結(jié)核病的病原學和實驗室診斷

1、結(jié)核病的病原學和實驗室診斷主要內(nèi)容結(jié)核病的流行情況1結(jié)核病的病原學32結(jié)核病的實驗室診斷3結(jié)核病的分子藥敏341.結(jié)核病的流行概況全球范圍內(nèi)結(jié)核病疫情急劇惡化人口大規(guī)模流動結(jié)核菌耐藥現(xiàn)象益發(fā)嚴重 結(jié)核病合并艾滋病感染我國是世界上僅低于印度的第二結(jié)核病大國結(jié)核菌感染率44.5%新發(fā)活動性結(jié)核患者130萬/年死亡13萬/年2011 WHO tuberculosis control report我國是全球27個耐藥結(jié)核病高負擔國家之一2013年世界衛(wèi)生組織宣布全球耐多藥結(jié)核病緊急狀態(tài)全球的結(jié)核病患者,在接受治療之前已經(jīng)傳染給了別人！早期快速診斷與治療成為制約結(jié)核病控制的關鍵：有細菌學診斷依據(jù)的病人不

2、超過50%當前結(jié)核研究的熱點新型抗結(jié)核藥物(50%)新型快速診斷技術(40%)新型結(jié)核疫苗(10%)7/45近期結(jié)核病診斷方法的相關研究JID 2012:205 (Suppl 2), S147.2.結(jié)核病的病原學 結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)是引起人類結(jié)核病的主要病原體。1882年由德國醫(yī)生Koch發(fā)現(xiàn)。結(jié)核分枝桿菌屬于厚壁門、裂殖菌綱、放線菌目、分枝桿菌科、分枝桿菌屬。分枝桿菌復合群共包括人型、牛型、非洲型和田鼠型，而人型結(jié)核分枝桿菌是人類主要的致病菌。2022/8/10GDTB8結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)生物學主要特點：1. 細胞壁中含有大量脂質(zhì)2.引起的

3、疾病都呈慢性，并伴肉芽腫生長特點：生長緩慢，繁殖一代在人工培養(yǎng)基內(nèi)約需要1520小時，在靜脈感染未經(jīng)免疫小鼠肺中約需要15小時，在巨噬細胞內(nèi)約需要1520小時，在家兔角膜中約需要2022小時。實驗室檢查方法的歷史1880sTubercle bacilli的發(fā)現(xiàn) Ziehl-Neelsen染色方法1900sMantoux test (TST with tuberculin)1920sPetragnani medium Purified Protein Derivative（PPD）1930sLewenstein-Jensen 培養(yǎng)基1940sDubos agar, Ogawa 培養(yǎng)基1950sM

4、iddlebrook 7H91990sNAAT2000sELISPOT, QuantiFERON,2010sLPA, GeneXpert2020s ?3.結(jié)核病的實驗室診斷 細菌學涂片：敏感性低傳統(tǒng)固體培養(yǎng)：所需時間長，23月 分子生物學TB-DNATB-mRNA 血清/免疫學IGRA：有望替代TST，但不能區(qū)分活動性TB與潛伏感染血清學：存在抗原純度和特異性差等方面的問題液體培養(yǎng)及藥敏試驗：平均時間20天.細菌學診斷萋尼氏染色熒光染色羅氏培養(yǎng)/藥敏試驗我國目前最常用的結(jié)核病實驗室診斷技術快培/藥敏試驗涂片 干燥 固定初染脫色復染 顯微鏡檢查登記/報告顯微鏡檢查堿性復紅鹽酸酒精亞甲蘭石炭酸金胺

5、O鹽酸酒精高錳酸鉀光學顯微鏡檢查熒光顯微鏡檢查萋尼氏染色鏡下形態(tài)熒光染色鏡下形態(tài)LED Fluorescence microscopyLED熒光顯微鏡LED 熒光顯微鏡成本低廉的超亮發(fā)光二極管可承受的價格，價格接近于現(xiàn)有的光學顯微鏡壽命長（ 15-20,000小時）省電可用電池供能可靠性更強不需要空調(diào)設施不需要暗室診斷性能優(yōu)于標準熒光顯微鏡操作人員工作負荷減輕普通熒光顯微鏡和發(fā)光二極管熒光顯微鏡性能比較（不同實驗室的結(jié)果進行匯總與平均）顯微鏡方法靈敏度 (%)特異度 (%)普通熒光顯微鏡直接涂片67.496.1普通熒光顯微鏡濃集涂片66.699.2發(fā)光二極管 熒光顯微鏡直接涂片71.6 (p=

