ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線分析及應(yīng)用

1、 儲存條件保存試劑盒于2-8C,不要冷凍；將不用的微孔板放進自封袋重新密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。試劑變質(zhì)的跡象顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于）時，表示試劑0.5個單位（OD450nm0.5）時，表示試劑只為優(yōu)質(zhì)生酒Forabottorlifo茹苑卬則穂霜中閨人定義定義1半抗原：只有免疫反應(yīng)性而無免疫原性的小分子物質(zhì)如藥物多糖類脂等2抗原：凡是能刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答并能與應(yīng)答產(chǎn)物特異結(jié)魯?shù)奈镔|(zhì)3栽體：賦予半抗原具有免疫原性的蛋白質(zhì)分子即為載體.抗體:可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白穩(wěn)定性:通常用戶指的穩(wěn)定性既指試劑盒的

2、保存期，又指試劑盒不同批次的均一性聳號性:試劑盒特異性一般指試劑盒出現(xiàn)假陽性或假陰性的準(zhǔn)確度:一般用回收率來表示是評價試劑盒好外的重要指列穩(wěn)彌中I勾人定義定義8靈敏度:指測定值（平均值）與真實值的接近程度，表示分析結(jié)果的正確性.由于無法知道桐的真實濃度，故通常采用添加回收率來表示：回收率測定值空白值）/添加#9精密度:指用菜種方法重復(fù)測定同一均質(zhì)樣品所得測定值的彼此接近程度表示分析結(jié)果的重復(fù)性.檢測限:檢測限指分析方法能夠從梱的背景信號中檢測出待測物存在吋所需的試低濃度.11定童限:指分析方法能夠?qū)悠分械拇郎y物進行定量測定的說低濃度.12.ICso:是指“反應(yīng)被抑制一半時抑制刑的濃度這里的反

3、應(yīng)可以是聲催化反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)等.只為優(yōu)履生活rorabetterlife&比舟列穩(wěn)為pl勾人ELISA定義ELISA定義ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表而的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，乂保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢

4、物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由丁酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度。(Enzyme-LinkedImmunosorbentAs-say)的敏感度。只為優(yōu)質(zhì)生活-Forabattorlifo二.必備試劑：ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和&二.必備試劑：ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物1已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）2酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）3酶的底物4.陰性對照品和陽性對照品，參考標(biāo)準(zhǔn)品5結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液洗滌液酶反應(yīng)終止液只為優(yōu)質(zhì)生活洗滌液酶反應(yīng)終止液只為優(yōu)質(zhì)生活For

5、abetterlife&孑、訶列穩(wěn)劑卜|勾人類型類型-酶標(biāo)記抗體法（免疫酶組化誨I抗酶抗體法免疫酶技術(shù)I液相測定法L免疫酶測定法fc間接法I固相豔養(yǎng)”雙抗體夾怙法啓魏牛I競爭法只為優(yōu)質(zhì)生酒-Forabottorlife為玲療期花祐中I釘人1.11.1可逆性抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡，其反應(yīng)式為：AgAb=AgAb抗體的親和力（affinity）,可以用平衡常數(shù)K表示：K=Ag-Ab/AgAbAgAb的解離程度與K值有關(guān)。高親和力抗體的抗原結(jié)合點與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合,兩者結(jié)合牢固，不易解離.解離后的抗原或抗體均能保持1原有的結(jié)構(gòu)和活性。為玲療期花祐中I釘人1.2敏感性化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平。酶反應(yīng)測定法的敏感度約為510pg/ml.免疫測定中凝膠擴散法和濁度法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿.標(biāo)記的免疫敏感度可提高數(shù)千倍，達ng/ml水平.例如，氯霉素、咲喃哇酮類藥物，其敏感度可達（H）5ng/inl以下.為策叭期為科中I釘人1.3特異性抗原抗體的結(jié)合發(fā)生在抗原的決定簇與抗體的結(jié)合位點之間.