11中藥分析與鑒定3班

1、本科大蒽醌的純化工藝研究二級(jí)學(xué)院中藥學(xué)院專業(yè)中藥學(xué)（中藥分析與鑒定方向）班級(jí)2011 級(jí)（3）班學(xué)生學(xué)號(hào)1106503303指導(dǎo)教師2015 年 4 月誠(chéng) 信我，所呈交的（設(shè)計(jì)）是本人在老師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，（設(shè)計(jì)）中不包含其他人已經(jīng)或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或而使用過(guò)的材料。我承諾，（設(shè)計(jì)）中的所有內(nèi)容均真實(shí)、。（設(shè)計(jì)）作者（簽名）：年月日目錄摘要III前言1材料與儀器3材料3儀器33 方法與結(jié)果43.13.23.33.43.5大黃提取液的444供試品溶液的對(duì)照品溶液的大蒽醌含量的測(cè)定4方法學(xué)4脂的吸

2、附和解吸附特性73.6 DM301 大3.7 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn) 綜述 致謝 大蒽醌的純化工藝研究摘要：目的：確定 DM301 型大脂對(duì)大蒽醌類成分純化工藝的參數(shù)。方法：以大黃中總蒽醌的含量為指標(biāo)，研究 DM301 型大脂的富集、純化大蒽醌的吸附性能和洗脫參數(shù)。結(jié)果：DM301 型大脂對(duì)大蒽醌有良好的吸附性能。以 10g 大附樹(shù)脂為標(biāo)準(zhǔn)量，最佳純化工藝為藥液濃度 0.4g生藥材/mL=6，最大上樣量為 15-20mL，洗脫劑為 90%乙醇，流速為 2mL/min，用 90%乙醇 80mL 洗脫時(shí)可以達(dá)到良好的除雜效果。結(jié)論：通過(guò) DM301 大附樹(shù)脂富集、純化后，大蒽醌的吸附率在 70%以上，洗

3、脫率在 80%以上。蒽醌是可行的。說(shuō)明采用本法富集、純化大：DM301 型大附樹(shù)脂；大蒽醌；純化工藝Study on Purification Pros of Total Anthraquinones inRadix et Rhizoma RheiAbstract ： Objective ： To establish the technological parameters of thepurifrication pros of total anthraquinones in Radix et Riftzoma Rhei with DM301Maeroreticular Resin. Meth

4、ods：The adsorptive characteristies and elutive parametersof the pros were studied by taking the content of total anthraquinones as marker.Results：DM301 Maeroretieular Resin has good purification pros. The appropriateadsorption condition of DM301 Maeroretieular Resin was as follows：Concentrationof ch

5、emical is 0.4g/mL，6. Its sic exchange capacity was 15-20mL. then waswashedwith80mL 90 alcoholformacroreticularresin ， flowrateof2mL/min.：With DM301 Macroreticular Reso adsorb and purify，theelufive ratio of total anthraquinones in Radix et Rhizoma Rhei was over 80 and theadsorption reached over 70So

6、this pros of applying macroretieular resin toadsorb and purify total anthraqulnones in Radix et Rhizoma Rhei is feasible.Keywords：DM301 macroporous resotal anthraquinone；purification1 前言大黃屬蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.、大黃Rheum tanguticum.ex Balf.或藥用大黃Rheum officinaaill.的干燥根及根莖，性寒味苦，一。大黃具有瀉下、抗菌、抗、抗腫瘤、消炎等

7、功效1，是臨床常用中近期研究發(fā)現(xiàn)大黃具有保護(hù)大腦皮層神經(jīng)元的作用2，對(duì)治療肝性腦病療效顯著3。大黃中化學(xué)成分復(fù)雜，有蒽苷、芪苷、鞣苷等，其中蒽苷為最主要成分。大黃中羥基蒽醌衍生物總量約為25，分為游離蒽醌和結(jié)合蒽醌，包括大甲醚、蘆薈大及其苷等4。黃酸、大、大黃酚、大傳統(tǒng)分離提取大蒽醌有明膠沉淀法、醇調(diào)值法、聚酰胺法等，大黃提取的傳統(tǒng)方法存在著有效成分損失大，周期長(zhǎng)，工序多，提取率問(wèn)題。近年來(lái)，大附樹(shù)脂在中藥的提取、分離、富集方面廣泛運(yùn)用，不斷受到藥學(xué)研究者的關(guān)注。大脂是20 世紀(jì)60 年代發(fā)展起來(lái)的一種新型吸附劑，既有物理吸附作用，又因多孔狀結(jié)構(gòu)而有篩選作用5，在中藥有效成分分離提取的應(yīng)用中，

8、呈現(xiàn)出良好的發(fā)展勢(shì)頭。大脂吸附純化中藥的有效成分效果受、上樣量、洗脫劑等多方面的影響，因此大脂在純化有效成分必須尋找最佳的工藝參數(shù)。DM301 型樹(shù)脂是一種中等極性的樹(shù)脂，在分離黃酮類、生物堿、蒽醌類等成分有較為明顯的分離效果。DM301 型樹(shù)脂用于大黃中總蒽醌類物質(zhì)的純化與其工藝參數(shù)的研究卻尚未見(jiàn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)提取液、提取液濃度、最大上樣量、洗脫液濃度、洗脫流速、洗脫用量等方面的篩選出適合分離純化大蒽醌的靜態(tài)和動(dòng)態(tài)吸附工藝，從而為日后成各類劑型提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。大黃是一種多年生草本植物。我國(guó)有大黃 45 個(gè)品種和兩個(gè)亞種，但載入藥典可以藥用的只有 3 種，即正品大黃、大黃及藥用大黃的干燥根及根莖