6、0.1025)96.4發(fā)光二極管 熒光顯微鏡濃集涂片72.4 (p=0.0073)98.8BactecMGIT 960/320Bact/Alert 3DVERSA TREK生產(chǎn)廠家美國BD公司法國生物梅里埃公司美國Trek 診斷公司 儀器定位專業(yè)分枝桿菌檢測系統(tǒng)業(yè)內(nèi)金標準普通細菌血培養(yǎng)系統(tǒng)需加裝分枝桿菌培養(yǎng)特殊組件普通細菌血培養(yǎng)系統(tǒng)需加裝分枝桿菌培養(yǎng)特殊組件單機容量960個檢測位每年可至少檢測8000個樣本240個瓶位每年可檢測2000個樣本528個瓶位日均標本處理量2530個67個9個檢測原理熒光增強法：采用敏感性較強的熒光信號探測氧氣的變化情況，只需單一反應，所以速度快，準確性高PH值比色

7、法：當培養(yǎng)瓶內(nèi)有微生物生長，其釋放出的CO2，經(jīng)水飽和后，產(chǎn)生H+，使PH值產(chǎn)生變化，感應器的顏色也隨之變化。需雙重反應，因此速度較慢，假陽性率較高，此技術已趨向淘汰壓力檢測：檢測細菌生長中各種氣體產(chǎn)生和消耗而引起的瓶內(nèi)壓力的變化。靈敏度差。此技術已趨向淘汰檢測技術瓶外檢測技術瓶外檢測技術瓶內(nèi)檢測技術易導致污染及生物安全問題平均陽性報告時間 811天1521天不詳藥敏試劑5種一線抗TB藥物，全部具有FDA及SFDA認證無藥敏試劑提供只有3種一線藥物培養(yǎng)/藥敏試驗陰性培養(yǎng)陽性培養(yǎng)無或微弱熒光FFFO2FO2FO2FO2FO2FFO2FO2CO2O2O2O2O2O2O2O2O2CO2CO2O2FF

8、FFFO2FO2FFFFCO2O2O2O2O2O2強熒光傳感器對氧氣高度敏感的釕復合物肉湯改良Middlebrook 7H9肉湯上部空間已預先充填10% CO2BACTEC MGIT 960/320 指示器系統(tǒng)MGIT /3D制造的液體培養(yǎng)基優(yōu)點比固體培養(yǎng)快 (平均 10-12 天 vs. 20-24 天)比固體培養(yǎng)基更敏感可以自動判讀，或使用標準指示管和操作手冊進行判讀也加快了藥敏試驗的速度局限需要NALC-NaOH進行痰處理和離心普通菌群的污染很常見比固體培養(yǎng)更經(jīng)常地檢出非結(jié)核分枝桿菌（常常不致?。┐_定診斷前必須對所有的陽性培養(yǎng)物進行結(jié)核分枝桿菌的鑒定比固體培養(yǎng)基昂貴血清學診斷血清學診斷技

9、術優(yōu)勢：是一種對疾病進行早期診斷的理想方法。無需活細胞培養(yǎng)和特殊儀器設備操作簡便結(jié)果顯示快速目前用于血清學診斷的主要方法:酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELlSA)斑點金免疫滲濾法(DIGFA)免疫印跡法(Western Blotting)等等WHO對來自不同國家的19種試劑盒產(chǎn)品進行評估，結(jié)果表明：與痰培養(yǎng)相比，這些試劑盒檢測的靈敏度為1%60%，特異度為5399% 1 。原因：由于所用的測定方法、使用的試劑種類或抗原、抗體的不同等，導致測定結(jié)果差異較大，并且缺乏可比性。WHO認為現(xiàn)有的血清學診斷試劑的敏感度和特異度都有待進一步提高，不推薦其作為一種快速診斷的方法在臨床使用。1WHO World Hea

10、lth Organization. Diagnosis evaluation series No.2: laboratory-based evalution of 19 commercially available rapid diagnostic tests for tuberculosis.2008.WHO對結(jié)核抗體評估2011年WHO正式公告：由于目前的商業(yè)血清學試劑在結(jié)核檢測中存在較大差異，且檢測結(jié)果很高比例的假陽性和假陰性，因此不建議使用血清學方法作為結(jié)核桿菌的診斷實驗1 。1WHO Commercial Serodiagnostic Tests for Diagnosis of T

