質粒的分子生物學與質粒載體精

1、第三章質粒的分子生物學與質粒載體一、填空題. 基因工程中有3種主要類型的載體：、.由于不同構型的DNA插入EB的量不同，它們在瓊脂糖凝膠電泳中的遷移率也不同，SCDNA的泳動速 度，OC DNA泳動速度, L DNA居中，通過凝膠電泳和EB染色的方法可將不同構型的DNA分別開來.質粒的復制像染色體的復制一樣,是從特定的起始點區(qū)開始的。然而，質粒的復制可以是向的、或是向的。在雜種質粒中，每個復制子的起點都可以有效地加以使用。但是在正常條件下只仃一個起點可能居支配地位.并認為：當某些具有低拷貝數(shù)的嚴緊型質粒與松弛性質粒融合后，在正常情況下 的復制起點可能被苯閉。.就克隆一個基因（DNA片段）來說,

2、最簡單的質粒載體也必需包括三個部分：、一、。另外,一個理想的質粒載體必須具有低分子量。.如果兩個質粒不能穩(wěn)定地共存于同一個寄主細胞中，則屬于群，這是因為它們的所致.質?？截悢?shù)是指細胞中。.旦制子山三部分組成：.薛母的2Pm質粒有,可以配對形成啞鈴結構。.一個帶有質粒的細菌在TTEB的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后，一部分細胞中已測不出質粒，這種現(xiàn)象叫-.PBR322是一種改造型的質粒，它的復制f來源丁，它的四環(huán)素抗“4囚來門于 TOC o 1-5 h z 一一.它的氨羊有毒素抗性基因來自于-.質粒的消失同染色體基因的突變是不同的，前者不能恢復，后者可以通過恢受該基因的性狀。 12.C01E1質粒復制的

3、起始需要三種能.即、和. YAC的最大容我能力是，BAC敦體的最大容載能力是. pSClOl是一種復制的質粒.把那些沒有可檢測表型的燒粒稱為。.轉座子主要由下列部分組成：（1）（2）. pUC18質粒是目前使用較為廣泛的載體.pUC系列的載體是通過和兩種質粒改造而來.它的復制子來自.AP抗性基因則是來自-.在基因型的表示中，符號。表示：符號表示。二、判斷題迄今發(fā)現(xiàn)的質粒DNA都是環(huán)狀的。線性質粒同環(huán)狀質粒一樣都不帶有宿主必需的基因。有a、b、c三個質粒，因為a和b能夠共存于一個細胞，a和c也可共存于同一個細胞，所以b和 c 一定能婚共存于同一個細胞。插入元件（1S）也是一種轉座元件，它除了有轉

4、座酶基因外，還有附加基因.如果兩個不同的質粒M以穩(wěn)定地共存于同一個細胞中，這兩種質粒則屬于同一個不親和群。一個帶有反向重復序列的雙鏈DNA經(jīng)變性后，復性時其單鏈可形成發(fā)夾環(huán).能夠在不同的宿主細胞中復制的質粒叫穿梭質粒。任何一種質粒都可以用氯霉素擴增的方法，增加它的拷貝數(shù)。只有完整的豆制子才能進行獨立復制，一個失去了復制起點的復制子不能進行獨立復制.CsCl-EB密度梯度離心法純化SC DNA原理是根據(jù)EB可以較多地插入到SC DNA中，因而沉降速度較 快。質粒ColEl同pSClOl共整合后，得到重組質粒PSC134,具有兩個復制起點，這兩個起點在任何細 胞中都是可以使用的。PBR322可以用

5、于黏性末端連接、平末端連接和同聚物接尾法連接，無論用哪種方法連接，都可以用 同一種肺回收外源片段.所謂穿梭質粒載體是能夠在兩種以上的不同宿主細胞中亞制的質粒，所用的復制起點不同。一般情況下，質粒既可以整合到染色體上，也可以獨立存在.ColEl是惟一用作基因工程的自然質粒載體，它具有四環(huán)素抗性標記，因而很容易選擇。某一染色體DNA經(jīng)內切的Sa/I切割后，產(chǎn)生了若干個具有黏性末端的DNA片段，將這些片段分別在 T4 DHA連接的的作用下自身連接成環(huán).然后導人受體細胞，都可以進行獨立地復制。如果細菌的某種表型特征在UV處理下喪失后不再恢更，這種表型有可能是質粒賦予的?；蚩寺≈?，低持貝數(shù)的質粒載體是

6、沒行用的.三、選擇題（單選或多選）線性質粒豆制的引物來自于（）1）細胞中合成的小分子RNA(b)自身末端的端粒序列(c)外加的算聚DNA(d)自身斷裂的小分子DNA下面關于松弛型質粒(relaxedplasmid)性質的描述中，()是不正確的1)質粒的復制只受本身的遺傳結構的控制，而不受染色體復制機制的制約，因而有較多的拷貝數(shù)位)可以在氯霉素作用下進行擴增(c)通常帶有抗藥性標記(d)同嚴緊型質粒融合后，雜合質粒優(yōu)先使用松弛型質粒的復制子基因工程中所用的質粒載體大多是改造過的，食正的天然質粒載體很少，在下列載體中只有()被視為用作基內I程載體的天然質粒載體(a)pBR322(b)pSC101(

