酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)enzymelinkedimmunosorbentassayELISA

1、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）探生科技旗下編輯部1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆誆LISA的原理及方法2二、principle： 抗原或抗體能結(jié)合到固相載體的表面仍保持其活性；抗原或抗體與酶交聯(lián)成酶標(biāo)抗原或抗體后，仍分別保持其免疫活性和酶活性。酶標(biāo)抗原或抗體與相應(yīng)抗體或抗原反應(yīng)后，結(jié)合在免疫復(fù)合物上的酶遇到相應(yīng)的底物時(shí)，可以催化底物的水解、氧化或還原，從而產(chǎn)生有色物質(zhì)。顏色反應(yīng)的深淺與相應(yīng)抗體或抗原量相關(guān)。常用的ELISA方法包括：間接法、雙抗體夾心法、競爭法等。 3ELISA雙抗體夾心法(sandwich assay)測甲胎蛋白（-fe

2、tal protein, AFP）4一、Principle of AFP detection用抗AFP抗體包被固相載體，加入待檢標(biāo)本，標(biāo)本中的AFP與固相載體上的抗體結(jié)合，再加入酶標(biāo)記的抗AFP抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加底物顯色，顏色的深淺與相應(yīng)AFP的量呈正相關(guān)。5principleEAFPAb包被固相載體+S顯色EE待測AFP抗AFP-E6抗AFPMcAb抗體抗AFPMcAb抗體AFP雙位點(diǎn)一步法：抗AFP不同位點(diǎn)的McAb7二、material1、AFP檢測試劑盒2、AFP參考標(biāo)準(zhǔn)夜（0、25、50、100、200、400ng/ml）。3、DW4、終止液（2M H2SO4）

3、。5、酶標(biāo)測定儀、37溫箱。6、微量加樣器、滴管、吸水紙等。8三、method（一）quantity test1、add sample 取包被好的酶標(biāo)孔7孔，進(jìn)行標(biāo)記，第16孔分別加入AFP參考標(biāo)準(zhǔn)夜（0、25、50、100、200、400ng/ml）各50ul。第7孔加入樣品50ul。2、每孔加酶結(jié)合物1滴，3715分鐘。3、wash在各孔中加入洗液2滴,輕輕搖動(dòng)幾下,棄之,然后用蒸餾水或自來水加滿各孔,甩掉,反復(fù)5次,最后在吸水紙上拍干.4、顯色每孔加底物和顯色液各1滴，輕輕振搖，室溫避光反應(yīng)5分鐘，加入2M H2SO4 100ul終止反應(yīng)。5、酶標(biāo)儀450nm比色，計(jì)算結(jié)果。9（二） q

4、uality test1Add sample取包被好的酶標(biāo)板3各孔，分別加入陰性對(duì)照（20 ng/ml）、陽性對(duì)照（400 ng/ml）和待檢標(biāo)本各50ul，各孔再加入酶結(jié)合物1滴, 3715分鐘。2、washing在各孔中加入洗液2滴,輕輕搖動(dòng)幾下,棄之,然后用蒸餾水或自來水加滿各孔,甩掉,反復(fù)5次,最后在吸水紙上拍干.3、add chromogen每孔加底物和顯色液各1滴，輕輕振搖，室溫避光反應(yīng)5分鐘，觀察結(jié)果。10四、result 1Quantity test用酶標(biāo)儀進(jìn)行比色，以0 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)孔為空白孔，在波長450nm處分別讀取各標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔OD值，以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，AFP含量為

5、縱坐標(biāo)，在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線，以測定孔的OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)標(biāo)本的AFP含量。 2Quality test在白色背景上直接肉眼觀察結(jié)果。陰性對(duì)照孔應(yīng)基本無色，陽性對(duì)照孔呈深藍(lán)色。若待檢樣品孔色澤深于陽性對(duì)照孔則AFP400ng/ml，陽性；若待檢樣品孔色澤深于陰性對(duì)照孔而淺于陽性對(duì)照孔則20ng/mlAFP400ng/ml，弱陽性；待檢樣品孔色澤淺于陰性對(duì)照孔則AFP 20ng/ml，陰性。 參考范圍：正常成人AFP含量20ng/ml。11五、Report1簡述ELISA原理及ELISA雙抗體夾心法測AFP原理。2記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 12感謝您的瀏覽有需要的相關(guān)抗體可以在Fantibody全球抗體搜索引擎進(jìn)行咨詢?nèi)蚩贵w搜索引擎是一個(gè)供公共檢索的抗體數(shù)據(jù)庫，其抗體信息數(shù)據(jù)來源于全球范圍的研究機(jī)構(gòu)與商業(yè)公司。該引擎由商品化抗體數(shù)據(jù)庫與抗體應(yīng)用評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)庫兩部分組成，以幫助研究者更高效的尋找并評(píng)