11、uberculosis. 不能早期診斷！容易漏診、誤診！血清學檢測的評價結(jié)核感染者體內(nèi)存在特異的效應T淋巴細胞，效應T淋巴細胞再次受到結(jié)核抗原刺激時會分泌多種細胞因子（IFN-）。因此，檢測效應T淋巴細胞可用于結(jié)核病或結(jié)核潛伏感染者的診斷。由于效應T細胞存活時間很短，而且具有特異性，因此可以作為機體是否正處于被感染的指標，無論是否有臨床癥狀?；贗GRA原理的產(chǎn)品目前已被美國、加拿大、英國、德國、意大利、瑞士、法國、荷蘭、日本等二十余個國家寫入本國的結(jié)核診療指南中。目前應用的進口IGRA主要有兩種商品化的試劑：1）澳大利亞Cellestis公司的 Quanti FERON-TB GOLD In

12、 Tube（QFT-GIT）2）英國蛋白水平分子診斷:-干擾素釋放實驗（IGRA)-干擾素釋放實驗（IGRA） 干擾素檢測陰性干擾素檢測陽性TB抗原多肽T細胞活化T細胞 干擾素T-SPOT.TB原理T-SPOT.TB是以擁有專利的特異抗原（ESAT-6/CFP-10），通過酶聯(lián)免疫斑點技術（ELISPOT）檢測受試者體內(nèi)是否存在結(jié)核效應T淋巴細胞，從而判斷目前該受試者是否感染結(jié)核桿菌（現(xiàn)癥感染）的新方法。結(jié)核桿菌特異抗原：早期分泌抗原靶6（Early Secreted Antigenic Rarget 6，ESAT-6）培養(yǎng)濾液蛋白10（Culture Filtrate Protein 10，

13、CFP 10）結(jié)核桿菌特異抗原由結(jié)核桿菌基因組RD1區(qū)相同的操縱子編碼的蛋白所有的卡介苗（BCG）均丟失該基因序列絕大多數(shù)的環(huán)境分枝桿菌也不存在RD1區(qū)ESAT-6與CFP-10抗原結(jié)核桿菌特異抗原蘇氏?？八_斯戈登牛非洲T-SPOT.TB臨床性能指標 特異性只針對結(jié)核分枝桿菌復合群敏感，與絕大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌和卡介苗（BCG）無交叉反應 美國FDA數(shù)據(jù)：特異性97.1%(297/306) 國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：特異性94.1%(478/508) 靈敏度基本不受免疫力低下/受抑制影響，在肺外結(jié)核患者中有很高的檢出率 美國FDA數(shù)據(jù)：靈敏度95.6%(175/183) 國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：靈敏度95.3%(62

14、4/655)靈 敏 度ReferenceSensitivity Jafari et al 2006 AJRCCM 174;9:1048-53100.0% (12/12) Ferrara et al Lancet 2006 376;1328-34*83.3% (20/24) Lee et al Eur Respir J 2006 28;24-30*96.6% (84/87) Goletti et al Clin Microbiol Infect 2006 12;6:544-50*91.3% (21/23) Meier et al EJCMID 2005 24;529-53695.9% (70/7

15、3) Kang et al Chest. 2007 Sep;132(3):959-65*92.2% (59/64) Janssens et al ERJ 2007 30(4):722-898.3% (57/58) Clarke et al Clin Exp Immunol 2007 150(2):238-44.90.0% (27/30) Detjen et al CID 2007 1;45(3):322-8*92.9% (26/28) Ozekinci et al J Int Med Res 2007;35:696-70392.9% (26/28) Soysal et al IJTLD 200

16、8 12(1):50-56*80.8% (80/99) Dominguez et al Clin Vacc Immunol 2008 15(1);168-71*85.7% (36/42) Chee et al J Clin Microbiol. 2008 Apr 9*94.1% (254/270) Vincenti et al Clin Exp Immunol. 2007 Oct;150(1):91-8*84.6% (11/13) Wang et al Emerging Infect Dis 2007 13;4:553-887.2% (34/39) Losi et al Eur Respir

