實驗細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察和普通光學(xué)顯微鏡的使用

1、實驗細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察和普通光學(xué)顯微鏡的使用基礎(chǔ)知識顯微鏡概述： 顯微鏡是觀察細(xì)胞的主要工具。根據(jù)光源不同，可分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。1.光學(xué)顯微鏡 普通生物顯微鏡由3部分構(gòu)成：照明系統(tǒng)：包括光源和聚光器。光學(xué)放大系統(tǒng)：由物鏡和目鏡組成， 是顯微鏡的主體。機(jī)械裝置：用于固定材料和觀察方便， 包括鏡臺(載物臺) 、調(diào)節(jié)器和、 物鏡轉(zhuǎn)換器(旋轉(zhuǎn)器)等。 尼康E-600顯微鏡 2.熒光顯微鏡 尼康E800熒光DIC顯微鏡 熒光顯微鏡照片（微管呈綠色、微絲紅色、核藍(lán)色） 3. 激光共聚焦掃描顯微鏡 LCSM照片藍(lán)色為細(xì)胞核，綠

2、色為微管 4.暗視野顯微鏡 暗視野顯微鏡（dark field microscope）的聚光鏡中央有當(dāng)光片，使照明光線不直接進(jìn)人物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進(jìn)入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。利用這種顯微鏡能見到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通顯微鏡高50倍。5.相差顯微鏡 一種介殼蟲的染色體 6. 偏光顯微鏡 偏光顯微鏡（polarizing microscope）用于檢測具有雙折射性的物質(zhì)，如纖維絲、紡錘體、膠原、染色體等等。7.微分干涉差顯微鏡 DIC顯微鏡其優(yōu)點是能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影影像。與相差顯微鏡相比，其標(biāo)本可略厚一點，折射率差別更大，故影像的立

3、體感更強(qiáng)。 DIC顯微鏡下的硅藻（偽彩色） 8. 倒置顯微鏡 9. 透射電子顯微鏡 JEM-1011透射電子顯微鏡 萊卡超薄切片機(jī) 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)透射電鏡圖（偽彩色） 冰凍蝕刻電鏡照片 10. 掃描電子顯微鏡 JEOL掃描電子顯微鏡 人類血細(xì)胞SEM照片 11. 顯微操作技術(shù) 尼康NT-88NE顯微操作/注射儀 顯微鏡的分辨率: 也稱為分辨力，它是指能把兩個物點辨清的最小距離， 分辨距離越大，則分辨率越低。所以，分辨率是以分辨 距離來表示的。 其計算公式為: D=0.61入/NA NA=n sina/2 式中D為分辨率，A為光波波長，NA為物鏡的數(shù)值孔徑(鏡口率)。 在物鏡上，有鏡口率(N.A.)的標(biāo)

4、志，它反應(yīng)該鏡頭分辨力的大小，其數(shù)字越大，表示分辨率越高，各物鏡的鏡口率如下表： 物鏡 鏡口率(N.A.) 工作距離(mm) 10 0.25 5.40 40 0.65 0.39 100 1.30 0.11顯微鏡的總放大倍數(shù)等于目鏡和物鏡放大倍數(shù)的乘積， 公式為: M = K1xK2 焦點深度: 顯微鏡調(diào)焦到看清標(biāo)本某一點時，不僅是這一物點，而且它的 上下兩側(cè)也能看清楚兩側(cè)的厚度叫做焦點深度?？吹綐?biāo)本的全 厚度，必須調(diào)節(jié)螺旋仔細(xì)地從上到下進(jìn)行觀察。厚標(biāo)本和薄標(biāo)本4 - 5 um2um基礎(chǔ)知識三. 實驗步驟 (一)顯微鏡的使用1. 觀察前的準(zhǔn)備工作 (1)觀察者要養(yǎng)成顯微鏡鏡檢的工作習(xí)慣，觀察時要

5、雙 眼同時睜開，一邊觀察一邊進(jìn)行記錄或描繪。 (2)觀察時所用的材料、藥品和各種器具要預(yù)先準(zhǔn)備好。 (3)顯微鏡在使用之前應(yīng)檢查一下它的各個部件是否完整 和正常，并對載物臺、目鏡、物鏡以及聚光器上端透 鏡進(jìn)行必要的清潔工作。然后進(jìn)行合軸調(diào)節(jié)。瞳 距 調(diào) 節(jié)2. 顯微鏡的調(diào)節(jié)屈 光 度 調(diào) 節(jié)調(diào)節(jié)粗 調(diào) 松 緊 調(diào) 節(jié) 旋 鈕聚 光 鏡 中 心 調(diào) 節(jié) 光軸中心調(diào)節(jié)螺釘 視場光欄 孔徑光欄10X物鏡 標(biāo)本 聚光鏡升降旋鈕孔徑光欄調(diào)節(jié)N.A聚=(0.6-0.8)N.A物孔徑光欄開度與圖象100%70%30%孔徑光欄的運用操作步驟如下: (1）可變光欄的中心對準(zhǔn)聚光鏡的中心。如果可變光欄的水平是固定

6、的，則裝配時已保證它與聚光鏡合軸，不必調(diào)整;如果可變光欄的水平位置可以移動，則應(yīng)把可變光欄關(guān)到最小，使它的中心孔對準(zhǔn)聚光鏡下方的透鏡中心。 (2)載物臺上放置觀察標(biāo)本，把聚光器上升到它上端透鏡平面稍低于載物臺平面的高度，并將它的可變光欄開到最大，用低倍物鏡，進(jìn)行調(diào)焦到能看見標(biāo)本，可調(diào)反射鏡使視野得到最亮和最均勻 的照明，或把光欄關(guān)小，最亮的照明區(qū)正處在視野的中央。 (3)轉(zhuǎn)到高倍鏡，并調(diào)焦到看清標(biāo)本，然后去掉標(biāo)本，拔出目鏡，眼睛直接向鏡筒觀察，并把可變 光欄關(guān)小，看其亮點是否在視野中心，如果不是，就要轉(zhuǎn)動聚光器的調(diào)節(jié)螺旋，把亮點調(diào)到視野中 央，再慢慢開啟可變光欄，使視野看到光欄邊緣和聚光鏡的邊緣相接為止。3. 觀察操作：(1) 低、高倍鏡的使用: 先把低倍的物鏡用粗調(diào)焦螺旋下降至離蓋玻片0.5cm處，然后一邊觀察視野一邊上升物鏡，直至看到圖像，再將標(biāo)本移到視野中心，用細(xì)調(diào)焦螺旋把物鏡調(diào)至最清晰處，若要用高倍鏡觀察時，把所要進(jìn)一步放大觀察的部位移至視野中央，直接順時針轉(zhuǎn)換成高倍物鏡，然后用細(xì)調(diào)焦螺旋調(diào)焦，至看清物像。 (2) 兔肝細(xì)胞蘇木精-伊紅(HE)染色玻片標(biāo)本的觀察 先在干燥系物鏡下觀察肝小葉的概況，辨認(rèn)肝細(xì)胞，然后用油鏡仔細(xì)觀察肝細(xì)胞的顯微結(jié)構(gòu)。注意肝細(xì)胞的形狀，細(xì)胞核和核仁的形狀