9、。神農(nóng)本草經(jīng)中記述：大黃，味苦寒，歸胃、肝大腸經(jīng)。主下淤血、血閉寒熱、破癥、積聚、留飲宿食、蕩滌腸胃、推陳致新、通利水谷、調(diào)中化食、安合五臟。目前對(duì)大黃有效成分的藥理作用研究主要集中在蒽醌類化合物。20 世紀(jì) 80 年代以來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)中藥大黃，尤其是其有效成分的藥理作用進(jìn)行了深入研究。大黃具有瀉用，主要作用成分為蒽醌類化合物，其中以番泄苷的作用最強(qiáng)，等6認(rèn)為番泄苷水解后生成大黃酸蒽酮而起瀉用；大黃對(duì)多種細(xì)菌均有不同程度的抑制作用，7用大黃醇提片治療急性腸炎 54 例、急性細(xì)菌性痢疾 110 例，總效率 95%；大黃還可治療慢性腎衰，研究發(fā)現(xiàn)，大黃能改善氮質(zhì)血癥，影響殘余腎組織代償性肥大，降低殘

10、余腎的高代謝狀態(tài)，糾正脂代謝紊亂，減少蛋白尿，抑制腎小球系膜細(xì)胞的增值8；有研究表明大黃的不同成分對(duì)細(xì)胞內(nèi)游離鈣水平的影響不同，直接提示了大黃對(duì)肝細(xì)胞的功能具有多種調(diào)節(jié)作用9；大黃能使損傷局部的收縮，通透性降低，從而使時(shí)間縮短10，達(dá)到止血的效果；大黃具有清熱下火的作用，其作用機(jī)理為：大黃家兔第三腦室灌流液中 PGE 含量，影響中樞環(huán)核苷酸的水平，可以降低從而達(dá)到降溫作用11，夏氏12應(yīng)用大黃治療 l7 例急性胰腺炎高熱患者，均等13利用實(shí)驗(yàn)得到大黃酸可顯著抑制巨噬細(xì)胞于 3-7d 體溫恢復(fù)正常；內(nèi)B4、C4 的生物，因此認(rèn)為大黃酸顯著影響巨噬細(xì)胞脂類炎性介質(zhì)活化過(guò)程，可能是大黃的抗炎作用機(jī)制

11、之一；此外，大黃還具有抗腫瘤作用，主要通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞的增生、促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞色素 P450(CYP1A1)和抗突變作用，以及抑制 N-乙酰轉(zhuǎn)移酶的活性實(shí)現(xiàn)的；大大量?？纱龠M(jìn) TNF-A 的，提示大也能抑制炎癥反應(yīng)中的 NO 的，且大和對(duì)機(jī)體的免疫功能，可能具有雙向調(diào)節(jié)作用傳統(tǒng)的純化大蒽醌方法有明膠沉淀法16、醇調(diào)值法17、聚酰胺法18，這三種方法主要用來(lái)除去大黃中的鞣質(zhì)，但是不能達(dá)到很好的分離、富集作用。近年來(lái)利用大脂對(duì)大黃蒽醌類成分進(jìn)行純化富集可達(dá)到良好的效果。大脂是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來(lái)的一種新型吸附劑，既有物理吸附作用，又因多孔狀結(jié)構(gòu)而有篩選作用。在中藥有效成分分離提取的應(yīng)用中

12、，呈現(xiàn)出良好的發(fā)展勢(shì)頭19。盛等20用大脂吸附法，使總蒽醌的含量達(dá)到50以上，收率較高。等21以大蒽醌的提取率及洗脫率為指標(biāo)，大黃的提取條件及大附樹(shù)脂富集、純化大蒽醌的吸附性能和洗脫參數(shù)。通過(guò)大附樹(shù)脂等22比較蒽醌的吸附富集與純化，用70%乙醇洗脫，總蒽醌的洗脫收率在80以上。了D301、AB-8、X-5、NKA-2、H1020型號(hào)的5種大脂對(duì)大為指標(biāo)，結(jié)果D301樹(shù)脂對(duì)大性能；以大蒽醌中的代表成分大蒽醌的吸附性能最佳。黃園等23在研究大蒽醌純化工藝時(shí)，采用了4種方法(明膠沉淀法、醇調(diào)值法、聚酰胺法以及大附樹(shù)脂法)對(duì)大黃提取液富集效等24以果進(jìn)行研究，結(jié)果表明大脂對(duì)大蒽醌的富集效果最好。一個(gè)含

13、有生物堿、蒽醌、皂苷等由、大黃、等藥材組成的中藥復(fù)方為樣品，采用4種型號(hào)(LD605，F(xiàn)95-34，F(xiàn)95-36，F(xiàn)95-37型)大脂進(jìn)行吸附純化工藝和特性研究。結(jié)果表明，上柱藥液與上柱體積比以LD605型最高，可達(dá)10：1，其余3種樹(shù)脂體積比僅為L(zhǎng)D605型的80-90。對(duì)比4種樹(shù)脂的比上柱量以可溶性浸出物計(jì)，以大蒽醌計(jì)，LD605型樹(shù)脂最高。群等25以D101型大孔吸附樹(shù)脂分離大黃中結(jié)合型蒽醌提取物，加樣吸附1h，以足夠量水沖洗吸附柱，流速約lmL/min，至洗脫液幾乎無(wú)色，改用50的乙醇液沖洗，采用比色法總提取物中結(jié)合型蒽醌類物質(zhì)的含量，總收率87.6。2 材料與儀器2.1 材料大黃飲片

