醫(yī)學(xué)科研方法

1、醫(yī)學(xué)科研方法學(xué) 魔天記科研過(guò)程： 選題、設(shè)計(jì)、實(shí)踐、統(tǒng)計(jì)分析 與總結(jié)成文科研方法學(xué): 解決科研過(guò)程中問(wèn)題的程序與 手段（如何提出問(wèn)題、設(shè)計(jì)、 實(shí)踐)第一節(jié) 醫(yī)學(xué)科研的分類(lèi)與任務(wù) 分 類(lèi)學(xué)科屬性：基礎(chǔ)、臨床、預(yù)防、社會(huì)醫(yī)學(xué)研究科研體系：現(xiàn)代、傳統(tǒng)、中西醫(yī)結(jié)合、藥學(xué)科研意義：基礎(chǔ)（理論）研究（探索未知、解決理論 新觀點(diǎn)、新信息） 如氣體受體和嗅覺(jué)系統(tǒng)的基因發(fā)現(xiàn)(2004) 幽門(mén)螺桿菌的發(fā)現(xiàn)(2005) 應(yīng)用基礎(chǔ)研究（臨床科學(xué)研究課題 ） 如疾病發(fā)病機(jī)制、診斷新技術(shù)、方法 應(yīng)用研究（推廣新技術(shù)、新產(chǎn)品） 分 類(lèi)按設(shè)計(jì)與事實(shí)的關(guān)系（研究的時(shí)間） 前瞻性研究：先設(shè)計(jì)、后實(shí)踐（結(jié)果可靠性 高，結(jié)論可信性好

2、） 回顧性研究：事物發(fā)生在前，設(shè)計(jì)在后按科研過(guò)程采用的方法 實(shí)驗(yàn)性研究：實(shí)驗(yàn)方法，嚴(yán)格控制條件，研究對(duì)象進(jìn) 行干預(yù) 調(diào)查性研究：現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查，搜索資料，研究對(duì)象未干預(yù)科研任務(wù)1、發(fā)現(xiàn)醫(yī)學(xué)中未知事物與未知過(guò)程 人類(lèi)基因組DNA序列草圖繪制完成(1990-2000)，估計(jì)人類(lèi)基因組大約2.7萬(wàn)個(gè)（決定人類(lèi)生命的全部組織結(jié)構(gòu)和活動(dòng)） 蛋白質(zhì)組學(xué)（表達(dá)、分布、加工修飾、生物學(xué)功能與相互作用） 系統(tǒng)生物學(xué)（生命是由多種成分包括基因和蛋白質(zhì)構(gòu)成，組分之間存在廣泛的相互作用,信息網(wǎng)絡(luò)） 2.揭示醫(yī)學(xué)中已知事物的未知規(guī)律癌癥(發(fā)病機(jī)制)(子宮頸癌-人類(lèi)乳頭瘤病毒；艾滋 病-HIV，2008年，諾貝爾生理學(xué)獎(jiǎng)）毒品

3、(成癮機(jī)制)(受體、酶活性、活性物質(zhì)變化)新發(fā)現(xiàn)的疾病發(fā)病機(jī)制（SARS）新的活性物質(zhì)(化學(xué)本質(zhì)、生物學(xué)特性、生理作用、 病理生理意義、藥理學(xué)特性、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、 靶點(diǎn)）(1)阿片受體發(fā)現(xiàn)，推論存在內(nèi)源性阿片樣物質(zhì) 機(jī)體不可能為外源性物質(zhì)（嗎啡）設(shè)置受體 電刺激某些神經(jīng)核團(tuán)產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用，預(yù)先應(yīng)用 納洛酮（阿片受體阻斷劑）取消電刺激鎮(zhèn)痛作用 （電刺激釋放某些活性物質(zhì)作用阿片受體） 發(fā)現(xiàn)腦啡肽 (2)孤兒受體，利用“孤兒受體策略”，以反向藥 理學(xué)方法尋找內(nèi)源性配體3.探索醫(yī)學(xué)中已知規(guī)律的應(yīng)用 基因工程 組織工程 新靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)新藥4. 驗(yàn)證與發(fā)展醫(yī)學(xué)中已有的理論和學(xué)說(shuō)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展19

