病毒感染檢查方法和防治原則

1、關于病毒感染的檢查方法與防治原則第一張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 病毒感染的檢查第二張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月病毒感染的檢查檢測內容查病毒查特異性抗體 病毒顆粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶類：如逆轉錄酶 電鏡直接觀察 光鏡檢查包含體 分離培養(yǎng)第三張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月一、標本的采集與送檢原則基本與細菌相似，但應注意： 1.標本用“雙抗”或兩性霉素B處理 2.低溫保存，盡快送檢 3.血清學診斷采雙份血清第四張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月二、病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng) 細胞培養(yǎng)（cell culture） 雞胚接種（eg

2、g inoculation） 動物接種（animal inoculation）第五張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月二、病毒的分離與鑒定一般程序：標本無菌處理動物接種雞胚培養(yǎng)細胞培養(yǎng)指標陽性指標陰性 病毒鑒定 盲傳23代指標陰性病毒陰性第六張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）病毒的分離培養(yǎng) 1.細胞培養(yǎng) 單層細胞培養(yǎng)（monolayer cell culture） 分類 懸浮細胞培養(yǎng)（suspended cell culture） 原代細胞（primary cell）細胞種類 二倍體細胞（diploid cell） 傳代細胞系（continuous cell line）第七

3、張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月病毒的細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)瓶單層細胞第八張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月1.細胞培養(yǎng)(1)原代和次代細胞培養(yǎng)組織 組織塊 分散的單個細胞 單層細胞 剪碎 培養(yǎng)基(原代細胞)單層細胞(次代細胞)傳代培養(yǎng)蛋白酶 第九張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月特點：對多種病毒敏感 生長能力有限, 獲取成本高 可攜帶潛伏病毒1.細胞培養(yǎng)(1)原代和次代細胞培養(yǎng)第十張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(2)二倍體細胞培養(yǎng) 體外分裂50100代仍保持二倍體染色體數(shù)目，可用于病毒分離和疫苗生產(chǎn)。特點：對多種病毒敏感 不帶異種蛋白(人源性) 不帶病毒，無致

4、瘤潛能 可傳50代左右1.細胞培養(yǎng)第十一張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(3) 傳代細胞培養(yǎng)特點：對多種病毒敏感性高 繁殖能力高，傳代時間長 有致癌危險，不能用于疫苗生產(chǎn)1.細胞培養(yǎng)第十二張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2.雞胚培養(yǎng) 采用孵化914天的雞胚 絨毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人類皰疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity）接種部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分離 卵黃囊（yolk sac） 嗜神經(jīng)病毒 第十三張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第十四張，PPT共四十四頁，創(chuàng)

5、作于2022年6月2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低缺點：操作程序復雜第十五張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第十六張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3.動物接種 應用：尚無敏感細胞的病毒培養(yǎng) 動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 優(yōu)點：結果易觀察，可建立動物模型 缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物 體內常帶有潛伏病毒第十七張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月1病毒增殖鑒定 (1)細胞病變效應（cytopathic effect, CPE ） 細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）； 形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； 在培養(yǎng)

6、細胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。 （二）病毒的鑒定 第十八張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第十九張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落(1)細胞病變效應(cytopathic effect, CPE)第二十張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月麻疹病毒感染細胞呼吸道合胞病毒感染細胞形成多核巨細胞或稱融合細胞(1)細胞病變效應(cytopathic effect, CPE)第二十一張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月形成包涵體(inclusion body)(1)細胞病變效應(cytopathic effect, CPE)第二十

7、二張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月腮腺炎病毒感染細胞(2)紅細胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)紅細胞表面HA受體第二十三張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(3)干擾現(xiàn)象（interference）風疹病毒人胚腎細胞 病毒增殖，CPE()?？刹《救伺吣I細胞 病毒增殖，CPE()人胚腎細胞風疹病毒？?？刹《綜PE(-)風疹病毒(+) ?？刹《?-)CPE(+)風疹病毒(-) ?？刹《?+)第二十四張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(4)細胞代謝改變 細胞代謝變慢 pH變化減慢第二十五張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2.病毒形態(tài)學鑒定

8、電子顯微鏡：設備、操作復雜，應用受限光學顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒）， 對一般病毒檢測意義不大第二十六張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月3.病毒血清學鑒定 鑒定病毒種、型、亞型 (1)血凝抑制試驗（hemagglutination inhibition test）正粘病毒型與亞型鑒定 病毒雞紅細胞凝集（血凝試驗） 病毒特異性抗體雞紅細胞不凝集 （血凝抑制試驗） 第二十七張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(2)免疫標記法（FIA、EIA、RIA） 多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴散試驗(gel immuno- diffusion test) 多種病毒鑒定3.病毒血清學鑒定第二十八張

9、，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月4.病毒分子生物學鑒定抗原變異病毒基因的鑒定 核酸擴增 核酸雜交 基因芯片 基因測序第二十九張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒死病毒）2.蝕斑形成試驗 （plaque formation test） 3.50組織細胞感染量 （50 tissue culture infectious dose, TCID50）感染性病毒量第三十張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月(四) 新病毒的鑒定核酸類型的測定 理化性狀的檢測 形態(tài)學鑒定 血清學鑒定 基因測序和生物對比第三十一張，PPT共四十四頁，創(chuàng)

10、作于2022年6月三、病毒感染的血清學診斷應用：采取標本分離病毒為時已晚目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒為證實所分離的病毒的臨床意義進行血清流行病學調查等第三十二張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月1.中和試驗（neutralizing test）病毒中和抗體 病毒失去感染性 特點：特異性高，抗體維持時間長應用：人群免疫情況的調查 臨床診斷少用第三十三張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月2.補體結合試驗 （complement fixation test） 用已知病毒可溶性補體抗原檢測病人血清中相應的補體抗體 特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快 應用：近期感染指標。第三十四

11、張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時內出結果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸） 早期抗體檢測（IgM）第三十五張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）形態(tài)學檢查電鏡和免疫電鏡檢查 普通光學顯微鏡檢查 包涵體第三十六張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測 免疫標記技術2.病毒核酸檢測 核酸擴增技術 核酸雜交技術 基因芯片技術 基因測序第三十七張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）早期抗體檢測 可診斷急性感染 特異性IgM抗體：孕婦感染風疹病毒 EBV早期抗原抗體 EAV核心抗原抗體 早期抗原的抗體 EAV衣

12、殼抗原抗體第三十八張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 病毒感染的特異性預防 微生物及其代謝產(chǎn)物 生物制品 動物免疫血清（biological products） 免疫細胞 細胞因子 防治和診斷感染性疾病第三十九張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月滅活疫苗（inactivated vaccine）活疫苗（living vaccine）重組載體疫苗（recombinant carrier vaccine）亞單位疫苗（subunit vaccine） 化學提取或人工合成疫苗 重組疫苗（recombinant vaccine）核酸疫苗（nucleic acid vaccine）一、人工主動免疫常用生物制品第四十張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月二、人工被動免疫常用生物制品 免疫球蛋白 血清丙種球蛋白 細胞免疫制劑 IFN-、 細胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF 、CSF 淋巴因子激活的殺傷細胞 LAK細胞 第四十一張，PPT共四十四頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) 病毒感染的治療 核苷類藥物 非核苷類反轉錄酶抑制劑 蛋白酶抑制劑 其他抗病毒藥物 干擾素和干擾素誘生劑 中草藥 基因治