14、（致信藥業(yè)，經(jīng)廣州中大學(xué)中藥鑒定教研室教授鑒定）；1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào) 0829-9702）；DM301 大脂（市海光化工），氯仿、甲醇、硫酸、氫氧化鈉、95%乙醇均購(gòu)自化學(xué)試劑廠，均為分析純。2.2 儀器紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(Spectronic GenesysTM2)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 RE-2000（上生化儀器廠）；TC15 套式恒溫器（海寧市新華醫(yī)療器械廠）；遠(yuǎn)紅外輻射干燥箱（南通科學(xué)儀器廠）；三角牌電爐（中民制造）；HHS 數(shù)顯恒溫水浴鍋；LIBROR AEG-220（斯：0.01mg）；超聲儀 CQ200（：0.1mg）、BP211D（德國(guó)賽多利音波聲電

15、科技公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 RE-2000生化儀器廠）；低溫循環(huán)水真空泵 DLS2-（鞏義予華儀器（公司）3 方法與結(jié)果3.1 大黃提取液的取過(guò) 10 目篩大黃藥材粉末約 40g，稱定，加入 12 倍量的 60%乙醇，加熱回流提取 3 次，每次 30min，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至無(wú)乙醇味，轉(zhuǎn)移至 100mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，制成 0.4g(相當(dāng)于原藥材)/mL 的大黃提取液。3.2 供試品溶液的精密移取大黃提取液 10mL 于 100mL 圓底燒瓶中，加 2.5mol/L 硫酸溶液10mL 和氯仿 10mL，水浴加熱回流水解 1h，放冷至室溫，將溶液移至分液漏斗，回收氯仿層，酸水層用氯仿洗至

16、氯仿層不顯黃色，合并氯仿液，用水洗氯仿液至中性，氯仿液轉(zhuǎn)移至 250mL 圓底燒瓶中，減壓回收至干，殘?jiān)?0.5%醋酸鎂-甲醇溶液溶解并定容至 10mL，濾過(guò)，取續(xù)濾液 1mL 置 10mL 容量瓶中，用 0.5%醋酸鎂-甲醇溶液稀釋至刻度，即得。3.3 對(duì)照品溶液的精密稱取 1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品 10.48mg，用氯仿溶解并定容為 100mL 的對(duì)照品溶液。3.4 大蒽醌含量的測(cè)定以 0.5%醋酸鎂-甲醇溶液作為空白對(duì)照，在 510nm 處測(cè)溶液吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算總蒽醌的含量。3.5 方法學(xué)3.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制將對(duì)照品溶液在 400700nm 范圍內(nèi)掃描測(cè)定吸收光譜，結(jié)

17、果在 510nm 處有最大的吸收峰，如下圖 1 所示，故選取 510nm 為檢測(cè)波長(zhǎng)。精密移取對(duì)照品溶液 0.2，0.6，1，2，3mL 于 10mL 容量瓶中，揮去氯仿，加 0.5%醋酸鎂-甲醇溶液溶解并定容至 10mL，充分振搖后以 0.5%醋酸鎂-甲醇溶液做空白對(duì)照，確定 510nm 處為檢測(cè)波長(zhǎng)。圖 1 對(duì)照品 UV 圖譜得出大蒽醌質(zhì)量濃度與吸光度間的關(guān)系如表 1，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 2，回歸方程為 y=44.405x+0.0379，相關(guān)系數(shù) r=0.9998表 1 大蒽醌質(zhì)量濃度與吸光度關(guān)系3.5.2 儀器精密度實(shí)驗(yàn)取同一份供試品溶液，以 0.5%醋酸鎂-甲醇溶液作為空白對(duì)照，在 510n

18、m 處連續(xù)測(cè)定吸光度 6 次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD。結(jié)果如下表所示：表 2儀器精密度實(shí)驗(yàn)吸光度 A10.37620.37630.37840.37750.37760.377結(jié)果 RSD=0.20%，表明儀器的精密性良好。3.5.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)各取 0.4g 生藥材/mL 的大黃提取液 0.5mL，按照供試品方法在相同條件下供試品 6 份，并測(cè)其吸光度，計(jì)算總蒽醌的含量，結(jié)果如下表所示。表 3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)吸光度（A）含量（mg/g)11.2491.363821.2481.362531.2161.326541.2581.373851.2271.338961.2351.3479平均值1.2391.

19、3522RSD(%)2.89由結(jié)果可知：RSD=2.89%，重復(fù)性良好，大黃中總蒽醌的含量為 1.3522mg/g。3.5.4 加樣回收實(shí)驗(yàn)取大黃提取液 0.5mL6 份，各加入 2.5mL1，8-二羥基蒽醌對(duì)照品溶液，按照3 供試品示：方法和含量測(cè)定測(cè)定方法，測(cè)得回收率和 RSD 值，結(jié)果如下表所表 4 加樣回收實(shí)驗(yàn)加入量（mg)回收量（mg)回收率（%）10.2620.18670.9920.2620.19574.4330.2620.17767.5640.2620.16462.6050.2620.15960.6960.2620.15559.160.2620.17365.90平均值RSD(%)

