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1、關(guān)于重組的基本步驟第一張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月重組DNA的基本步驟 獲得目的基因DNA分子的體外重組重組DNA分子引入宿主細(xì)胞和篩選鑒定第二張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月第三張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月獲得目的基因的途徑 限制性內(nèi)切酶酶切產(chǎn)生待克隆的DNA片段人工合成DNA反轉(zhuǎn)錄酶酶促合成法聚合酶鏈(式)反應(yīng)擴(kuò)增特定的基因片段第四張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月第五張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月第六張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月這樣就可以用限制性內(nèi)切酶把一個(gè)基因組DNA分成很多片段,對(duì)于原核生物比較小的基因組來(lái)說(shuō),可以直接用標(biāo)記
2、地探針來(lái)獲取在通過(guò)特定的方法,對(duì)于比較大的基因組,可以先制作基因文庫(kù),然后釣取所需要的帶有目的基因的片段。 第七張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月限制性內(nèi)切酶對(duì)DNA的切割方式有兩種,一種切割方式是完全酶切,另一種方式為部分酶切。第八張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月第九張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月體外重組連接常用的方法1 黏性末端連接法2 平齊末端連接發(fā) 第十張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月第十一張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月平齊末端連接法:用化學(xué)合成法、逆轉(zhuǎn)錄酶酶促合成法獲得的DNA片段或cDNA片段,以及某些限制酶酶切產(chǎn)生的DNA片段,稱為平齊末端。固然平齊末端可用T4 DNA連接酶連接,所需底物的濃度高,效率低。因此通常要將平齊末端改造成黏性末端后再行連接。改造的方法是加人工接頭或結(jié)尾 第十二張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月第十三張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月這一過(guò)程分為兩個(gè)步驟1 重組DNA引入宿主細(xì)胞 2 重組體克隆的篩選與鑒定 第十四張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月第十五張,PPT共十七頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月第十六張,PPT共十
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