4、76年, 損傷反應(yīng)學(xué)說(shuō): 內(nèi)皮細(xì)胞受損，細(xì) 胞相互作用，多種活性物質(zhì)1999年, 炎癥性疾病學(xué)說(shuō): 內(nèi)皮細(xì)胞受損，多 種細(xì)胞因子 血管內(nèi)皮損傷是動(dòng)脈粥樣硬化形成的始動(dòng)環(huán)節(jié)(Ross, New Engl Med J, 1999)硝酸甘油舒血管機(jī)制的研究進(jìn)展 硝酸甘油為治療心絞痛的經(jīng)典藥物，舒張血管，降低前后負(fù)荷，降低心肌耗氧量，緩解心絞痛。 1867年- 應(yīng)用于臨床(直接舒張血管) 1977年- 硝酸甘油 NO cGMP 舒張血管 2001年 降鈣素基因相關(guān)肽介導(dǎo)硝酸甘油舒血管 降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)感覺(jué)神經(jīng)的主要遞質(zhì)，37個(gè)氨基酸組成，強(qiáng)效舒血管作用 CGRP介導(dǎo)硝酸甘油的舒血管作用(工

5、作假說(shuō)) 硝酸甘油 NO cGMP CGRP ? 舒張血管CGRP介導(dǎo)硝酸甘油舒血管作用的依據(jù)： 1、CGRP廣泛分布血管組織 2、CGRP強(qiáng)效舒血管作用 3、硝酸甘油不良反應(yīng)搏動(dòng)頭痛伴隨頸靜脈血中CGRP濃度升高 4、NO促進(jìn)CGRP釋放(硝酸甘油釋放NO) 5、硝酸甘油與CGRP半衰期均非常短硝酸甘油的舒血管作用（離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)）CGRP介導(dǎo)硝酸甘油舒血管作用NitroglycerinNTG+CGRP8-37NTG+CapsaicinCGRP8-37: CGRP受體阻斷劑Capsaicin(辣椒素): 感覺(jué)神經(jīng)遞質(zhì)耗竭劑硝酸甘油對(duì)血壓、CGRP的影響Methylene blue(MB)

6、:鳥(niǎo)苷環(huán)化酶抑制劑Capsaicin(辣椒素): 感覺(jué)神經(jīng)遞質(zhì)耗竭劑人體CGRP是否介導(dǎo)硝酸甘油舒血管？ 硝酸甘油 NO cGMP CGRP( )? 舒張血管線(xiàn)粒體醛脫氫酶(SNP)正常野生型純合子（n=9)，504(谷氨酸）攜帶突變等位體（n=9)，504(賴(lài)氨酸）硝酸甘油舌下含服（0.5 mg）指標(biāo)：血壓 心率 血漿CGRP濃度 淋巴細(xì)胞CGRPmRNA 表達(dá)硝酸甘油對(duì)血壓、心率的影響. ：ALDH2*1/*1 ; : ALDH2*2 ( n=9). *P0.05, #P0.05, *P12) Wu RR, Zhao JP, Jin H et JAMA. Lifestyle interve

7、ntion and metformin for treatment of antipsychotic-induced weight gain: a randomized controlled trial. JAMA 2008; 299(2):185-93. (IF28) (2008年中國(guó)百篇最具影響國(guó)際學(xué)術(shù)論文)Li H, Xie H, Liu W, Hu R, Huang B, Tan YF, Xu K, Sheng ZF, Zhou HD, Wu XP, Luo XH. A novel microRNA targeting HDAC5 regulates osteoblast differ

8、entiation in mice and contributes to primary osteoporosis in humans. J Clin Invest. 2009;119(12): 3666-77. (IF15)Wu F, Yang LY, Li YF, Ou DP, Chen DP, Fan C. Novel role for epidermal growth factor-ike domie 7 in metastasis of human hepatocellular carcinoma. Hepatology. 2009; 50(6): 1839-50. (IF10)研究