20、9.22由結(jié)果可知，加樣回收實(shí)驗(yàn)的回收率比較低，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差也比較大，原因主要在于操作過(guò)程中尤其是萃取過(guò)程蒽醌的損失。3.6 DM301 大脂的吸附和解吸附特性3.6.1 大脂的預(yù)處理新購(gòu)的大脂用食用乙醇浸泡 24h，裝色譜柱，先用食用乙醇洗柱至洗脫液加水不出現(xiàn)白色渾濁，接著用去離子水洗至洗脫液無(wú)醇味。備用。3.6.2 吸附量和吸附率的計(jì)算吸附量= （母液濃度-濾液濃度）x 溶液體積 干樹(shù)脂量（母液濃度-濾液濃度）吸附率=x 100%母液濃度3.6.3對(duì) DM301 大脂靜態(tài)交換吸附大黃提取液的影響取大黃提取液 100mL，平均分為 4 份，每份 25mL，用 2mol/L NaOH 溶液調(diào)成

21、6，7，8，9。精密稱取 1.5g 吸干表面水分的 DM301 型大脂，置于 50mL三角瓶中，各加入 15mL 上述調(diào)6，7，8，9 大黃提取液，放置 24 小時(shí)，不時(shí)振搖，濾過(guò)，分別吸取濾液 1mL，按要求供試品溶液。分別測(cè)定濾液的吸光度和吸附前大黃提取液的吸光度，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線公式轉(zhuǎn)化為蒽醌濃度按照下式計(jì)算吸附量和吸附率，從而提取液對(duì) DM301 大脂吸附總蒽醌的影響，結(jié)果如下圖表所示：表 5提取液對(duì) DM301 大脂吸附能力影響吸附率吸附量(mg/g)667.59%0.8552758.95%0.8127854.39%0.7038936.11%0.28173.6.4 上樣液濃度的確定各取約

22、10gDM301大脂裝柱，加入15mL生藥材濃度為0.1g/mL、0.2g/mL、0.3g/mL、0.4g/mL、0.5g/mL大黃提取液，調(diào)節(jié)流速為1mL/min，分別收集流出液。定容至100mL，取5mL進(jìn)行含量測(cè)定。不同濃度提取液被DM301吸附的總蒽醌吸附量和變化如表6和圖4所示：表6 不同濃度提取液對(duì)DM301樹(shù)脂吸附的影響取 1mL 進(jìn)行總蒽醌含量測(cè)定。各流出段的吸光度和總蒽醌含量如表 7 所示，流出段總蒽醌含量變化情況表 7不同流出段的總蒽醌含量吸光度（A）相當(dāng)于毫升數(shù)總蒽醌含量（mg)12345678910111213141516171819200.3290.3300.3330

23、.4150.4600.4690.4770.4900.5090.5290.5570.5800.5880.5930.6040.6210.6350.6360.6380.63751015202530354045505560657075808590951000.36620.36730.37070.46300.51370.52380.53280.54750.56890.59140.62300.64880.65780.66350.67580.69500.71070.71190.71410.7141由圖 3 可知，當(dāng)加入 15-20mL 大黃提取液時(shí)，流出總蒽醌的濃度有一個(gè)較大的轉(zhuǎn)折，即最大上樣量為 15-2

24、0mL 大黃提取液/10g 大脂，每 1.0gDM301大附樹(shù)脂可處理 1.5-2mL 的物料，約為 0.6-0.8g 物料。3.6.6 不同乙醇含量對(duì)蒽醌類成分動(dòng)態(tài)洗脫率的影響各取10g以交換吸附蒽醌類成分的大脂裝柱，先用水洗脫洗至洗脫液接近無(wú)色，再分別用250mL30、45、60、75、90的乙醇進(jìn)行洗脫，按 1mL/min的流速進(jìn)行洗脫，分別收集洗脫液，定容為100mL，取2mL進(jìn)行含量測(cè)定。洗脫蒽醌含量和洗脫液含醇量關(guān)系如表8和圖6所示：表8 不同含醇量洗脫液洗脫能力的影響吸光度（A）洗脫蒽醌量（mg)洗脫劑含醇量30%0.1923.4745%0.2705.2360%0.2945.77

25、75%0.3236.4290%0.49910.383.6.7 洗脫流速的確定各取10g以交換吸附蒽醌類成分的大脂裝柱，先用水洗至洗脫液接近無(wú)色，用150mL90%乙醇，調(diào)節(jié)流速分別為0.5mL/min 、0.75mL/min 、1mL/min、1.25mL/min、1.5mL/min進(jìn)行洗脫。分別收集洗脫液，揮去乙醇，定容為50mL，取2mL進(jìn)行含量測(cè)定，從而脫量關(guān)系如表9和圖7所示：洗脫流速對(duì)洗脫能力的影響，流速和總蒽醌的洗表9 流速對(duì)洗脫能力的影響共收取 13 份，揮去乙醇，定容至 10mL，進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果如表 10 所示，洗脫曲線如圖 8 所示：表10洗脫液用量的確定洗脫液體積（mL

26、）吸光度洗脫液中蒽醌量（mg)1020304050607080901001101201301.0171.3001.1200.8730.7750.6440.4020.2060.1470.0930.0790.0560.0510.44930.57700.49590.38470.34050.28130.17260.08420.05740.03630.03080.02190.0199用 80mL 的 90%乙醇，流速 20d/min 進(jìn)行洗脫，收取洗脫液，揮去乙醇后，定容成 25mL，計(jì)算吸附率，解吸附率，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD，結(jié)果如表 11 所示：表 11 按照優(yōu)化條件驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)吸附量（mg）吸附率（%