17、J. 2007 Dec;30(6):1173-9100.0% (10/10) Kim et al Arch Intern Med 167;20:2255-2259100.0% (22/22) Connell et al PLoS ONE 2008. 3; 7:e2624*100.0% (9/9) Kobashi et al. Scand J Infect Dis 2008. 40; 8: 629-34*87.5% (42/48) Kobashi et al. J Infect. 2008 Epub ahead of print.*90.0% (36/40) Domnguez et al. Di

18、agn Microbiol Infect Dis. 2008.* Epub ahead of print84.2% (32/38) Goletti et al. PLoS ONE. 2008. 3; 10: e3417.*89.9% (62/69) Bosshard et al. Respir Med. 2008. Epub ahead of print98.4% (62/63) Higuchi Med Microbiol Immunol. 2008. Epub ahead of print*95.9% (47/49) TOTAL92.0% (1139/1238) 特 異 性T-SPOT.TB

19、的實驗步驟用BD CPT 管或Ficoll提取液收集外周血單個核細胞結(jié)核特異抗原（ESAT-6/CFP 10）刺激結(jié)核特異的效應T淋巴細胞使其分泌-干擾素效應T淋巴細胞分泌的-干擾素與膜板預包被的抗-干擾素抗體結(jié)合并固定在細胞周圍1個斑點=1個效應T細胞加入顯色液，觀察結(jié)果過夜孵育，洗板，加入酶標二抗陰性結(jié)果陽性結(jié)果空白對照抗原AESAT-6抗原BCFP10陽性對照（PHA）實驗效果圖方法學的優(yōu)點檢測特異性的提高幫助臨床區(qū)分卡介苗接種和環(huán)境分枝桿菌感染引起的“假陽性”，避免了臨床的無效用藥檢測靈敏度的提高有利于臨床對結(jié)核病的早發(fā)現(xiàn)、早治療，避免了疾病的傳播與擴散快速48小時出結(jié)果方法學的局限不

20、能區(qū)分活動性TB與潛伏感染不能夠提示臨床患者的病變部位，需要結(jié)合臨床的判斷目前還不能夠根據(jù)斑點數(shù)量的多少來判斷患者是活動性結(jié)核病或是潛伏感染者檢測收費高（800元/次）實驗結(jié)果的解釋 陰性結(jié)果提示患者體內(nèi)不存在針對結(jié)核桿菌特異的效應T細胞。假陰性結(jié)果：感染階段不同；少數(shù)免疫系統(tǒng)功能不全/疾?。粚嶒灧钦２僮?。 陽性結(jié)果提示患者體內(nèi)存在針對結(jié)核桿菌特異的效應T細胞，患者存在結(jié)核感染。但是否是活動性結(jié)核病，需結(jié)合臨床癥狀和其它檢測指標綜合判斷。假陽性結(jié)果： 4種環(huán)境分枝桿菌感染時：（堪薩斯）、（蘇氏）、（海）、（戈登）各國對潛伏感染風險人群的篩查指南風險人群美國指南加拿大指南英國指南免疫力抑制人群

21、（例如，HIV感染者，使用強的松或TNF-抑制劑治療）TST或IGRA；如果是陰性或高度懷疑的，TST和IGRA都要檢查TST，如果TST陰性要用IGRA確認TST或IGRABCG接種者（如果也屬于其它風險人群）推薦用IGRA沒有特定的推薦TST或IGRA與傳染性肺結(jié)核患者密切接觸TST或IGRATST，用IGRA進一步確認TST陽性TST，用IGRA進一步確認TST陽性醫(yī)務工作者TST或IGRA推薦用TSTTST或IGRA，視情況而定無法再來確認TST結(jié)果的人群（例如，流浪漢，注射吸毒者或交通不方便）推薦用IGRA沒有特定的推薦推薦用IGRA國外出生的人群只篩查過去5年內(nèi)移民的人群；TST或

22、者IGRA只篩查過去2年內(nèi)小于15歲的移民；TST，用IGRA進一步確認TST陽性只篩查新移民；TST篩查5至15歲移民，用IGRA進一步確認TST陽性；IGRA篩查16至35歲移民其它風險人群TST或IGRATST，用IGRA進一步確認TST陽性TST，用IGRA進一步確認TST陽性樣本量為26 680 調(diào)查者的15個多中心研究顯示,在4年的隨訪中,IGRA-陽性的個體中發(fā)病數(shù)為448 例/1000人/每年. 2011年9月的研究結(jié)果提示，IGRA-陰性對于兒童（小于5歲）不能排除結(jié)核病(Pediatr. Infect. Dis. J.30, 817818, 2011). Childhood

