ABO血型鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作程序SOP文件

1、火華縣中醫(yī)院文件編號(hào)：LCYYYJYK_SOP_01 頁(yè)碼：第- PAGE 7 -頁(yè)，共 7 頁(yè)版本：第 1 版，第 1 次修訂生效日期：20XX0101項(xiàng)目檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科 SOP編寫(xiě)者：王醫(yī)生審核者：李醫(yī)生批準(zhǔn)者：主任時(shí)間：20XX0101時(shí)間：20XX0101時(shí)間：20XX0101ABO 血型鑒定標(biāo)準(zhǔn)操作程序文件一、目的：確保儀器正常運(yùn)轉(zhuǎn)與結(jié)果的準(zhǔn)確性，嚴(yán)格檢驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為臨床提供及時(shí)、可靠的結(jié)果報(bào)告。二、適用范圍：檢驗(yàn)科日常操作規(guī)范 三、操作人員：檢驗(yàn)科授權(quán)工作人員。測(cè)定原理根據(jù)紅細(xì)胞上有或無(wú) A 抗原或和 B 抗原，將血型分為 A 型、B 型、AB 型及 O 型 4 種?？衫眉t細(xì)胞凝集

2、試驗(yàn)，通過(guò)正、反定型準(zhǔn)確鑒定 ABO 血型。所謂正定型，是用已知抗A 和抗B 分型血清來(lái)測(cè)定紅細(xì)胞上有無(wú)相應(yīng)的 A 抗原或和 B 抗原；所謂反定型，是用已知 A 細(xì)胞和 B 細(xì)胞來(lái)測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗A 或和抗B。試劑和儀器批批檢的抗A(B 型血)、抗B(A 型血)及抗A 十 B(O 型血)分型血清。批批檢的 5 A、B 及 O 型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液，制備方法見(jiàn)本節(jié)附注；離心機(jī)，顯微鏡。標(biāo)本收集與處理 1，受檢者血清；2，枸緣酸鈉抗凝血或未稍取血，受檢者血液制成 5 紅細(xì)胞鹽水懸液使用， 制備方法見(jiàn)本節(jié)附注。3，標(biāo)本出現(xiàn)中度溶血者，為不合格標(biāo)本，不能用于檢測(cè)。操作步驟試管法取潔凈小試管(內(nèi)徑

3、 10mm60mm)3 支，分別標(biāo)明抗A、抗B 和抗A十 B，用滴管分別加抗A、抗B 和抗A 十 B 分型血清各 l 滴（約 50 ul）于試管底部，再以滴管分別加入受檢者 5紅細(xì)胞鹽水懸液 1 滴，混和。另取潔凈小試管(內(nèi)徑 10mm60mm)3 支，分別標(biāo)明 A、B 和 O 細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清 l 滴于試管底部，再分別以滴管加入 A、B 和 O 型 5試劑紅細(xì)胞懸液 l 滴，混和。立即以 1000rmin 離心 3 min。將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以內(nèi)眼觀察有無(wú)凝集(或溶血)現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見(jiàn)凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。觀察結(jié)果時(shí)既要看有無(wú)凝集，

4、更要注意凝集強(qiáng)度，此有助于A、B 亞型、類 B 或 cisAB 的發(fā)現(xiàn)。凝集強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)4 十 紅細(xì)胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3 十 紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2 十 紅細(xì)胞凝塊分散成許多小塊，見(jiàn)到游離紅細(xì)胞。1 十 肉眼可見(jiàn)大顆粒，周圍有較多游離紅細(xì)胞。土鏡下可見(jiàn)數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細(xì)胞。MF混合凝集外觀(mixed field)是指鏡下可見(jiàn)少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。一表示陰性，鏡下未見(jiàn)凝集，紅細(xì)胞均勻分布。玻片法取清潔玻片 1 張(或白瓷板 1 塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明抗-A、抗-B 和抗-A 十 B，分別用滴管滴加抗-A、抗-B 和抗-A

5、 十 B 分型血清 l 滴于標(biāo)明的方格內(nèi)，再各加受檢者 2紅細(xì)胞懸液 1 滴，混和。另取潔凈玻片一張(或白瓷板 1 塊)，用蠟筆劃成方格，標(biāo)明A 細(xì)胞、B細(xì)胞和 O 細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清 1 滴，再分別用滴管滴加 A、B和 O 型試劑紅細(xì)胞懸液 1 滴。將玻片(或白瓷板)不斷輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約 15 min，先以肉眼觀察有無(wú)凝集(或溶血)反應(yīng)；再在低倍鏡下觀察結(jié)果。結(jié)果判定ABO 血型正反定型結(jié)果分型血清+受檢者紅細(xì)胞受檢者血型受檢者血清+試劑紅細(xì)胞抗-A抗-B抗-A 十 BA 細(xì)胞B 細(xì)胞O 細(xì)胞十十A十十十B十一O十十十十十AB注：十為凝集；一為不凝集。質(zhì)量控制與

