中藥材質(zhì)量監(jiān)控的課件

1、 中藥指紋圖譜質(zhì)量控制技術(shù)1內(nèi)容提要中藥指紋圖譜的活性標(biāo)識與實(shí)例中藥指紋圖譜的評價技術(shù)中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題2中藥指紋圖譜的活性標(biāo)識與實(shí)例 指紋圖譜將天然產(chǎn)物多種藥效指標(biāo)化學(xué)成分表示在一張或多張圖譜上。 但是目前大部分研究還只是對天然有機(jī)成分色譜圖譜的化學(xué)構(gòu)建進(jìn)行研究；目前構(gòu)建的圖譜，只不過是“活性提取物”的色譜指紋圖譜。 沒有與藥效活性“合二為一”。 3中藥指紋圖譜的活性標(biāo)識與實(shí)例那么，問題來了？4中藥指紋圖譜的活性標(biāo)識與實(shí)例 能否在研究天然產(chǎn)物有機(jī)化學(xué)成分指紋圖譜的同時，獲得這些有機(jī)物質(zhì)的活性作用通路，并同時發(fā)現(xiàn)活性先導(dǎo)化合物，構(gòu)建“有機(jī)成分活性指紋圖譜”？ 5中藥指紋圖譜的活性標(biāo)識

2、與實(shí)例 答案： 發(fā)展中藥指紋圖譜的活性標(biāo)識技術(shù) 6中藥指紋圖譜的活性標(biāo)識與實(shí)例實(shí)例：丹參藥效成分丹酚酸抗氧化活性指紋圖譜構(gòu)建 大量藥理研究資料分析，丹酚酸最基本的作用是清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化和氧化性損傷。 為了證明丹酚酸的抗氧化效果能反映丹參水溶性成分指紋圖譜的藥理作用，利用丹酚酸的HPLC-DPPH自由基在線清除活性指紋標(biāo)識技術(shù)。7中藥指紋圖譜的活性標(biāo)識與實(shí)例 丹酚酸HPLC-DPPH在線清除自由基活性實(shí)驗流程8中藥指紋圖譜的活性標(biāo)識與實(shí)例9中藥指紋圖譜的活性標(biāo)識與實(shí)例10中藥指紋圖譜的活性標(biāo)識與實(shí)例 DPPH是一種穩(wěn)定的自由基，在517nm處有一強(qiáng)吸收。當(dāng)有自由基清除劑存在時，DPPH的

3、單電子被配對而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其所接受的電子數(shù)成量比關(guān)系，因而通過測定丹酚酸與DPPH反應(yīng)體系下517nm處的吸收信號，就可說明其清除能力。 290nm-SalB的最大吸收波長 517nm-DPPH自由基的最大吸收波長11中藥指紋圖譜的活性標(biāo)識與實(shí)例12中藥指紋圖譜的評價技術(shù)請大家先觀看一段視頻13中藥指紋圖譜的評價技術(shù) 建立好指紋圖譜也只是“萬里長征走完了第一步”，它還只是實(shí)驗室的結(jié)果，還不能滿足生產(chǎn)的需求，不能直接運(yùn)用在生產(chǎn)中進(jìn)行真正意義上的質(zhì)量控制。 要想指紋圖譜真正運(yùn)用到工業(yè)生產(chǎn)中去，必須要建立一種快速、準(zhǔn)確的評價系統(tǒng)對指紋圖譜進(jìn)行分析評價，對生產(chǎn)的藥品進(jìn)行在線質(zhì)量檢測，

4、發(fā)現(xiàn)不合格的產(chǎn)品及時排除。從而從根本上保證中藥質(zhì)量的穩(wěn)定和可控，實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化。14中藥指紋圖譜的評價技術(shù)常見的中藥指紋圖譜的指標(biāo)參數(shù)評價標(biāo)準(zhǔn)： 15中藥指紋圖譜的評價技術(shù) 直觀比較法-用待測樣品與標(biāo)準(zhǔn)圖譜的特征。 此法要求有標(biāo)準(zhǔn)圖譜，標(biāo)準(zhǔn)圖譜還要有足夠的容量即要能涵蓋大多數(shù)中藥的標(biāo)準(zhǔn)譜圖。 應(yīng)用較多。16中藥指紋圖譜的評價技術(shù) 量化數(shù)據(jù)對比法-引入相對指數(shù)、重疊率、八強(qiáng)峰、表觀豐度等量化數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。更客觀、準(zhǔn)確。 面對的難題：如何建立大量的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫17中藥指紋圖譜的評價技術(shù) 1）模糊分析法 2）人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)法 3）聚類分析法18中藥指紋圖譜的評價技術(shù) 該法是對模糊事物進(jìn)行劃分、判斷和推理

