生物技術藥物立項

1、基因工程改進的黃酮類物質21心血管疾病，又稱為循環(huán)系統(tǒng)疾病，是一系列涉及循環(huán)系統(tǒng)的疾病，循環(huán)系統(tǒng)指人體內運送血液的器官和組織，主要包括心臟、血管（動脈、靜脈、微血管），可以細分為急性和慢性，研究發(fā)現(xiàn)心血管疾病一般都與自由基有緊密聯(lián)系。2黃酮類物質 二十世紀30年代初，歐洲一位藥物化學家在研究檸檬皮的乙醇提取物時發(fā)現(xiàn)了黃酮類物質，其抗氧化能力超過維生素C 10倍。 直到世紀八十年代末，黃酮的藥用價值才被發(fā)現(xiàn)，近年來，黃酮的功效更是被科學研究者逐一發(fā)現(xiàn)。3黃酮黃酮類化合物泛指兩個具有酚羥基的苯環(huán)（A-與B-環(huán)）通過中央三碳原子相互連結而成的一系列化合物，其基本母核為2-苯基色原酮。黃酮類化合物結構

2、中常連接有酚羥基、甲氧基、甲基、異戊烯基等官能團。此外，它還常與糖結合成苷。多數(shù)科學家認為黃酮的基本骨架是由三個丙二酰輔酶A和一個桂皮酰輔酶A生物合成而產生的。經(jīng)同位素標記實驗證明了A環(huán)來自于三個丙二酰輔酶A，而B環(huán)則來自于桂皮酰輔酶A。4黃酮的藥用價值 黃酮的功效是多方面的，它是一種很強的抗氧劑，可有效清除體內的氧自由基，維生素E的十倍以上，這種抗氧化作用可以阻止細胞的退化、衰老，對心血管疾病有效，也可阻止癌癥的發(fā)生。 黃酮可以改善血液循環(huán)，可以降低膽固醇，向天果中的黃酮還含有一種PAF抗凝因子，這些作用大大降低了心腦血管疾病的發(fā)病率，也可改善心腦血管疾病的癥狀。 被稱為花色苷酸的黃酮化合物

3、在動物實驗中被證明可以降低26%的血糖和39%的三元脂肪酸丙酯，這種降低血糖的功效是很神奇的，但更重要的是它對穩(wěn)定膠原質的作用，因此它對糖尿病引起的視網(wǎng)膜病及毛細血管脆化有很好的作用。 黃酮可以抑制炎性生物酶的滲出，可以增進傷口愈合和止痛，櫟素由于具有強抗組織胺性，可以用于各類敏感癥。5不足之處黃酮化合物可由植物提取但是含量很少，如銀杏葉中黃酮類化合物含量僅為1.4%-1.9%之間，而體外合成的方法，成分單一、工藝復雜、成本高，其藥效無法有天然產物相比，成為制約其研究的瓶頸。因此利用基因工程來提高其產量，豐富其種類，保存其活性具有重大意義。6國內外研究現(xiàn)狀現(xiàn)在國內學者的大部分研究僅局限于表達銀

4、杏黃酮類物質，對于其他的黃酮類物質的基因表達鮮有涉及。鑒于銀杏在進化上的特殊地位和藥用功能，本實驗也注重于表達銀杏中的黃酮類化合物。利用基因工程克隆產生黃酮類物質的酶，將其轉染至于銀杏葉的細胞之中。檢測黃酮類物質產量及其活性。7實驗大致流程菌體：大腸桿菌DH5載體：克隆載體pMD-18T基因:GbC4H、GbC3H基因克隆、信息學分析，轉染，表達分析表達產物的產量和活性。81、選擇黃酮類化合物生物合成途徑上游的苯丙酸途徑中的肉桂酸-4-羥化酶的基因GbC4H以及與黃酮類化合物合成途徑并行的術質素合成途徑中的香豆酸-3-羥化酶的基因GbC3H。2、將其與克隆質粒連接，轉進大腸桿菌，是上述基因復制。93、提取其基因，測序驗證，并分析其生物信息學。4、將其基因轉至銀杏的愈傷組織，培養(yǎng)。5、分析產物的含量和活性。10擬攻克的難關1、克隆的DNA在提取過程中的純度。避免大腸桿菌的代謝物等對實驗的干擾。2、轉染銀杏的DNA 是否會被降解，是否會造成共阻遏等現(xiàn)象。3、黃酮類化合外的產量和活性。11質量控制其DNA是由基因工程克