23、 tuberculosis treatment remains imprecise scienceNature MedicineVolume:17,Page:116011 October 2011.TB-DNA檢測：1. 能穩(wěn)定檢測10copy的TB-DNA ，靈敏度高 ，特異性強。2. 早期、快速、準確地診斷結(jié)核病。 痰液、肺及支氣管灌洗液肺結(jié)核 血液播散性結(jié)核和各臟器的結(jié)核病 腦脊液中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核病 宮頸拭子、尿道拭子泌尿生殖道結(jié)核病3. 熒光定量PCR檢出結(jié)核桿菌陽性率顯著高于痰涂片抗酸染色和改良羅氏培養(yǎng)法。4. TB-DNA濃度可用于判斷療效： 痰標本中結(jié)核桿菌的數(shù)量呈逐漸下降趨勢

24、，TB-DNA拷貝數(shù)下降。根據(jù)病原體DNA濃度，對藥物治療及療效觀察提供參考依據(jù) 。分子生物學診斷Real-time PCR 環(huán)介導等溫擴增法(LAMP)的技術特點是針對靶基因的6個區(qū)域設計4 條特異引物，利用一種鏈置換DNA聚合酶在等溫條件(63-65)下保溫3060分鐘，即可完成核酸擴增反應。與常規(guī)PCR相比，不需要模板的熱變性、溫度循環(huán)、電泳及紫外觀察等過程，具有簡單、快速、特異性強的特點。環(huán)介導恒溫擴增（LAMP）技術2小時全過程目測法檢測流程檢測方法說明結(jié)果判斷 在陰性對照反應管液體顏色呈橙色，陽性對照反應管液體顏色呈綠色的條件下： 若待檢樣本反應管中液體顏色呈綠色，則可報告該樣本檢

25、測結(jié)果為結(jié)核分枝桿菌陽性； 若待檢樣本反應管中液體顏色呈橙色，則可報告該樣本檢測結(jié)果為結(jié)核分枝桿菌陰性； 若陰陽性對照反應管結(jié)果與上述情況不符，則本次檢測結(jié)果無效，應重新檢測。RNA作為臨床分子診斷靶標的優(yōu)點：RNA 拷貝數(shù) DNA拷貝數(shù)更具臨床意義: 生命力旺盛的病原體RNA轉(zhuǎn)錄活躍RNA遠不如DNA穩(wěn)定病原體死亡，RNA很快降解 1.交叉污染少 2.較好的愈后指標結(jié)核桿菌RNA(TB-RNA)SAT技術原理操作過程4. 結(jié)核病的分子藥敏HAIN 技術DNASTRIPT-spot -Xpert MTB/ RIFDNA微陣芯片探針熔解曲線技術藥物藥物作用機制參與基因編 碼 酶作 用突變頻率（%

26、）INH氧自由基對DNA，脂質(zhì)等多效應Kat G觸酶-過氧化物酶活化原藥4258INH對NADH競爭性INH-NADH加成物抑制分支菌酸合成代償katG功能inhAkasAahpCndhnat glf烯酰基載體蛋白還原酶酮?；鞍缀铣擅竿榛鶜溥^氧化物酶NADH脫氫酶芳香胺乙酰轉(zhuǎn)移酶吡喃半乳糖變位酶分支菌酸代謝靶酶靶酶？ 靶酶？NAD+ 減少乙酰化失活INH靶酶？21341015耐藥標記物RFP抑制信使RNA轉(zhuǎn)錄rpoBRNA多聚酶靶酶96100PZA酸化胞漿，失活酶活性抑制脂肪酸代謝？替代煙酰胺摻入NAD抑制膜轉(zhuǎn)運功能pncAFasI吡嗪酰胺酶Fas I？活化原藥靶酶？7297EMB阿拉伯半乳