9、生獲獎(jiǎng)情況全國(guó)優(yōu)秀博士學(xué)位論文獎(jiǎng)1名(彭軍)全國(guó)優(yōu)秀博士論文提名獎(jiǎng)4人(魯蓉，周智紅，鄧盤(pán)月，姜德建)湖南省優(yōu)秀博士學(xué)位論文獎(jiǎng)7人湖南省優(yōu)秀碩士學(xué)位論文獎(jiǎng)11人注意理論成果：感性認(rèn)識(shí)上升為理性電刺激對(duì)腸系膜血管張力的影響血管受交感縮血管神經(jīng)(NE)和感覺(jué)舒血管神經(jīng)(CGRP) 兩種神經(jīng)支配,電刺激釋放NE和CGRP.2. 耗竭感覺(jué)神經(jīng)遞質(zhì)CGRP后,電刺激興奮交感神經(jīng)(NE)表現(xiàn)縮血管效應(yīng)增強(qiáng).3. 阻斷交感神經(jīng)后,電刺激興奮感覺(jué)神經(jīng)(CGRP)表現(xiàn)為舒血管效應(yīng).腸系膜血管,辣椒素耗竭感覺(jué)遞質(zhì)(CGRP)后,電刺激興奮交感神經(jīng)(NE)縮血管效應(yīng)增強(qiáng)（Li YJ , at al., Eur J

10、Pharmacol, 1992)阻斷交感神經(jīng)后,電刺激興奮感覺(jué)神經(jīng)(CGRP) 表現(xiàn)為舒血管效應(yīng)理論成果：外周血管張力是交感縮血管（NE)和感覺(jué)舒血管（ CGRP）兩種神經(jīng)活動(dòng)的凈效應(yīng).理論成果：內(nèi)源性NOS抑制物是AS形成的重要促進(jìn)物第三節(jié) 科研過(guò)程需要注意的幾個(gè)問(wèn)題1.解放思想,標(biāo)新立異 科研是探索未知,應(yīng)具有敢為人先的意識(shí)。敢于標(biāo)新立異，向權(quán)威挑戰(zhàn)，敢于提出假設(shè) 1964年，HM，Temin提出RNA可以作為模版，逆向產(chǎn)生DNA 心臟是泵血器官也是分泌器官2.抓住苗頭，逐步深入 新生物活性多肽: 生物學(xué)特性 生物學(xué)效應(yīng) 受體 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑 病理生理意義降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）與高血壓

11、： CGRP是否與高血壓發(fā)生有關(guān)？自發(fā)性高血壓大鼠與原發(fā)性高血壓患者CGRP濃度降低，在高血壓動(dòng)物，耗竭CGRP可加劇血壓升高 高血壓時(shí)血中CGRP降低原因？辣椒素受體配體（調(diào)節(jié)CGRP的合成與釋放）的轉(zhuǎn)運(yùn)體活性降低 轉(zhuǎn)運(yùn)體活性降低的原因？?jī)?nèi)源性一氧化氮合酶抑制物濃度升高 促進(jìn)內(nèi)源性CGRP合成與釋放的化合物是否能降壓作？吳茱萸次堿原發(fā)性高血壓患者血壓與CGRP變化SHR與2K1C大鼠血壓與CGRP的變化(Li D, et al., J Hypertens, 2009)SHR與2K1C大鼠DRG中，-CGRPmRNA表達(dá)的改變 （Real-Time PCR）CGRPmRNA的表達(dá)SHR與2K1

12、C大鼠血漿CGRP與AEA濃度的變化SHR，2K1C AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性變化(淋巴細(xì)胞)花生四烯酸乙醇胺(AEA)為辣椒素受體（VR1）的內(nèi)源性配體，調(diào)節(jié)CGRP釋放。SHR CGRP濃度降低是否與AEA水平有關(guān)？AEA需在AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體作用下進(jìn)入膜內(nèi)（VR1結(jié)合位點(diǎn)在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)），才能發(fā)揮作用。CGRP濃度降低是否與AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性降低有關(guān)？SHR，2K1C血漿中ADMA與NO水平變化ADMA降低AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性降低的原因（NO/ADMA）一氧化氮合酶抑制劑(ADMA)降低AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性CGRP與高血壓ADMAAEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性AEA激動(dòng)VR1CGRP合成與釋放高血壓發(fā)生發(fā)展CG

