白膜處），然后將棉簽插入4-5ml生理鹽水中，尾部棄去 血液：采集患者急性發(fā)病期（3天內(nèi)）和恢復(fù)期（2周左右）各3ml全血分離血清送檢 各類樣品采集方法（4）從業(yè)人員：據(jù)食物中毒的情況要求，可采取售貨員或制作食品的工作人員及直接或間接接觸食品的有關(guān)人員肛拭檢樣，特別對那些在事件發(fā)生前或現(xiàn)正患有腸炎、發(fā)燒、化膿性及可疑帶菌者進(jìn)行采樣 樣品送檢 檢樣采取后立即由專人在2小時(shí)內(nèi)送區(qū)縣疾病預(yù)防控制中心或（和）市疾病預(yù)防控制中心

6、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn) 送檢檢樣時(shí)，應(yīng)附送采樣送檢申請單，并按要求注意冷藏 樣品送檢人員應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室收樣或檢驗(yàn)人員履行樣品交接手續(xù) 樣品檢驗(yàn)的能級(jí)分工 一般食源性細(xì)菌性突發(fā)事件由事件發(fā)生所在地區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)承擔(dān) 重大食源性細(xì)菌性突發(fā)事件以事件發(fā)生所在地區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)承擔(dān)為主，市疾控檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)共同參與檢驗(yàn)工作 特大食源性細(xì)菌性突發(fā)事件由市疾控檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)和事件發(fā)生所在地區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)組成的現(xiàn)場檢驗(yàn)小組共同承擔(dān) 檢驗(yàn)項(xiàng)目的分級(jí)區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)承擔(dān)霍亂弧菌、副溶血弧菌及其它致病性弧菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽胞桿菌、沙門菌、變形桿菌、致瀉性大腸埃希菌、空腸彎曲菌、小腸結(jié)腸耶爾森菌、志賀菌、溶血性

7、鏈球菌及單核細(xì)胞增生李斯特菌引起的食源性突發(fā)事件的樣品檢驗(yàn) 檢驗(yàn)項(xiàng)目的分級(jí)市疾控檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)除開展以上全部檢驗(yàn)項(xiàng)目外，還需承擔(dān)金黃色葡萄球菌腸毒素、各類致瀉性大腸埃希菌毒素（或毒素基因）的測定以及區(qū)縣疾控系統(tǒng)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)檢出的霍亂弧菌、大腸埃希菌O157和疑難菌株的最終鑒定工作 在一般食源性細(xì)菌性突發(fā)事件和重大食源性細(xì)菌性突發(fā)事件的樣品檢驗(yàn)工作中市疾控檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)承擔(dān)技術(shù)指導(dǎo)和質(zhì)量控制的職責(zé) 檢驗(yàn)技術(shù)依據(jù) GB 4789-2003食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn) GB 17012-1997感染性腹瀉的診斷標(biāo)準(zhǔn)和處理原則 WS/T8-1996病原性大腸艾希氏菌食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則、WS/T9-1996變形桿菌食物

8、中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則、WS/T13-1996沙門氏菌食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則、WS/T80-1996葡萄球菌食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則、WS/T81-1996副溶血性弧菌食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則、WS/T82-1996蠟樣芽胞桿菌食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則 細(xì)菌性食源性疾病的檢驗(yàn)宗旨竭盡全力盡快找到病原體快速、準(zhǔn)確可與傳統(tǒng)方法不一定完全相同 細(xì)菌性食源性疾病樣品檢驗(yàn)的一般程序 （附圖2）檢驗(yàn)程序 1 . 樣品采集 2. 初步檢驗(yàn)活菌數(shù)、直接鏡檢(涂片染色鏡檢) 3. 分離培養(yǎng) (包括增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng)) 4. 初篩試驗(yàn) 5. 純培養(yǎng) 6. 全面鑒定直接涂片染色鏡檢 觀察存在于檢品中特