27、聚糖合成抑制阿拉伯呋喃糖累積脂阿拉伯甘露聚糖合成抑制embCABembB阿糖轉(zhuǎn)移酶靶酶4765SM肽鏈翻譯錯誤rpsLrrs核糖體30S亞基S12蛋白核糖體16SrRNA靶位靶位5259821AK/KMOFx肽鏈翻譯錯誤抑制DNA回旋酶rrsgyrA核糖體16SrRNADNA回旋酶A亞基靶位靶酶7594Cs抑制肽聚糖合成ulrA/dadBD-丙氨酸合成酶靶酶原理：采用線性探針技術（LiPA），擴增后的產(chǎn)物與預先固化在膜上的特異性探針雜交，通過顯色反應判斷結(jié)果。檢測標本：涂陽痰標本/TB-DNA陽性標本固體或液體培養(yǎng)菌株 Hain 技術GT-Blot 48自動雜交儀1臺 所需設備：GTQ PCR

28、96擴增儀1臺 Mikro 220 離心機1臺 恒溫器1臺超聲波振蕩儀1臺 TARGET靶基因菌種鑒定16SrRNA IS6110異煙肼katG、inhA、ahpC、oxyR、KasA、ndh 利福平rpoB乙胺丁醇embB吡嗪酰胺 pncA鏈霉素 rpsL、rrs喹諾酮類藥物 gyrA、gyrB MTBDRplus 方法原理：PCR擴增檢測rpoB、katG和inhA基因突變位點，診斷RFP和INH耐藥。rpoB 野生型探針: WT1 - WT8rpoB 耐藥突變探針: MUT1-3: D516V, H526Y, H526D, S531L 通過缺失的野生型信號進行突變探測 通過出現(xiàn)的突變信號

29、進行突變探測MTBDRplus rpoB511513516518522526531533rpoB WT2rpoB WT4rpoB WT6rpoB WT8rpoB WT7rpoB MUT1 (D516V)rpoB MUT3 (S531L)rpoB MUT2A (H526Y)rpoB MUT2B (H526D)514515rpoB WT1rpoB WT3rpoB WT5509508505MTBDRplus 操作流程DNA提取用NALC/NaOH處理痰標本2) PCR擴增3) 雜交擴增產(chǎn)物和固化在膜上的特異性探針雜交4) 結(jié)果判讀MTBDRplus 反應條帶(示范)Bandelette MTBDR

30、(Hain Lifescience) 鑒定結(jié)核菌利福平rpoBINHkatG 315藥物GenoType MTBDRplus結(jié)果比例法藥敏結(jié)果 耐藥 敏感 INH 耐藥 45 0 敏感 7 16靈敏度：86.5% (45/52)特異度：100%(16/16)符合率：89.7%(61/68)菌株標本 GenoType MTBDRplus方法與比例法藥敏試驗結(jié)果比較藥物GenoType MTBDRplus結(jié)果比例法藥敏結(jié)果 耐藥 敏感 RFP耐藥 48 0 敏感 1 16靈敏度：98.0% (48/49)特異度：100%(16/16)符合率：98.5%(64/65)菌株標本 GenoType MT

31、BDRplus方法與比例法藥敏試驗結(jié)果比較痰標本（涂片陽性）GenoType MTBDRplus方法與比例法藥敏試驗結(jié)果比較藥物GenoType MTB DRplus結(jié)果比例法藥敏結(jié)果 耐藥 敏感 INH 耐藥 63 0 敏感 1 129靈敏度：98.4% (63/64)特異度：100%(129/129)符合率：99.5%(192/193)痰標本（涂片陽性）GenoType MTBDRplus方法與比例法藥敏試驗結(jié)果比較藥物GenoType MTBDR plus結(jié)果比例法藥敏結(jié)果 耐藥 敏感 RFP 耐藥 39 12 敏感 2 140靈敏度：95.1% (39/41)特異度：92.1% (14

32、0/152)符合率：92.7% (179/193)優(yōu)點：Hain 技術可以快速檢測RFP和INH的耐藥時間短、操作簡單、安全高 特異性和靈敏度較高、重復性好主觀因素影響小、更為可靠缺點:需要專門設備；未發(fā)現(xiàn)所有的耐藥突變位點，不能檢測所有藥物的耐藥基因型；MTBDR plus試劑盒的檢測試紙條，缺少ahpC-oxyR間隔序列范圍，否則可進一步提高INH耐藥檢測的敏感性；不能取代傳統(tǒng)細菌學檢測、只能作為參考。進行標本處理、實時PCR和利福平耐藥性檢測的完整平臺此平臺由FIND和Cepheid（一個加州公司）所開發(fā)痰標本可以直接放入模塊中，而無需與任何試劑進行混合處理GeneXpert 設備可進行標本液化、去污染、富集、DNA提取、 r