13、RP介導(dǎo)吳茱萸次堿抗高血壓連續(xù)口服吳茱萸次堿對(duì)苯酚誘導(dǎo)的高血壓大鼠血壓的影響 J Hypertens. 2004; 23: 1819-1829吳茱萸次堿的降壓作用連續(xù)口服吳茱萸次堿對(duì)CGRP水平的影響背根神經(jīng)節(jié)血漿連續(xù)口服吳茱萸次堿對(duì)背根神經(jīng)節(jié)CGRPmRNA表達(dá)的影響-CGRP (318 bp) -actin (422 bp) -CGRP (264 bp) -actin (422 bp)-CGRPmRNA-CGRPmRNA連續(xù)口服吳茱萸次堿對(duì)脊髓后角CGRP水平的影響胸段腰段吳茱萸次堿增加腸系膜上動(dòng)脈CGRP陽(yáng)性感覺(jué)神經(jīng)纖維密度3 勤奮學(xué)習(xí)，刻苦鉆研 不斷擴(kuò)大知識(shí)面，了解新進(jìn)展，善于借鑒相鄰

14、學(xué)科的先進(jìn)成果。 生理學(xué)的成果（腎素-血管緊張素），毒理學(xué)的成果(巴西蛇毒成分的研究)，開(kāi)闊了藥物化學(xué)家思路研究，研發(fā)抗高血壓藥卡托普利（ACEI） 慢性腎功能不全病人血漿一氧化氮合酶抑制物升高（解釋高血壓），引入研究動(dòng)脈粥樣硬化內(nèi)皮功能不全一氧化氮 1980年，F(xiàn)urchgot發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞舒張因子（EDRF），即一氧化氮（nitric oxide，NO）， 1998年，獲諾貝爾獎(jiǎng)。 調(diào)節(jié)血管張力 抑制血小板聚集 抑制平滑肌細(xì)胞增殖 抗氧化 NO抗動(dòng)脈粥樣硬化因子 NO生物利用降低的原因: L-精氨酸水平 L-精氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體活性 NO氧化滅活 NOS活性（輔因子） 內(nèi)源性NOS抑制物L(fēng)-精氨酸N

15、O瓜氨酸ADMANOS()內(nèi)源性一氧化氮合酶抑制物： 非對(duì)稱(chēng)二甲基精氨酸（ADMA）HNNH2CCH2CH2CH2CHH2NCOOHL-arginineHNCH3H3CNADMANNHCH3CH3SDMANHCCH2CH2CH2CHH2NCOOHNHCCH2CH2CH2CHH2NCOOHNH內(nèi)源性一氧化氮合酶抑制物促動(dòng)脈粥樣硬化形成依據(jù)：1、血管內(nèi)皮受損是AS形成的始動(dòng)環(huán)節(jié) (Ross,1976) 2、NO舒張血管，抑制血小板聚集，抑制 平滑肌細(xì)胞增殖，NO內(nèi)源性抗AS因子 3、外源性NOS抑制劑（NO合成 ）促動(dòng)脈 粥樣硬化形成工作假說(shuō)：某些致AS因素ADMA血管內(nèi)皮受損促AS形成ApoE缺

16、陷小鼠血漿中ADMA的變化(Xiao H, et al., Life Sci, 2007)A: C57BL/6J (16 W)B: C57BL/6J + ADMA (16 W)C: ApoE/ (16 W)D: ApoE/ + ADMA (16 W)E: ApoE/ (20 W).高甘油三酯病人血漿ADMA水平的變化(Yang TL, Eur J Clin Pharmacol 2006)*#ADMA與疾病動(dòng)脈粥樣硬化 (Yu XJ 1994)高血壓 (Perticone F 2005)外周動(dòng)脈閉塞性疾病 (Boger RH 1997)糖尿病 (Fard A 2000)胰島素抵抗 (Chan NN 2002)衰老 (Bode-Boger SM 2005)老年癡呆（ 阿爾茨海默?。?Abe T 2001)阻塞性呼吸暫停綜合征 (Ohike Y 2005)勃起功能障礙 (Wierzbicki AS 2006)甲狀腺功能低下 （ Hermenegildo C J 2002）4 一絲不茍,艱苦奮斗 不畏艱險(xiǎn),百折不撓,拼搏犧牲的精神 (日本學(xué)者,單個(gè)神經(jīng)細(xì)胞記錄LTP，2年間記錄6個(gè)細(xì)胞) “只有在那崎嶇的道路上不畏艱險(xiǎn)攀登的人們,才有希望達(dá)到光輝的頂點(diǎn).”5.認(rèn)真觀察,實(shí)事求是嚴(yán)肅認(rèn)真的態(tài)