9、種形態(tài)的細(xì)菌如霍亂弧菌、彎曲菌，為進(jìn)一步的檢驗(yàn)提供有用的信息 一般活菌數(shù)的測定 按國標(biāo)菌落總數(shù)測定方法進(jìn)行，以了解可疑食品被污染情況 檢樣的處理 非病源檢樣包括可疑食物、水樣及環(huán)節(jié)樣品等最好按110的比例用胰大豆胨肉湯（TSB）37預(yù)增菌46h以保護(hù)和放大目的病原菌 病源檢樣因含較多病原菌而一般無須做預(yù)增菌處理，但若病源檢樣為服過抗生素后采集的或是從業(yè)人員帶菌查源的檢樣應(yīng)按檢驗(yàn)項(xiàng)目要求而進(jìn)行預(yù)增菌處理（直接插入2ml TSB管37預(yù)增菌46h ）直接培養(yǎng) 將處理后的非病源檢樣及無須做增菌處理的病源檢樣按檢驗(yàn)項(xiàng)目要求直接接種于各相應(yīng)培養(yǎng)基 增菌培養(yǎng)及接種 將預(yù)增菌處理后的非病源檢樣、服過抗生素后

10、采集的病源檢樣及從業(yè)人員帶菌查源的檢樣按檢驗(yàn)項(xiàng)目要求接種各相應(yīng)增菌液培養(yǎng) 增菌培養(yǎng)后接種于各相應(yīng)培養(yǎng)基 可疑菌落的選取常規(guī)分離培基及其菌落特征（附表3） 初篩試驗(yàn)克氏雙糖/三糖鐵/腸道綜合發(fā)酵管1、管2PCRVIDAS 可疑菌的鑒定 全面生化試驗(yàn)（API、ATB、VETIK、IDS、SWF、手工鑒定等） 噬菌體試驗(yàn) 血清分型 毒素或毒素基因測試 毒素或毒素基因測試 霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、EIEC侵襲毒素、ETEC腸毒素按國標(biāo)方法進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（VIDAS等）毒素基因測試：霍亂弧菌腸毒素、葡萄球菌腸毒素、致瀉性大腸埃希菌的所有毒力基因均可用PCR檢測，特別是對致瀉性大腸埃希

11、菌的定論應(yīng)以毒素或毒素基因?yàn)闇?zhǔn) 患者血清的試驗(yàn) 疑似傷寒或副傷寒的患者應(yīng)取發(fā)病一周的血清做肥達(dá)氏反應(yīng)，用作輔助診斷 將患者急性期和恢復(fù)期的血清做凝集效價(jià)的對比，4倍增長可確診細(xì)菌性食源性疾病食品、水樣、環(huán)節(jié)樣品檢驗(yàn)常規(guī)程序（附圖3） 細(xì)菌性食源性疾病食品、水樣、環(huán)節(jié)樣品檢驗(yàn)推薦程序 （附圖4）細(xì)菌性食源性疾病人糞便、肛拭、嘔吐物、咽拭樣品檢驗(yàn)推薦程序 （附圖5）檢驗(yàn)結(jié)果的判定 應(yīng)以找到病原體或其毒素為最終結(jié)論，在此之前所有的快速檢驗(yàn)方法如PCR、VIDAS等得到的結(jié)果僅供參考 應(yīng)注意非病源檢樣與病源檢樣檢出的病原體的統(tǒng)一性 檢驗(yàn)結(jié)果的判定原則（1）非病源檢樣與病源檢樣檢出的致病意義明確的細(xì)菌在

12、種類、生化和/或血清型、毒素型均一致時(shí)，可報(bào)告為細(xì)菌性食源性疾病事件的病原體檢驗(yàn)結(jié)果的判定原則（2）非病源檢樣與病源檢樣只有一種檢出病原菌時(shí)，此檢驗(yàn)結(jié)果僅供臨床與流行病學(xué)診斷參考，其中非病源檢樣的檢驗(yàn)結(jié)果參考價(jià)值較大，病源檢樣只有在同次細(xì)菌性食源性疾病事件中的多數(shù)患者樣品中檢出種類、生化和/或血清型、毒素型均一致的病原體時(shí)才有參考價(jià)值檢驗(yàn)結(jié)果的判定原則（3） 非病源檢樣與病源檢樣只有一種檢出病原菌時(shí)，在與同一次細(xì)菌性食源性疾病事件中采集的多數(shù)患者的急性發(fā)病期和恢復(fù)期血清發(fā)生有凝集效價(jià)顯著升高的，可報(bào)告為細(xì)菌性食源性疾病事件的病原體，但此結(jié)果僅用作回顧性診斷檢驗(yàn)結(jié)果的判定原則（4）非病源檢樣與病