5、的方法。 事物的模糊性-客觀差異的中介過渡性所引起的劃分上的一種不確定性。 中介過渡性-指從量變到質(zhì)變的中間過程。19中藥指紋圖譜的評價技術(shù) 計算機(jī)模糊識別的基本步驟如下： 1）特征提取，即從中藥的指紋圖譜中獲取能夠反映其品質(zhì)的數(shù)量化特征。 2)依照某種方式確定該中藥指紋特征對“真模式”、“假模式”的隸屬度。 3）用最大從屬原則或閾值原則確定該中藥樣品的真?zhèn)巍?0中藥指紋圖譜的評價技術(shù) 該法是模擬人腦功能的全新信息處理方法，其理論是神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的數(shù)學(xué)模型。 優(yōu)點(diǎn)：1）固有的并行結(jié)構(gòu)和并行處理 2）采用與人類類似的聯(lián)想記憶來獲得存儲的知識 3）很強(qiáng)的容錯能力，可以從不完善的數(shù)據(jù)和圖形進(jìn)行學(xué)習(xí)并做出決

6、定。 4）具有很強(qiáng)的自適應(yīng)能力、綜合推理能力和圖形識別能力。 缺點(diǎn)：不適用與高精度的計算，在時間域順序處理方面困難21中藥指紋圖譜的評價技術(shù) 聚類分析法-利用樣本在多維空間的相對位置，將樣本分為兩個或多個集團(tuán)的算法，屬于無人管理分類方法。 過程：1）選取合適的方法去提取藥材的特征數(shù)據(jù)，以多維特征空間表達(dá)出來。 2)把中成藥樣本所得數(shù)據(jù)投影到這個特征空間上，根據(jù)點(diǎn)群的分布進(jìn)行歸類。22中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 2.原材料、中間體以及注射劑樣品的選擇與收集 3.原材料、中間體以及注射劑樣品的預(yù)處理 23中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 （1）當(dāng)研究某個注射劑品種的指紋圖譜時，首先必須調(diào)研相關(guān)的文獻(xiàn)

7、、新藥申報資料（質(zhì)量部分和工藝部分）及其它研究結(jié)果，盡可能詳盡地了解藥材、中間體及成品中所含水量成分的種類及其理化性質(zhì)，經(jīng)綜合分析后找出成品中的藥效成分或有效成分，作為成品或中間體指紋圖譜的研究對象，即分析檢測目標(biāo)。 24中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 如：黃芪含黃酮、皂苷及多糖；黃芪多糖注射液是以黃芪中的多糖為原料，因此對黃芪多糖注射液進(jìn)行指紋圖譜研究時應(yīng)以多糖作為研究對象；研究其中間體時也應(yīng)以多糖為研究對象；研究原藥材的指紋圖譜時應(yīng)把黃酮、皂苷及多糖作為研究對象。25中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 （2）對于復(fù)方制劑，應(yīng)根據(jù)“君、臣、佐、使”的原則，以君藥、臣藥中有效成分作為主要研究對象，佐使

8、藥中的成分可采用其它指紋圖譜方法進(jìn)行輔助、補(bǔ)充研究。26中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 指紋圖譜的研究方法很多且各有千秋，在實(shí)際運(yùn)用中要按照需要及不同藥物的特點(diǎn)選擇，其最終目的是保證方法的準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性以及可操作性。 一個中藥制劑指紋圖譜應(yīng)可以同時采用兩種或更多種方法進(jìn)行研究。 另，在選擇指紋圖譜方法時還要考慮藥監(jiān)部門所采用的技術(shù)和設(shè)備。27中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局下發(fā)的中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求（暫行）的規(guī)定，主要研究內(nèi)容有原藥材、中間體、注射劑的指紋圖譜，涉及樣品名稱、來源、制備、測定方法、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)等研究項。28中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題2.原材

9、料、中間體以及注射劑樣品的選擇與收集 原藥材樣品的收集應(yīng)遵循以下原則： 藥材盡可能固定產(chǎn)地（如道地藥材）、采收期、炮制方法； 對已往生產(chǎn)使用過的藥材應(yīng)結(jié)合臨床使用情況選擇收集樣品，對工藝穩(wěn)定、療效恒定、臨床使用中很少出現(xiàn)異常醫(yī)療事故的藥材批次應(yīng)重點(diǎn)選擇； 另外還應(yīng)收集不同產(chǎn)地、不同采收期的藥材，這些藥材雖然含量高低不同，組成比例各異，但當(dāng)正常使用的藥材一旦出現(xiàn)偏差時，可通過這些批次的藥材實(shí)行合理“勾兌”。通過對指紋圖譜的研究，可以對“勾兌”過程進(jìn)行指導(dǎo)。 29中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 中間體、注射劑因其生產(chǎn)工藝已經(jīng)恒定，樣品的收集原則也應(yīng)重點(diǎn)選擇工藝穩(wěn)定、療效恒定、臨床使用中很少出現(xiàn)醫(yī)療事