27、）洗脫量（mg）解吸附率（%）11.403475.451.137881.0821.324671.211.075981.2231.375373.941.109780.69RSD（%）2.90.34從上表中可以看出，DM301 樹(shù)脂分離純化大蒽醌的工藝穩(wěn)定可行。4大附樹(shù)脂是一類不含離子交換基團(tuán)的交聯(lián)聚合物，由于力及氫鍵的作用而具有吸附性，還因具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和很高的比表面積而具有篩選性能。因此，大附樹(shù)脂在中藥的提取、分離、富集方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值，但對(duì)于不同型號(hào)的大附樹(shù)脂，其樹(shù)脂本身的極性、孔徑、比表面積、孔容以及上柱溶液的濃度、體積、值、化學(xué)成分的性質(zhì)等均影響其分離、富集效果。同時(shí)，其解吸還受到洗

28、脫劑的種類、濃度、體積、程序、流速的影響。本實(shí)驗(yàn)了DM301型大脂對(duì)大蒽醌類成分吸附純化的工藝，從靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩個(gè)方面進(jìn)行，靜態(tài)交換吸附主要了溶液對(duì)吸附能力的影響；動(dòng)態(tài)交換吸附則從上樣液的濃度、最大上樣量，洗脫劑的含醇量、洗脫流速、洗脫液的用量進(jìn)行，從而最佳的純化工藝。由于蒽醌類物質(zhì)多含有酚羥基，可作為良好的氫鍵供體，有利于極性樹(shù)脂的吸附。DM301樹(shù)脂是乳白色不透明球狀顆粒，是苯乙烯型中極性共聚體，適用于具有一定弱極性和極性的有機(jī)化合物，較大的孔徑，這表明DM301型樹(shù)脂對(duì)含有酚羥基的蒽醌類物質(zhì)具有較高的富集能力。本實(shí)驗(yàn)研究初步確定DM301大附樹(shù)脂對(duì)大蒽醌類物質(zhì)純化條件為：上樣大黃提取溶液的

29、濃度為0.4g生藥材/mL，6，最大上樣量為1.5-2mL/g大脂，洗脫時(shí)先用水洗至流出液接近無(wú)色后，用90%乙醇80mL進(jìn)行洗脫，流速1mL/mL。經(jīng)3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)后，證明了該工藝穩(wěn)定可行。本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)于每個(gè)研究的條件均進(jìn)行平行操作2次，因此得到的條件結(jié)果穩(wěn)定可靠，消除了環(huán)境條件、儀器等的影響。加樣回收實(shí)驗(yàn)不能得到滿意的結(jié)果，這有可能是實(shí)驗(yàn)操作中不夠謹(jǐn)慎，尤其是萃取的難度帶來(lái)的，最后驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)時(shí)，制成干膏對(duì)于生產(chǎn)更具有實(shí)際意義，但是蒽醌在過(guò)高的溫度下也容易分解破壞。參考文獻(xiàn)1常用中藥成分與藥理手冊(cè)M227-228：中國(guó)科技，1994：2馬，等大、川芹嗪對(duì)中分子物質(zhì)損傷人腦大腦皮層神經(jīng)元影響的

30、實(shí)驗(yàn)研究J中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1999，1(1)：39-4134應(yīng)用大黃治療肝性腦病J中醫(yī)雜志，2004，26(2)：17-20，等大黃注射液的及含量測(cè)定J中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，1994，14(8)：377-3785屠鵬飛，大附樹(shù)脂在中藥新藥研究和生產(chǎn)中的應(yīng)用J世界科學(xué)技術(shù)：中現(xiàn)代化，2004，6(3)：22-296，中.世紀(jì)之交：現(xiàn)代中藥藥理學(xué)的回顧與展望J中周金黃，國(guó)藥理學(xué)會(huì)通訊，1999，16(3)：627錢尚統(tǒng)單味大黃醇提片治療急性腸炎及痢疾的療效觀察J中成藥，1989，11(9)：23-2478，大黃延緩慢性腎功能衰竭機(jī)制的研究進(jìn)展J中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，l995，l5(8)：5069，大黃番瀉

31、苷和大黃多糖對(duì)培鼠肝細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度的影響J中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜l995，l5(7)：4l9王鴻利大黃有效單體止凝血機(jī)理的臨床研究J中西醫(yī)結(jié)合雜志，1985，(9)：555-557生、制大黃止血效果比較J中藥材，l988，l1(6)：38大黃治療急性胰腺炎17例J中西醫(yī)結(jié)合雜志，l988，8(4)：20910111213，等大黃酸抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞炎性介質(zhì)活化的作用機(jī)理J中醫(yī)，2001，18(1)：35-36，等大黃對(duì)大鼠腸缺血再灌注致肺損傷中磷脂14李新字，張，酶A2的影響J中國(guó)急救醫(yī)學(xué)，2006，20(6)：324-32615，翁福海大，對(duì)內(nèi)毒素刺激下的大鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNF2A及NO的影響

32、J醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào)，200l，7(2)：l89-l9116當(dāng)歸對(duì)大黃注射液中總葸醌含量的影響J中13(5)：58-59研究，1997，17，等大黃注射液的及含量測(cè)定J中國(guó)醫(yī)，院藥學(xué)雜志，1994，14(8)：377-37818，等大黃注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究J中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，1998，4(2)：41-4219，王興文大附樹(shù)脂在中藥有效成分分離純化中的研究進(jìn)展J云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，26(3)：4320盛，潭力大黃游離蒽醌的與純化J中草藥，1999，31 (7)：50821大蒽醌提取與純化工藝的研究J國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2005，16(8)：756XU Han-lin，CHEN Jun，SHAO Ji-zhen，et