13、源檢樣檢出占絕對優(yōu)勢但通常致病意義不甚明確的細(xì)菌如大腸艾希菌、溶藻弧菌等，且其在種類、生化和/或血清型均一致，同時(shí)本次細(xì)菌性食源性疾病事件中非患者對照標(biāo)本中未檢出該菌時(shí)，應(yīng)做該菌的毒素、毒素基因或動(dòng)物試驗(yàn)，陽性結(jié)果可報(bào)告為細(xì)菌性食源性疾病事件的病原體檢驗(yàn)結(jié)果的判定原則（5） 樣品中檢出的生化、血清符合致瀉性大腸艾希菌、金黃色葡萄球菌，一定要以毒素、毒素基因測試陽性為最終結(jié)論報(bào)告蠟樣芽胞桿菌在非病源檢樣中須達(dá)到105cfu/g(ml)以上者才有報(bào)告價(jià)值 檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告 檢驗(yàn)技術(shù)人員應(yīng)在收到食源性細(xì)菌性突發(fā)事件采樣送檢申請單后立即進(jìn)行樣品檢驗(yàn)，并在5日內(nèi)出具檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告。特殊情況需延長出具檢驗(yàn)報(bào)告時(shí)

14、限的，應(yīng)報(bào)相應(yīng)衛(wèi)生行政部門批準(zhǔn)一旦檢驗(yàn)結(jié)果確定后，在檢驗(yàn)報(bào)告還未完成前可先向有關(guān)部門電話報(bào)告檢驗(yàn)結(jié)果檢驗(yàn)報(bào)告送達(dá)單位：市、區(qū)、縣疾控中心實(shí)驗(yàn)室完成樣品檢驗(yàn)結(jié)果，將檢驗(yàn)報(bào)告送達(dá)樣品送檢單位檢驗(yàn)樣品的處置 市、區(qū)、縣疾控中心在未完成細(xì)菌性食源性疾病和食物中毒的樣品檢驗(yàn)工作前，所有采集的樣品應(yīng)在合適的條件下保存，其中對經(jīng)檢驗(yàn)確屬陰性的或已經(jīng)檢測出病原菌并鑒定的樣品完成檢驗(yàn)報(bào)告后即可消毒銷毀；對經(jīng)檢驗(yàn)為可疑的、暫時(shí)無法確認(rèn)和需要復(fù)測的標(biāo)本應(yīng)予保留 檢出病原菌的保存 區(qū)縣疾控中心完成對細(xì)菌性食源性疾病和食物中毒樣品檢驗(yàn)后，對檢到的細(xì)菌性食源性疾病和食物中毒病原菌菌株應(yīng)在3日內(nèi)由專人送市疾控中心，由市疾控

15、中心菌毒種保藏中心統(tǒng)一保存；市疾控中心對細(xì)菌性食源性疾病和食物中毒標(biāo)本中檢到的病原菌，移交市疾控中心菌毒種保藏中心統(tǒng)一保存 細(xì)菌檢驗(yàn)重要篩檢試驗(yàn)接觸酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)用于分辨G-桿菌中腸桿菌科及弧菌科兩類細(xì)菌 革蘭陰性桿菌陽性反應(yīng) 弧菌科陰性反應(yīng)腸桿菌科接觸酶試驗(yàn)用于分辨G+球菌中葡萄球菌及鏈球菌陽性反應(yīng)葡萄球菌 革蘭陽性球菌陰性反應(yīng)鏈球菌接觸酶接觸酶-+沙門菌檢測概況1880年發(fā)現(xiàn)，至今已有2600種有動(dòng)力（除雞-雛沙門菌）大多產(chǎn)H2S （除副甲傷寒沙門菌等）產(chǎn)酸大多產(chǎn)氣（除傷寒、雞-雛沙門菌）靛基質(zhì)-、蔗糖-、乳糖-甘露醇+符合腸桿菌科特征（葡萄糖+、硝酸鹽還原+、氧化酶-）沙門菌

16、的初篩腸道綜合發(fā)酵管1：甘露醇（上斜面）+葡萄糖（下直面）+產(chǎn)氣腸道綜合發(fā)酵管2：蔗糖-、 動(dòng)力+、H2S+、靛基質(zhì)-血清凝集（1）A-F多價(jià)+OH1H2血清凝集（2）若生化反應(yīng)符合，而血清A-F多價(jià)-，考慮：Vi抗原（傷寒、副丙傷寒沙門菌）遮蔽，煮沸后再凝亞利桑那菌：遲緩發(fā)酵乳糖，延長Mac平板培養(yǎng)時(shí)間至4天可能是A-F以外的沙門菌：如O 39 ：H b，2旺次渥沙門菌在上海地區(qū)多見極可能是檸檬酸桿菌報(bào)告方式A群 甲型副傷寒沙門菌 1,2,12 :aB群 乙型副傷寒沙門菌 1,4,5,12 :b :1,2 鼠傷寒沙門氏菌 1,4,5,12 :i :1,2 C群 丙型副傷寒沙門菌 6,7,vi