6、附注 1，分型血清必須為批批檢試劑，且在有效期內(nèi)使用；質(zhì)量性能符合要求。試劑開(kāi)封后必須貼上開(kāi)封日期、開(kāi)封人標(biāo)簽，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。試劑開(kāi)封后有效期為一周。2，試劑紅細(xì)胞以 3 個(gè)健康者同型新鮮紅細(xì)胞混和，用生理鹽水洗滌 1 次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原。或使用合格的商品診斷紅細(xì)胞。試劑紅細(xì)胞有效期：自制的為15 天，商品的為試劑有效期。試劑開(kāi)封后必須貼上開(kāi)封日期、開(kāi)封人標(biāo)簽，用畢后應(yīng)放置冰箱保存，以免細(xì)菌污染。試劑開(kāi)封后有效期為一周。3，生理鹽水啟用后，有效期為二周。4，所有試劑在開(kāi)封或使用時(shí)，必須檢查是否有變質(zhì)；凡可疑者，必須更換新的試劑進(jìn)行檢測(cè)工作。5，試管、

7、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。6，操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。7，按理 IgM 抗-A 和抗-B 與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以 4為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫 (2024)內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)， 37可使反應(yīng)減弱。8，離心時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，速度不宜過(guò)快或過(guò)慢，以防假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。9，觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。10，判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)、記錄，避免筆誤。11，對(duì)于可能存在不完全抗原的時(shí)候，應(yīng)在各反應(yīng)方加入凝聚胺試劑，以檢驗(yàn)不完全抗原的存在。12，對(duì)于可疑結(jié)果，必須更換所用的試劑，重新檢測(cè)。1

8、3，5%紅細(xì)胞懸液的配制：用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞 3 次。根據(jù)下表進(jìn)行紅細(xì)胞懸液的配制。懸液濃度（%）壓積紅細(xì)胞（滴）鹽水（滴）212ml(40)510.8ml(16)1010.4ml(8)2010.2ml(4)正反定型結(jié)果不一致的原因（一）原因：有技術(shù)性問(wèn)題或紅細(xì)胞和血清本身的問(wèn)題，常見(jiàn)者有以下幾種：1， 分型血清效價(jià)太低、親和力不強(qiáng)。如抗A 血清效價(jià)不高，可將A 亞型誤定為 O 型，AB 型誤定為 B 型。2， 紅細(xì)胞懸液過(guò)濃或過(guò)淡，抗原抗體比例不適當(dāng)，使反應(yīng)不明顯，誤判為陰性反應(yīng)。3， 受檢者紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)過(guò)少(如亞型)或抗原性減弱(見(jiàn)于白血病或惡性腫瘤：以及類 B 或 cisAB 等。

9、4，受檢者血清中蛋白紊亂(高球蛋白血癥)，或?qū)嶒?yàn)時(shí)溫度過(guò)高，常引起紅細(xì)胞呈緡錢狀排列。5，受檢者血清中缺乏應(yīng)有的抗-A 及或抗B 抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。6，各種原因引起的紅細(xì)胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時(shí)，可溶性血型物質(zhì)中和了相應(yīng)的抗體.7，由細(xì)菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。8，血清中有意外抗體，如自身抗I，常引起干擾。9，老年人血清中抗體水平大幅度下降正反定型結(jié)果不一致的解決辦法如發(fā)現(xiàn)ABO 正反定型結(jié)果不一致，先要重復(fù)作試驗(yàn)1 次。嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細(xì)心觀察和解釋試驗(yàn)結(jié)果，就可解決明顯的問(wèn)題， 對(duì)一些疑難問(wèn)題月必須進(jìn)一步研究。（二）

10、檢查步驟：1， 另從受檢者采取 l 份新鮮血液標(biāo)本這樣可以糾正因污染或搞錯(cuò)樣本造成的不符合。2，將紅細(xì)胞洗滌數(shù)次，配成 5鹽水細(xì)胞懸液，用抗A、抗B、抗Al， 抗A 十 B 及抗 H 做試驗(yàn)可以得到其它有用的信息。3，對(duì)受檢紅細(xì)胞作直接抗球蛋白試驗(yàn)，如結(jié)果呈陽(yáng)性，表示紅細(xì)胞已被抗體致敏。4，用 A1、A2、B、O 紅細(xì)胞及自身紅細(xì)胞檢查受檢血清。如果懷疑是抗I， 用 O 型(或 ABO 相合的)臍血紅細(xì)胞檢查。5，如果試驗(yàn)結(jié)果未見(jiàn)凝集，應(yīng)將細(xì)胞及血清試驗(yàn)至少在室溫和4放置30min，用顯微鏡檢查核實(shí)。6，如疑為A 抗原或 B 抗原減弱，則可將受檢紅細(xì)胞與抗A 或抗B 血清作吸收及放散試驗(yàn)以及受

11、檢者唾液作 A、B、H 血型物質(zhì)測(cè)定。后者只對(duì) 80HAB 分泌型的人有用。7，如試驗(yàn)結(jié)果紅細(xì)胞呈絹錢狀排列，加等滲鹽水l 滴，混和，往往可使絹錢現(xiàn)象消失。應(yīng)注意不應(yīng)先加鹽水 l 滴于受檢者血清中而后和紅細(xì)胞作試驗(yàn)，以免使血清中抗體被稀釋。8，如受檢者為 A 型血而疑為有類 B 抗原時(shí)，可用下列方法進(jìn)行鑒別觀察細(xì)胞與抗A 及抗B 的凝集強(qiáng)度，與抗A 的反應(yīng)要比與抗B 的反應(yīng)強(qiáng)。這種區(qū)別用玻片法作試驗(yàn)更為明顯。（2） 用受檢者紅細(xì)胞與自身血清作試驗(yàn)，血清中的抗B 不凝集自身紅細(xì)胞上的類 B 抗原。檢查唾液中是否有 A、B 物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出 A 物質(zhì)而無(wú) B物質(zhì)。核對(duì)患者的診斷，類 B 抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