植物組織石蠟切片制作

1、關(guān)于植物組織石蠟切片的制作第一張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月石蠟制片的基本步驟1.取材2.固定、保存3.脫水4.透明5.浸蠟與包埋6.切片7.粘片與烤片8.脫蠟與復(fù)水9.染色10.切片脫水、透明和封固第二張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月1.取材 1.1 材料來源及部位：與觀察目的有關(guān) 種類 部位 發(fā)育階段 觀察橫切面還是縱切面？1.2 取材原則： 動(dòng)作：快，輕，用力均勻 體積合適（5-10mm為宜） 刀要鋒利2. 固定、保存 目的-殺死各種酶，保持細(xì)胞的結(jié)構(gòu) 固定液 固定時(shí)間 固定后的處理第三張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月 最常用的固定液為FAA。固定時(shí)間不受

2、限制，短則 數(shù)小時(shí)，長可延至數(shù)月或數(shù)年。 配方： 50或70酒精 90毫升 冰醋酸 5毫升 福爾馬林 5毫升 柔軟材料用50酒精，堅(jiān)硬材料用70酒精配制。第四張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月卡諾氏(Carnoys)固定液：有極強(qiáng)的滲透力固定根尖和花藥只需40-60分鐘，時(shí)間太長不好(不能超一天)。固定后用95酒精沖洗，在組織不能立即處理時(shí)，需轉(zhuǎn)入70酒精中保存。配法有兩種： 第五張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月固定組織時(shí)應(yīng)注意：保持組織新鮮，勿使其干燥，盡快固定處理。組織塊不易過大過厚，厚度必須控制在0.3cm以內(nèi)。固定液必須有足夠的量，一般大于組織20倍以上。抽氣：使固定

3、液盡快滲入材料內(nèi)部，并排除材料內(nèi)氣泡的干擾。第六張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月組織固定后的處理沖洗或漂洗：組織固定后應(yīng)充分水洗，除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀，否則會影響以后的染色效果。材料經(jīng)過固定后，需要保存下來以備利用，通常使用的保存劑是70%的酒精溶液，可以使一般的材料保存較長的時(shí)間而不至于變壞。（FAA或卡諾固定液固定不需要沖洗）通常在冰箱中4存放。第七張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3. 脫水水和透明劑不能互溶，只有脫去水分后，才能讓透明劑進(jìn)入。凡用酒精配制的固定液，一律用同濃度的酒清洗。酒精為常用脫水劑，它既能與水相混合，又能與透明劑相混。為了避免組織材料

4、的急劇收縮，應(yīng)按從低濃度到高濃度遞增的順序進(jìn)行.30%-50%-70%-85%-95%-100%- 100% 每步30-60分鐘左右。第八張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月要求及注意事項(xiàng)保證脫水梯度和每一步脫水時(shí)間，水要完全脫凈。不同大小的組織塊脫水時(shí)間不同。不能過度脫水（過久使組織變脆、收縮）材料可以放在70酒精中保存。正丁醇、叔丁醇、丙酮及二氧陸環(huán)等也可做脫水劑。第九張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月4.透明純酒精不能與石蠟相溶，還需用能與酒精和石蠟相溶的媒浸液，替換出組織內(nèi)的酒精。材料塊在這類媒浸液中浸漬，出現(xiàn)透明狀態(tài)，此液即稱透明劑，透明劑浸漬過程稱透明.常用的透明劑有

5、二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等，各種透明劑均是石蠟的溶劑。通常組織先經(jīng)純酒精和透明劑各半的混合液浸漬12小時(shí)，再轉(zhuǎn)入純透明劑中浸漬。材料進(jìn)入無水的透明劑中后，若透明劑變渾濁，說明材料中的水分未脫干凈，必須回到前面一級無水的脫水劑中再次脫水（但是效果往往不好）。透明劑的浸漬時(shí)間則要根據(jù)組織材料塊大小及組織特性而定。第十張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月5.浸蠟與包埋用石蠟取代透明劑，使石蠟浸入組織而起支持作用。通常先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬12小時(shí)或者過夜，再先后移入熔化的石蠟液中浸漬幾天。浸蠟應(yīng)在高于石蠟熔點(diǎn)3左右的溫箱中進(jìn)行，以利石蠟浸入組織內(nèi)。第十一張，PPT