17、:c:1,5 豬霍亂沙門菌 6,7, :c:1,5D群 腸炎沙門菌 1,9,12 : g,m 傷寒沙門菌 1,9,vi : d 雞雛沙門菌 1,9,12 : -志賀菌檢測概況至今已有4群（A、B、C、D）、32種（A-痢疾志賀菌10個(gè)血清型； B 福氏志賀菌6個(gè)血清型+X、Y變種；C-鮑氏志賀菌15個(gè)血清型、D-宋內(nèi) 1個(gè)血清型，S，R兩相）無動(dòng)力乳糖- （除宋內(nèi)遲緩發(fā)酵+）不產(chǎn)H2S產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（除F6產(chǎn)極少量氣泡）靛基質(zhì)大多+（宋內(nèi)-）蔗糖-甘露醇+（痢疾志賀菌為-）符合腸桿菌科特征（葡萄糖+、硝酸鹽還原+、氧化酶-）志賀菌的初篩腸道綜合發(fā)酵管1：甘露醇（上斜面）+/-葡萄糖（下直面）+不產(chǎn)

18、氣腸道綜合發(fā)酵管2：蔗糖-、 動(dòng)力-、H2S-、靛基質(zhì)+血清凝集（1）ABCD4組O抗原多價(jià)凝集血清群O單價(jià)型特異抗原種特異抗原（3，4，6，7）血清凝集（2）若生化反應(yīng)符合，而血清A-F多價(jià)-，考慮：A、C群志賀菌O抗原外有K包膜抗原遮蔽，煮沸后再凝可能是EIEC，再做大生化以鑒別（產(chǎn)氣 、ONPG ）宋內(nèi)的R相菌，用R相血清凝集可能是蜂窩哈夫尼亞菌，做大生化以鑒別可能是類志賀鄰單胞菌，觀察動(dòng)力、氧化酶報(bào)告方式痢疾志賀菌1型 福氏志賀菌2a型福氏志賀菌X變種 鮑氏志賀菌13型宋內(nèi)志賀菌S相大腸桿菌O157：H7檢測概況1885年德國人艾希自人畜腸腔分離出（E.coli），人類認(rèn)識(shí)該菌為正常細(xì)

19、菌1945年Bary自病兒腹瀉便中大量檢出E.coli，并證實(shí)該E.coli是病源逐漸認(rèn)識(shí)E.coli有兩類：正常E.coli和致瀉E.coliEIEC、EPEC、ETEC1982年美國發(fā)現(xiàn)有種E.coli引起出血性腸炎（HC）和溶血性尿毒綜合征（HUS）1987年levine提出EHEC概念，指出SLT毒素是病因1996年日本9000名兒童暴發(fā)，11人死亡， E.coli O157：H71999年我國暴發(fā)？大腸桿菌 0157 : H7檢測大腸桿菌O、H抗原不同分成200多血清型山梨醇不發(fā)酵（95% E.coli 發(fā)酵）葡萄糖醛酸酶陰性（ 96% E.coli 陽性）判斷為腸出血性大腸桿菌（E

20、HEC），除血清型符合0157 : H7或H-外，還須證實(shí)SLT（VT）陽性李斯特菌檢測該菌1926年被確認(rèn)為是人獸共患病菌，但很快受到重視：分布廣泛，在全世界的土壤、水中都有存在，溫帶比熱帶更多見易感動(dòng)物多，除人類外，迄今已從42種哺乳動(dòng)物，22種禽類、魚類、甲殼動(dòng)物中分離出來，其中易感性最高的是牛、兔、犬、貓低溫下可生長，雖然此菌屬于中溫型，但其生長溫度寬，為145在46的低溫下也可繁殖。因此，放在冰箱中的食品，或經(jīng)冷藏運(yùn)輸?shù)氖称?，如有此菌存在，它們都可生長繁殖并使人致病1988年世界衛(wèi)生組織證實(shí)為食物中毒病原菌：此菌可以通過水源、食品原料、廚房食物制作中任何一個(gè)環(huán)節(jié)的污染傳播給人類。主要