7、c)pUB110(d)pUC18下列哪種克隆我體對外源DNA的容我量最大？()0)質粒黏粒(c)酵母人工染色體(YAC)(d)A噬菌體(e)cDNA表達教體反向重復序列：(a)可以回折形成發(fā)夾結構(b)可以是某些發(fā)白的結合位點S)參與轉座子的轉座(d)12 1-說法都不對松弛型質粒:(a)在寄主細胞中拷貝數(shù)較多(b)可用氯霉素擴增(c) 一般沒有選擇標記(d)上述(a)、(b)兩項正確T. ColEl是惟一用作基因工程載體的自然質粒，這種質粒：()(a)是松弛復制型(b)具有四環(huán)素抗性(c)能被氯霉素擴增(d)能產(chǎn)生腸桿菌素.同一種質粒DNA.以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷移速率是：(

8、)(a)0C DNASC DNPLDNA (b)SC DNAL DNAOC DNA(c)L DNAX)C DNASC DNA (d)SC DNAX)C DNAL DNA.PBR322是一種改造型的質粒，含TT兩個抗性基因，其中四環(huán)素抗性基因來自：()(a) ColEl (b)Ri 旗粒(c)pSC101 (d)pUC18.關于質粒的相容性,下面哪一種說法不正確？()1)不同相容群的質粒能的共存于同一個細胞出)質?？梢苑殖扇舾蓚€不相容群，但不能分成若干個相容群S)如果a、b兩種質粒不相容，說明它們的復制機制相同(d)屬于同一個不相容群中的質粒，不僅復制機制相同，而且拷貝數(shù)和分子量也相同.關丁穿板

9、項粒我體，下面哪一種說法最正確？()(a)在不同的宿主中具有不同的復制機制(b)在不同的宿主細胞中使用不同的旦制起點(c)在不同的宿主細胞中使用不同的復制版(d)在不同的宿主細胞中具有不同的復制速率.能夠用來克隆32kb以下大小的外源片段的質粒我體是()(a)charoBid (b)plasBid (c)cos*id (d)phagaiid.第一個作為重組DNA載體的旗粒是()(a)pBR322 (b)ColEl (c)pSC101 (d)pUC18. Ti 質粒：()la)可從農(nóng)桿菌轉到植物細胞中(b)作為雙鏈DNA被轉移(c)在植物中導致腫瘤Id)介導冠瘦堿的合成，作為細菌的營養(yǎng)物和植物的

10、生長激素(e)需要細菌的叮了其因幫助轉移(f)在植物細胞中作為染色體外質粒四、簡答胭YAC載體具有什么樣的功能性DNA序列？為什么在克隆大片段時, YAC具有優(yōu)越性？列舉質粒致體必須具備的4個基本特性。什么叫穿校載體？說明收少質粒和噬菌體載體上某種靜的識別位點的方法和原理。雖然質粒的帶動轉移給質粒載體的安全性帶來一定的困難，但是通過帶動轉移將質粒轉移到特定 的受體菌中也是其因工程中常用的實胺技術.請舉一例說明之.為什么來自HfrxF-的重組體幾乎總是F-?解祥為什么不同的Hfr菌株具有不同的轉移起點和方向？怎樣從一個E. coli的Hfr菌株中分離到一個F 的菌株？你已經(jīng)分離了一個新的F因子,

11、怎樣用最簡便的方法知道最初的F因子的部分DNA已經(jīng)被切除. 并被一個外源DNA（也就是細菌DNA）所替代？你能用哪一種基因轉移的方法確定（DKcoli染色體上一個新發(fā)現(xiàn)的基因座在其染色體上的位置；（2）一個新分離的突變在基因內的位置。用加TT注料的圖表說明F質粒是怎樣從一個P細胞轉移到F細胞.并簡要說明轉移復制如何不同 于營養(yǎng)體的受制。五、問答題什么是復制子（replicon）?什么是質粒的相容性?什么是不相容群?機制是什么？什么是質粒的帶動轉移？說明變性定位法和限制性內切核酸酹定位法研究質粒復制起點的原理。ColEl衍生質粒捐貝數(shù)調節(jié)機理的機理是什么？R1質粒攙貝數(shù)受到怎樣的調節(jié)控制？質粒如

12、何維持在細胞中的穩(wěn)定？引起質粒不相容性的主要原因是什么？由于基因工程是人為改變遺傳信息的操作，因此必須注意被操作基因的安全，進行嚴格的監(jiān)控.質粒栽體的安全性是I分重要的。請同質粒載體的安全條件包拈哪幾個方面？請指出質粒pSClOl的一些生物學特性（包括結構和遺傳）及在基因工程中的作用.自然界中具備理想條件的質粒載體為數(shù)不多，即使是ColEl和pSClOl這兩個I然質粒也不盡人意, 通常需要進行改造,請問質粒改造包括哪些基本內容？質粒改造的發(fā)展過程如何？在質粒中如何增戰(zhàn)院切點？TT人用限制性內切核酸酶EcoRi分別切割松弛型質粒ColEl和嚴緊型質粒pSClOl（各有一個切點）. 然后重組連接形成一個雜種質粒PSC134,請推測這種質粒有什么特性和用途?，F(xiàn)分離了 4種新的大腸桿菌Hfr菌株,通過中斷接合實驗,針對海-菌株確定了高頻轉移的標記 基因和它們進入F受體的時間分別為:man13innal29lys16pur6標記基因和第一trp6aet14arg9trp3次進入的時間his23thr4al2thr31pur3uvr20his32lac23HfrlHfr2Hfr3Hfrlgal 14（gal、lac、nal