10、故的批次。 根據(jù)中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求（暫行）之規(guī)定，原藥材、中間體及注射劑樣品至少應(yīng)收集10批次。不可以同一批次的樣品分散成數(shù)個批次，充當(dāng)樣品。30中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題3.原材料、中間體以及注射劑樣品的預(yù)處理 原藥材的供試品制備最為復(fù)雜。原藥材所含的多種組分混雜在一起，樣品制備時，應(yīng)根據(jù)所含成分和物理化學(xué)性質(zhì)，通過萃取、沉淀、吸附或通過化學(xué)反應(yīng)，分離富集樣品。 31中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 中間體是原藥材經(jīng)過了多步處理而得，已經(jīng)濾過了大部分成分。樣品制備時，可針對有效成分處理，并參照原藥材的制備方法。 樣品富集后，尚需過氧化鋁預(yù)柱、C18預(yù)柱、硅膠預(yù)柱、聚酰胺預(yù)柱等，以

11、除去色素等雜質(zhì)，避免干擾或?qū)ιV柱的損耗。 注射液中除少數(shù)品種添加助溶劑外，所含化學(xué)成分均具有較好的水溶解性能，面且研究生產(chǎn)工藝時考慮到色素、生物大分子等因素，生產(chǎn)過程中已通過微孔濾膜、脫色等操作，因此，樣品無需特殊處理，可直接分析檢測。32中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 經(jīng)過預(yù)處理后，就可運(yùn)用各種指紋圖譜的構(gòu)建方法進(jìn)行圖譜的建立。獲得定性和定量的數(shù)據(jù)后，綜合運(yùn)用，得到一系列重要參數(shù)。 以色譜指紋圖譜為例：33中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 共有峰反映了待鑒藥材中有多少成分與標(biāo)準(zhǔn)藥材相同，顯示二者之間的相似度。 重疊率=共有峰數(shù)目*2/(標(biāo)準(zhǔn)藥材峰數(shù)目+待鑒定藥材峰數(shù)目) 所有的色譜峰都要被計入重

12、疊率的計算中，包括反映個體特征的峰，使重疊率降低。所以應(yīng)該對反映個體差異的色譜峰群進(jìn)行模糊處理，使藥材的特征顯示出來，得到真實(shí)的鑒定結(jié)果。34中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題4.2強(qiáng)峰（N） N值是按照實(shí)際的出峰情況而定（一般占總峰數(shù)的1/51/3） 1）從眾多的峰中，按照面積大小選擇前N個作為強(qiáng)峰，且其總面積應(yīng)該占整個面積的70%以上。 2）依據(jù)N個強(qiáng)峰面積的大小而定，小于70%，應(yīng)適當(dāng)增加；超過70%，應(yīng)適當(dāng)減小。 3）注意N個強(qiáng)峰中各具體峰在藥材中出現(xiàn)的頻次和所列的次序，為研究藥材的藥效和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供重要的信息和依據(jù)。35中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 特征指紋是一系列色譜峰所組成的峰群，是生

13、物體所特有的指紋，反映了一種藥材與其他藥材的不同之處。即主要用來鑒別品種。 但是中藥作為生物樣品，其特征指紋會隨著歲月的變遷而改變，盡管都是同一品種、產(chǎn)地相同、采集方式也相同，但是生物體的變異是絕對的。因此，特征指紋要隨著時間的推移而同步更新。36中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 標(biāo)準(zhǔn)藥材應(yīng)由權(quán)威機(jī)構(gòu)，如中國藥品生物制品檢定所、相關(guān)高校或科研院所所鑒別。 但由于中藥的復(fù)雜性，不可能存在一個包含所有個體差異的標(biāo)準(zhǔn)的藥材。 因此要對那些個體差異采取模糊措施，形成代表品種特征的特征圖譜，以此代替標(biāo)準(zhǔn)藥材作為中藥鑒定的比較標(biāo)準(zhǔn)。37中藥指紋圖譜研究中的關(guān)鍵問題 1）標(biāo)準(zhǔn)藥材的收集。最少不得少于10個批號。 2）藥材