6、共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月石蠟熔點(diǎn)： 45-50 軟蠟 55-60 硬蠟材料較硬的，用熔點(diǎn)較高的石蠟包埋；切片較薄時(shí)（在8微米以下），用熔點(diǎn)較高的石蠟包埋；夏季采用熔點(diǎn)較高的石蠟（56,58）,冬季宜選用熔點(diǎn)較低的石蠟（52,54）。第十二張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月石蠟的處理：新蠟應(yīng)溶一次，增加密度。并用濾紙過濾去除雜質(zhì)。加5%10%的蜂蠟(工蜂腹部下面四對蠟腺分泌物質(zhì) ),增加石蠟的韌性。反復(fù)溶的舊蠟包埋效果更好。程序：在溶蠟箱中進(jìn)行，55-60，恒溫。浸蠟：二甲苯透明后的組織塊在二甲苯石蠟（1 1）中1次，在石蠟中2次，每次1-3天左右。包埋：在室溫進(jìn)行第十三張，PP

7、T共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月6. 切片包埋好的蠟塊用刀片修成規(guī)整的梯形，粘于小木塊上。第十四張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第十五張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月切片刀的銳利與否、蠟塊硬度適當(dāng)都直接影響切片質(zhì)量，可用熱水或冷水等方法適當(dāng)改變蠟塊硬度。通常切片厚度為812微米，切出一片接一片的蠟帶，用毛筆輕托輕放在紙上。第十六張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月7. 粘片與烤片用粘附劑將展平的蠟片牢附于載玻片上，以免在以后操作中材料脫落。在載玻片上涂抹粘片劑，再滴蒸餾水，放上蠟片，至于展片臺上鋪展，最后用濾紙吸除多余水分，將載玻片放入42溫箱中干燥。第十七張，PP

8、T共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月常用的粘片劑為郝伯特(Haupt) 粘貼劑：甲液：明膠 1克 蒸餾水 100毫升 甘油 15毫升 苯酚 2克乙液：甲醛 4毫升 蒸餾水 100毫升第十八張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月8. 脫蠟及復(fù)水干燥后的切片需脫蠟及復(fù)水才能在水溶性染液行染色。用二甲苯脫蠟，再逐級經(jīng)梯度酒精復(fù)水。脫蠟（溶蠟）：將切片上的石蠟溶去。一般都用二甲苯溶脫蠟。如果脫蠟不徹底，材料的染色就困難。復(fù)水：脫蠟后的材料從高濃度的酒精溶液（100%）開始，逐級進(jìn)入低濃度的酒精溶液，最后一級通常是30%酒精或水，使材料中的水分逐漸增加。如果不經(jīng)過復(fù)水，材料脫蠟后直接進(jìn)入染色劑中，材料

9、將會嚴(yán)重變形，甚至難以染色。第十九張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月順序：二甲苯1/2 二甲苯+1/2純酒精100%酒精95酒精85酒精70酒精50酒精30酒精水染色以上各級約需510分鐘。第二十張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月9. 染色染色的目的是使細(xì)胞組織內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)不同的顏色和足夠強(qiáng)的差異以便于觀察。經(jīng)染色可顯示細(xì)胞內(nèi)不同的細(xì)胞器及內(nèi)含物以及不同類型的細(xì)胞組織。根據(jù)觀察要求及研究內(nèi)容采用不同的染色劑及染法。番紅與固綠染色法 番紅用l的水溶液，固綠用0.5的酒精液(用95的酒精配制)染色步驟如下： 第二十一張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十二張，PPT共二十四頁，創(chuàng)作于2022年6月10. 切片脫水