基因工程藥物

1、關于基因工程藥物第一張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月基因工程制藥：指利用重組DNA技術，結合發(fā)酵工程、細胞工程、酶工程等現(xiàn)代生物技術研制預防和治療人類、動物重大疾病的蛋白質藥物、核酸藥物以及生物制品的一門技術。第二張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月28.1 基因工程藥物的發(fā)展概況8.1.1 基因工程藥物的發(fā)展簡史與現(xiàn)狀8.1.2 基因工程藥物的特點8.1.3 基因工程藥物的研發(fā)過程第三張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月38.1.1 基因工程藥物的發(fā)展簡史與現(xiàn)狀1973年，Cohen等，tetr和strr成功重組，基因工程拉開序幕1974年，重組質粒轉化大腸桿菌，獲得相

2、應抗性1976年，Genentech公司成立1982年，授權Eli Lilly公司基因重組動物疫苗抗眼球病疫苗生產和使用；人胰島素生產和使用?？藙诎賾n解第四張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月41984年，凝血因子VIII1985年，注射用促生長素1987年，tPA。第五張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月5國家 發(fā)展策略 投入資金臨床試驗上市品種 產值美國支持基礎創(chuàng)新，主導領先水平100億US$/年350110200億US$/年日本合作，實用化，信息化2千億日元/年50種以上50五千億日元/年德國創(chuàng)新，轉讓，加大投入10068中國重視，優(yōu)先、優(yōu)惠20余種2030億人民幣主要國家基

3、因工程制藥產業(yè)化概況第六張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月6基因工程藥物現(xiàn)狀與前景2001年，生物技術公司4284家（上市622家），銷售總額348億美元，其中基因藥物占70%，250億美元；美國，1466家，占55%；銷售總額285億美元，占82；上市公司318家，占55%；日本歐洲表8.1第七張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月7我國國情“起步晚，發(fā)展快；項目不多，仿制為主；重復生產，后勁不足”。IL-2，干擾素，粒細胞集落刺激因子（G-CSF），EPO，生長激素。表8.3第八張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月88.1.2 基因工程藥物的特點1、高技術：人才、技術2、

4、長周期：實驗室、中試、臨床、規(guī)?；a、市場商品化階段、監(jiān)督環(huán)節(jié)3、高投入4、高風險5、高收益第九張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月9基因工程藥物的優(yōu)點1、可以得到天然狀態(tài)難以獲得的生理活性物質，改造成新藥 胰島素2、使生理活性物質在各種反應器中獲得高表達，符合臨床和研究需要3、改造生理活性物質，提高其活性：速效、長效4、可以挖掘和開發(fā)更多的新藥，獲得新物質第十張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月108.1.3 基因工程藥物的研發(fā)過程1、實驗室研究階段（discovery，research）2、基因工程藥品的開發(fā)階段（development）3、基因工程藥品的臨床試驗（comme

5、rcialization）: 、期臨床試驗4、新藥申請和上市第十一張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月118.2 基因工程制藥的下游技術8.2.1 基因工程菌的規(guī)?；囵B(yǎng)8.2.2基因工程菌細胞膜的破碎8.2.3 基因重組蛋白的分離與純化下游技術：表達、分離純化和活性測定第十二張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月128.2.1 基因工程菌的規(guī)模化培養(yǎng)8.2.1.1 重組大腸桿菌培養(yǎng)基8.2.1.2 基本培養(yǎng)方式8.2.1.3 培養(yǎng)工藝條件對外源基因表達的影響8.2.1.4 培養(yǎng)條件對產物活性、存在形式及釋放的影響8.2.1.5 高密度和高表達培養(yǎng)對策第十三張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作