33、 a1Study on separaion and purification of anthr- aquinones in Radix Et Rhizoma Rhei by D301maeroporous resinJZhongguo Zhong Yao Za Zhi2006；31 (14)：l163-11652223蒽醌純化工藝研究J中成藥，2003，黃園，等大25 (10)：783，24脂吸附純化中藥復(fù)方特性研究J中，等大國(guó)中藥雜志，2006，31(15)：1237-123925群，等大附樹(shù)脂法純化大黃中結(jié)合型蒽醌總提取物的研究J中國(guó)現(xiàn)代雜志，2006，8(4)：104-10526，李陽(yáng)春

34、，屠鵬飛，等不同型號(hào)大脂對(duì)大蒽醌吸附的研J中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，7(4)：20-22綜述大附樹(shù)脂在中藥研究和生產(chǎn)中的應(yīng)用進(jìn)展大附樹(shù)脂 (以下簡(jiǎn)稱大脂)是 20 世紀(jì) 60 年代發(fā)展起來(lái)的一種新型吸附劑。它是一類不含交換基團(tuán)且具有大孔結(jié)構(gòu)的離分子材料。它具有很好的大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和較大的比表面積，通過(guò)物理吸附從水溶液中有選擇地吸附有機(jī)物。自問(wèn)世以來(lái)，大脂已廣泛應(yīng)用于環(huán)保、食品、等領(lǐng)域。尤其在中藥有效成分分離純化的應(yīng)用中，更是呈現(xiàn)出良好的發(fā)展勢(shì)頭。由于它的應(yīng)用時(shí)間較短，基礎(chǔ)研究較薄弱，許多規(guī)律還不成熟。筆者就十年來(lái)大附樹(shù)脂的相關(guān)基礎(chǔ)和它在中藥有效成分分離純化中的研究作一回顧，以期為他人的研究提供參考

35、 。1 特性及分離原理大脂一般為白色球形顆粒狀，粒度多為 2060 目，通常分為非極性和中極性兩類。物理化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及。對(duì)有機(jī)物選擇性較好，不受無(wú)機(jī)鹽類和強(qiáng)離子、低分子化合物存在的影響。大脂為吸附性和篩選性原理相結(jié)合的分離材料，與離子交換樹(shù)脂的分離原理不同1。它本身具有的吸附性，是由于分子間力和產(chǎn)生氫鍵的結(jié)果，篩選性原理是由于其本身的多 孔性結(jié)構(gòu)決定。正因?yàn)橛羞@些特性，才使得有機(jī)化合物尤其是水溶性化合物的分離純化得以大大簡(jiǎn)化。從顯微形狀上看，大脂包含有許多具有微觀小球組成的網(wǎng)狀孔穴結(jié)構(gòu)，這些球體的，多為苯乙烯型和 2-甲基丙烯酸脂型，前者為非極性樹(shù)脂，后者為中極性樹(shù)脂。大脂的“孔

36、徑”是指微觀小球之間的平均距離，其“表面積”是指微觀小球表面積的總和 ( m2 g)， 由于吸附性和篩選性原理，有機(jī)化合物根據(jù)吸附力的不同及分子量的大小，在大脂上經(jīng)一定的溶劑洗脫而分開(kāi)。大脂根據(jù)孔徑、比表面積及類型被分為許多型號(hào)，在應(yīng)用中，可根據(jù)實(shí)際要求及要分離的化合物加以選擇。文獻(xiàn)中已報(bào)導(dǎo)的大脂型號(hào)有：大學(xué)生產(chǎn)的 D2、D6 、D8、DS2、DM2、D101 型；XAD-1 型 、XAD-2 型 、XAD-3 型、XAD- 4 型 、XAD -5 型、XAD-6 型、XAD-7 型、XAD -8 型；HP -20 型 、HP -30 型、HP -40 型、SIP 系列；HPD 系列：CAD-

37、40型；XAD-4 型；DA- 201 型等。2 確定分離條件在了解大脂結(jié)構(gòu)及分離原理的基礎(chǔ)上，必須根據(jù)化合物的結(jié)構(gòu)特征來(lái)確定分離條件，才能取得預(yù)期的效果。首先要明確分離化合物分子體積的大小，如多糖類、皂甙類等，他們分子體積相差明顯，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)或查閱文獻(xiàn)來(lái)選用相應(yīng)孔徑的樹(shù)脂材料；其次，要知道分子中是否含有酚羥基、羧基或堿性氮原子由此來(lái)確定樹(shù)脂的型號(hào)及分離條件。但是要取得滿意的分離效果，還需注意以下幾方面的的影響：分子極性大小分子極性的大小直接影響分離效果。極性較大的化合物一般適于在中極性的樹(shù)脂上分離，而極性較小的化合物則適于在非極性的(如羥基、羧基等)樹(shù)脂上分離。極性大小是個(gè)相對(duì)概念，要根據(jù)分

38、子中極性與非極性基團(tuán)(如烷基、苯環(huán)、環(huán)烷母核等)的數(shù)量和大小來(lái)決定。對(duì)于未知化合物，可通過(guò)一定的預(yù)試驗(yàn)及 TLC 、PC 而大致確定 。2.1 分子體積在一定條件下，化合物體積越大，吸附力越強(qiáng)，如堿性紅霉素、等，能被非極性大脂很好地吸附，這與大分子體積憎水型增大有關(guān)。這一點(diǎn)與凝膠滲透層析恰好相反，這是由于大脂同時(shí)存在的吸附性所致。另一方面，分子體積的大小是選擇型號(hào)的主要之一。分子體積較大的化合物選擇較大孔徑的樹(shù)脂，否則，將直接影響到分離的效果。但對(duì)于中極性大脂來(lái)說(shuō)，被分離化合物分子上能形成氫鍵的基團(tuán)越多，在相同條件下吸附力越強(qiáng)。所以對(duì)某一化合物的吸附力強(qiáng)弱最終取決于上述的綜和效應(yīng)結(jié)果。2.2值