21、的食品有4種：牛乳和乳制品：肉類，特別是牛肉及其制品；蔬菜、沙拉等食品；海產(chǎn)品概況本菌為革蘭氏陽性桿菌，菌體短小，直或稍彎在2225環(huán)境可形成4根鞭毛，故在25肉湯培養(yǎng)物中運(yùn)動(dòng)活潑，37基本無動(dòng)力。幼齡培養(yǎng)物為革蘭氏陽性，衰老培養(yǎng)物可轉(zhuǎn)為革蘭陰性，呈兩極著色，易誤認(rèn)為雙球菌。 形態(tài)、動(dòng)力與染色本菌營養(yǎng)要求不高，在20-25培養(yǎng)有動(dòng)力，穿刺培養(yǎng)，2-5天可見倒立傘狀生長該菌的生長范圍為2-42（故可用4冷增菌以抑制其它雜菌的干擾），最適培養(yǎng)溫度為35-37初期在5%羊血瓊脂平板上菌落細(xì)小、露滴狀、光滑、透明，后變灰暗。單核細(xì)胞增生李斯特菌、綿羊李斯特菌、西爾李斯特菌在血平板上的菌落有狹窄的-溶血

22、環(huán) 培養(yǎng)特性彎曲菌檢測本菌為革蘭陰性菌，呈S形、螺旋狀或紡錘生長要求為微量的有氧條件培養(yǎng)最適宜溫度為42在選擇性平皿上，可形成兩類菌落1.第一型菌落不溶血、灰白色、扁平、濕潤、有光澤、有擴(kuò)散趨勢，看上去象水滴，有從接種劃線向外擴(kuò)散的傾向2.第二型菌落不溶血、菌落是分散單個(gè)的(直徑12mm)凸起，完整發(fā)亮的菌落形態(tài)、培養(yǎng)特性快速檢測技術(shù)在疾病控制系統(tǒng)微生物檢驗(yàn)中的應(yīng)用上海市疾病預(yù)防控制中心陳悅微生物診斷的演化(A) 1673年：顯微鏡發(fā)明1880年：人工培養(yǎng)基發(fā)明1914年：干燥培養(yǎng)基發(fā)明1970年以前：忙于分離各種細(xì)菌，采用生化及血清學(xué)鑒定微生物診斷的演化(B) 1970年以后：電腦化+細(xì)菌數(shù)

23、值分類鑒定的應(yīng)用1980年：微量快速生化的應(yīng)用及全自動(dòng)鑒定系統(tǒng)的產(chǎn)生1985年以后：各種免疫及核酸技術(shù)的廣泛應(yīng)用培養(yǎng)基的進(jìn)步 利用細(xì)菌的專有酶進(jìn)行快速篩選原有篩選培養(yǎng)基的不足：SS、Mac、WS、XLD沙門氏菌具有辛酸酯酶，以-萘酚辛酯為底物，經(jīng)沙門氏菌酶解，釋出- 萘酚與固蘭作用出現(xiàn)紫紅色大腸埃希氏菌具-葡萄糖醛酸酶，但以O(shè)157：H7為代表的腸出血性大腸埃希氏菌（EHEC）卻不具此酶，故-葡萄糖醛酸酶陰性已成為初步篩查EHEC的重要特征E.coli O157 : H7 ID 顯色培養(yǎng)基典型菌落O157：H7墨綠色菌落沙門菌粉色菌落沙門菌 ID 顯色培養(yǎng)基典型菌落細(xì)菌微量快速鑒定系統(tǒng)（手工）API MicroScan Rap-ID Enterotube 細(xì)菌鑒定的微量多項(xiàng)試驗(yàn)套組可使微生物有一標(biāo)準(zhǔn)的鑒定材料，不會(huì)因?yàn)樗褂玫呐囵B(yǎng)基不同而鑒定出不同菌名?？煽s短鑒定的時(shí)間。傳統(tǒng)試管鑒定法需配制各種不同培養(yǎng)基，非常麻煩，而鑒定套組一次可配上好幾百個(gè)，可存放。套組鑒定可以給細(xì)菌一個(gè)號(hào)碼，代表生物型號(hào)碼，以此作為追蹤傳染源的依據(jù)。 細(xì)菌微量快速鑒定系統(tǒng)（自動(dòng)）