6、于2022年6月138.2.1.1 重組大腸桿菌培養(yǎng)基C源、N源、無機鹽、微量元素、維生素、生物素等LB培養(yǎng)基、M9培養(yǎng)基按組成物質的來源分：合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基按存在狀態(tài)分：固體、液體培養(yǎng)基第十四張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月148.2.1.2 基本培養(yǎng)方式1、分批培養(yǎng)（batch culture）：在一個封閉培養(yǎng)系統(tǒng)內含有初始限制量的基質的培養(yǎng)方法。培養(yǎng)過程從接種開始，經過4個時期：遲滯期、對數生長期、減速期和穩(wěn)定期。2、補料分批培養(yǎng)（fed-batch culture ）3、連續(xù)培養(yǎng)（continuous culture）4、透析培養(yǎng)（dialysis culture）第十

7、五張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月158.2.1.3 培養(yǎng)工藝條件對外源基因表達的影響工程菌大規(guī)模培養(yǎng)的優(yōu)化設計和控制對外源基因的高效表達至關重要。工藝：選擇合適的發(fā)酵系統(tǒng)或生物反應器。生物學方面的因素： 與細菌生長密切相關的條件或因素： 溫度、pH值、溶氧、培養(yǎng)基成分 表達條件 誘導物、改變溫度 提高外源基因表達產物的總量： 表達水平、菌體濃度第十六張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月168.2.1.4 培養(yǎng)條件對產物活性、存在形式及釋放的影響對產物活性和存在形式的影響：溫度和pH值存在形式：包涵體、融合蛋白、分泌型第十七張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月17外源基因

8、在大腸桿菌中的表達形式表達產物可能存在于：細胞質、細胞周質、胞外培養(yǎng)基中表達形式：可溶性蛋白、不溶性蛋白包涵體蛋白融合蛋白分泌型外源蛋白第十八張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月181、包涵體蛋白包涵體：一定條件下，外源基因的表達產物在大腸桿菌中積累并致密的聚集在一起形成無膜的裸露結構。細胞質中較多，較少細胞周質由蛋白質組成，氨基酸序列正確，空間構象錯誤，無生物學活性。包涵體優(yōu)點：易于分離純化對蛋白酶有較好的抗性第十九張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月192、融合蛋白融合蛋白：外源蛋白基因與受體菌自身蛋白基因重組在一起，但不改變兩個基因閱讀框。受體菌蛋白位于N端，外源蛋白位于C端

9、。融合蛋白優(yōu)點：穩(wěn)定性增加：雜合構象，不易被水解具有較高的水溶性和生物學活性能以較高的效率表達：自身蛋白易于分離純化： 酶水解第二十張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月203、分泌型外源蛋白分泌型蛋白：指外源基因的表達產物通過運輸或分泌的方式穿過細胞的外膜進入培養(yǎng)基中。分泌蛋白需在N端加上信號肽序列。分泌型蛋白優(yōu)點：簡化了純化工藝使外源蛋白免于被降解有利于形成正確的構象，獲得有生物活性的蛋白質。第二十一張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月21表達蛋白在細胞中的穩(wěn)定性防止蛋白降解融合蛋白表達系統(tǒng)：封閉了水解酶作用位點，增加穩(wěn)定性。分泌蛋白表達系統(tǒng)：分泌到細胞周質、培養(yǎng)基中包涵體表達系

10、統(tǒng)：難溶性的沉淀復合物,不易被宿主蛋白水解酶降解。蛋白水解酶基因缺陷型的受體系統(tǒng)：第二十二張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月228.2.1.5 高密度和高表達培養(yǎng)對策1、高密度培養(yǎng)：2、高表達培養(yǎng)：單因素實驗正交實驗第二十三張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月23基因表達產物的分離純化收集細胞破碎細胞初步分離柱層析經一步分離純化第二十四張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月248.2.2基因工程菌細胞膜的破碎（一）細胞收集離心法貝克曼beckman離心機第二十五張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月25（二）破碎細胞變性劑裂解法：哺乳動物 SDS超聲波破碎法：細菌和酵母

11、緩沖液機械破碎法適用于細菌、酵母、植物細胞石英砂、細玻璃珠： 液氮酶解裂解法：細菌、酵母、植物cell第二十六張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月268.2.3 基因重組蛋白的分離與純化8.2.3.1 重組蛋白的分離1、離心：去除未破碎的細胞和細胞碎片等2、沉淀：鹽溶和鹽析： (NH4)2SO4 ；有機溶劑沉淀：乙醇、丙酮；等電點沉淀3、膜分離：透析和超濾：透析膜、超濾管透析超濾第二十七張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月274、雙水相萃?。豪梦镔|在互不相溶的兩水相間分配系數的差異進行萃取的方法。原理：水相中加入溶于水的高分子化合物，形成密度不同的兩相體系。形成原因：聚合物的不相