39、上樣藥液值對(duì)化合物的分離效果。根據(jù)化合物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)靈活改變?nèi)芤旱闹?，可使提純工作取得理想效果。一般情況下，酸性化合物在適當(dāng)酸性溶液中充分吸附，堿性化合物則在適當(dāng)堿性條件下被較好地吸附(特殊要求例外，如大多數(shù)化合物被吸附的情況下，可改變值，是形成較強(qiáng)的離子型化合物，而順著溶液泄漏出來(lái)，達(dá)到提純目的，中性化合物可在大約中性的條件下被吸附。2.3 樹(shù)脂柱的化合物經(jīng)樹(shù)脂柱的吸附后，在樹(shù)脂表面或還殘留著許多非極性成分，或吸附性雜質(zhì)成分，這些雜質(zhì)必須在過(guò)程中盡量洗除。非吸附性成分一般用水即可洗除，而吸附性雜質(zhì)可根據(jù)情況用酸液或堿液除去( 0.1mol /LNaOH 或HCl)， 經(jīng)可使許多雜質(zhì)除去。一般情

40、況下，沖洗至無(wú)色即可。2.4 洗脫液的選擇洗脫液可使用甲醇、乙醇、乙酸乙脂，根據(jù)吸附力強(qiáng)弱選用不同的吸脫劑及濃度。對(duì)非極性大脂，根據(jù)作者經(jīng)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)分析，則用極性較大的溶劑較為合適。為達(dá)到滿意的效果，可設(shè)計(jì)幾種不同的濃度洗脫，再確定最佳的洗脫液濃度。在實(shí)際工作中，甲醇 、乙醇、應(yīng)用較多。洗脫速度一般控制在 0. 5 5mL cm2min 為好。3 應(yīng)用概況3.1 應(yīng)用樹(shù)脂分離純化的中藥成分類型2近 10 年來(lái)，大脂用中藥成分分離純化的逐年遞增。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，中用大脂分離純化的成分有 27 種，見(jiàn)表 1。曾公開(kāi)的表1用大脂分離純化的部分中藥成分名稱成分類型數(shù)量成分名稱人參總皂甙，酸，三七總皂甙

41、，絞股藍(lán)總皂甙，皂甙10蒺藜總皂甙，桔梗總皂苷，總皂甙，刺玫果總皂甙，皂甙，西洋參花皂甙黃酮4銀杏葉黃酮，葛根黃酮，橙批甙，蕎麥蘆丁川烏、 草烏總生物堿，喜樹(shù)堿，川芎提取物(含川芎嗪及阿魏酸)銀杏內(nèi)脂及白果內(nèi)脂，丹參總酚酸，茶多酚， 紫草寧，生物堿4其他9白芍總甙，赤芍總苷，蒽醌色素，膽紅素，大黃游離注：為近 10年來(lái)國(guó)內(nèi)公開(kāi)上的資料從表 1可以看出，大脂目前的應(yīng)用范圍主要集中于皂甙、黃酮、生物堿及其他具有一定極性的化合物成分。自大脂問(wèn)世至 90 年代，大脂用于中藥成分分離純化的研究已取得一定進(jìn)展。1979 年中國(guó)醫(yī)學(xué)藥物研究所植化室3大脂可用于三顆針生物堿，赤芍甙，天麻甙，薄蓋靈芝中等4總結(jié)

42、過(guò) 1990 年以前大尿嘧啶與尿嘧啶核苷的分離脂在中藥成分分離純化中的應(yīng)用情況，并認(rèn)為生物堿、茶葉生物堿、莨宕堿、山梗菜堿、長(zhǎng)春胺、番爵床、石蒜堿、堿、豬毛菜堿、顛茄堿、小檗堿、烏頭堿、山楂黃酮等都可用大脂或用大脂與離子交換樹(shù)脂結(jié)合進(jìn)行分離 。3.2 大脂在中藥化學(xué)成分分離純化中的應(yīng)用情況曾用大附樹(shù)脂法測(cè)定三七及其制劑冠心寧總皂甙。實(shí)驗(yàn)證明：D-型大附樹(shù)脂對(duì)三七、人參三萜皂甙在水溶液中不僅吸附快，解吸也快，而且吸附容量相當(dāng)可觀，方法簡(jiǎn)便有效，用于分離純化中藥中皂甙成分有一定價(jià)值5。也有人應(yīng)用 4 種不同型號(hào)的大脂法提取甜菊甙，均獲得較好的結(jié)果。其中Amberlite XDA -4 型為最好，其

43、吸附量為 6. 14%， 并認(rèn)為此方法簡(jiǎn)便，結(jié)晶純度高，對(duì)改進(jìn)生產(chǎn)工藝有一定作用6。有用 D101 型非極性樹(shù)脂作為吸附劑，提取甜菊總甙，粗品回收率在 8%左右，精品回收率在 3%左右。其法操作簡(jiǎn)單，再生方便，得率恒定，成品質(zhì)量穩(wěn)定7。也有采用 D-型吸附樹(shù)脂分離比色法測(cè)定甜葉菊甜葉菊甙的含量。用本法與 HPLC 法比較，兩者結(jié)果相近，故本法準(zhǔn)確、可靠8。用大附樹(shù)脂比色法測(cè)定氣血注射液、生脈注射液、益氣和血沖劑等復(fù)方制劑中人參皂甙的含量。此法重現(xiàn)性好，便于測(cè)定復(fù)方制劑中人參皂甙的含量9 。在用大附樹(shù)脂提取刺玫果皂甙的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)用水洗脫大脂柱上刺玫果的皂甙是一個(gè)更好的方法。優(yōu)點(diǎn)是：不用有機(jī)溶媒

44、，皂甙中雜質(zhì)少，其吸附規(guī)律是在水溶液中，對(duì)極性大的吸附力小，對(duì)極性小的吸附力大10 。等利用大附樹(shù)脂法，除去西洋參精口服液中的蔗糖、蜂蜜等干擾，用薄層掃描法測(cè)定人參皂甙含量11 。有用大附樹(shù)脂法提取精制三七總皂甙，提取率在 88%以上，并能除去糖類等水溶性雜質(zhì)及大部分脂溶性雜質(zhì)，降低了提取物的吸潮性，色澤好，同時(shí)純度高，質(zhì)量穩(wěn)定12 。附樹(shù)脂 DA 201 型提取分離逐瘀化痰湯中人參總皂等用大甙，簡(jiǎn)便迅速，三份樣品同時(shí)操作，半天即可完成。吸附柱用大約 100mL 水洗后，即可重復(fù)上樣。本法準(zhǔn)確可靠，加樣回收率可達(dá) 99. 4%。避免了以往的13現(xiàn)象嚴(yán)重給定量分離帶來(lái)的。李義俠等用 D101 大

45、附樹(shù)脂法，將西洋參莖葉粗總皂甙，進(jìn)行常水洗滌，80%正丁醇洗脫，粗制皂甙，其含量在 90%左右14。等用 DA201 型大附樹(shù)脂測(cè)定三七蜂王漿中三七皂甙及其制劑中總皂甙的含量15 。等采用 DA201 型大附樹(shù)脂分離白芍總甙，收率為 1. 5%，且具有操作簡(jiǎn)便，樹(shù)脂再生容易，得率恒定，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定等特點(diǎn)16。等將大附樹(shù)脂法用于絞股藍(lán)皂甙的分離提取，發(fā)現(xiàn)在用堿液沖洗柱子時(shí)，絞膠藍(lán)皂甙能很好地吸附于柱子上，而用 60%乙醇沖洗柱子時(shí)，則很快解吸附，而 30mL即能將絞股藍(lán)皂甙全部洗脫下來(lái)17。等用樹(shù)脂分離比色法測(cè)定三七總皂甙含量，同時(shí)對(duì)三七全株不同生長(zhǎng)部位、不同規(guī)格、不同產(chǎn)地的 22 個(gè)樣品進(jìn)行三

46、七總皂甙的含量測(cè)定18。鄭芙蓉等用大附樹(shù)脂一比色法了絞股藍(lán)藥材及合劑中絞股藍(lán)皂甙的含量。該實(shí)驗(yàn)證明：本制劑不需要醇沉，既保持傳統(tǒng)的中理論特色，又最大限度地保持了其有效成分，工藝簡(jiǎn)單，且不含蔗糖19。等對(duì)絞股藍(lán)原漿與口服液總皂甙含量測(cè)定，用正丁醇提取法與大附樹(shù)脂分離法作了比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：原漿中的總皂甙含量測(cè)定兩種方法均可使用，但大脂正丁醇法優(yōu)越，特別是對(duì)絞股藍(lán)口服液總皂甙的含量測(cè)定，大脂法變異小，數(shù)據(jù)精確，操作簡(jiǎn)便20。等用大脂對(duì)三七的總皂甙進(jìn)行了分離純化，工藝流程已基本成熟并進(jìn)入日處理莖葉 40kg 的中試階段，所得三七葉甙含量達(dá) 95%以上，提取率 6%以上21。3.3 中藥復(fù)方的純化近

47、年來(lái)，有人嘗試將大脂用于中藥復(fù)方的精制，已取得了一些成績(jī)。鐘國(guó)華用大附樹(shù)脂法對(duì)龜鹿補(bǔ)腎液的生產(chǎn)工藝進(jìn)行了改進(jìn)研究。由原來(lái)的酒沉法改為樹(shù)脂法，對(duì)兩種工藝試制的口服液成品，通過(guò)羊藿甙、蛋白質(zhì)、多糖等成分含量的比較，表明樹(shù)脂法生產(chǎn)工藝試制的口服液成品各項(xiàng)指標(biāo)不僅有明顯提高，而且樹(shù)脂法工藝省去了大量成本，提高生產(chǎn)效率的目的22 。，工藝中減少了一步濃縮，可達(dá)到降低生產(chǎn)等以總黃酮、總皂甙、總生物堿為指標(biāo)，了 4 種大脂對(duì)降壓膠囊的吸附作用，結(jié)果表明，上樣液的濃度及上樣液的、含醇量是影響吸23附的主要。等用大脂對(duì)右歸煎進(jìn)行了精制，以 5 HMF 的了樹(shù)脂柱徑、藥液濃度對(duì)吸附的影響24。晏亦脂柱，水洗后用 70%乙醇洗脫。四逆湯精制后的脂處理后三味藥的主要成分基本能檢出，樹(shù)脂處理前量為指標(biāo)，用正交試驗(yàn)林等將四逆湯提取液上大TLC 結(jié)果表明，經(jīng)大后樣品的 HPLC 圖譜峰位、峰形基本相似，但 TLC 及 HPLC 圖譜中烏頭堿特征峰不明顯。藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，四逆湯與大脂精制的四逆湯均能顯著提高間羥胺處NO 水平，二者無(wú)顯著差異25。劉中秋等用大理小鼠脂對(duì)保和丸中橙皮苷進(jìn)行富集，用 50%為解吸溶劑，結(jié)果保和丸中橙