12、容性，即聚合物分子的空間阻礙作用，無法形成均一相。雙聚合物：聚乙二醇(PEG)/葡聚糖(Dx)。該系統(tǒng)上相富含PEG，下相富含Dx；第二十八張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月285、反膠團萃?。悍茨z團：是表面活性劑分散在連續(xù)的有機溶劑中，自發(fā)形成的納米尺度的一種聚集體。第二十九張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月298.2.3.2 基因重組蛋白的純化方法進一步分離純化離子交換層析：等電點的差異 陽、陰離子凝膠柱層析（分子篩）：分子量大小親和層析：分子間特異相互作用凝膠層析柱離子交換柱親和層析柱第三十張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月30柱層析基本步驟（1）裝柱 （2）柱平

13、衡（3）上樣 （4）洗脫（5）樣品收集：鑒定脫鹽濃縮自動核酸蛋白分離層析儀 第三十一張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月31基因表達產物的精細純化檢測、制備和純化蛋白質 蛋白濃度、純度測定PAGESDSHPLC第三十二張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月328.2.3.3 重組蛋白活性的測定生物活性的保持免疫測定法第三十三張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月338.3 幾種重要基因工程藥物的研發(fā)概況8.3.1 基因工程激素類藥物8.3.2 基因工程細胞因子類藥物8.3.3 基因工程抗體8.3.4 基因工程疫苗8.3.5 基因工程受體第三十四張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022

14、年6月348.3.1 基因工程激素類藥物激素（hormone）：由生物體內分泌腺或特異性細胞產生的微量有機化合物，通過體液或細胞外液運送到特定的作用部位，能引起特殊的生理效應。分類：多肽蛋白類激素、甾醇類激素、脂肪酸類激素如胰島素、人生長激素、人促卵泡激素第三十五張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月35激素（hormones）：又稱化學信使，是特定細胞合成的，能使生物體發(fā)生一定反應的有機分子；它們的作用力很強，很低的濃度就能引起很強的反應；它們都是短命的，在細胞中不能積累，很快就會被破壞。激素都是有特異性的，只對某種或某幾種細胞有效，具有接受相應激素的特異受體。第三十六張，PPT共八十二

15、頁，創(chuàng)作于2022年6月36激素的傳遞方式第三十七張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月378.3.1.1 胰島素（ insulin ）概況：動物胰臟胰島的細胞以前胰島素原形式合成跨膜運輸后成胰島素原高爾基體內形成成熟胰島素。生理功能：治療糖尿病 降低血糖提高組織攝取葡萄糖的能力抑制肝糖原的分解促進肝糖原和肌糖原的合成第三十八張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月38 胰島素原的結構第三十九張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月39基因工程生產人胰島素的途徑用大腸桿菌發(fā)酵生產胰島素原，在體外將胰島素原轉變?yōu)橐葝u素。（丹麥NovoNordisk公司）先分別大腸桿菌發(fā)酵胰島素的A鏈和B

16、鏈，純化后再在體外重組產生完整的人胰島素。（美國Elililly公司）酵母發(fā)酵產生前胰島素原。第四十張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月40已上市的基因工程胰島素藥物1、重組人胰島素：Humulin、Novoli2、重組人胰島素類似物：賴脯胰島素 Humalog，作用快3、甘精胰島素：Lantus4、門冬胰島素：Novolog：速效HumulinHumalog第四十一張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月41曾經的II型糖尿病治療藥物第四十二張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月42研制基因工程藥物胰島素的基本路線?第四十三張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月438.3.1

17、.2 生長激素（growth hormone ）概況：是一類由動物腦垂體前葉分泌的能促進生長的蛋白類激素。191個氨基酸組成，分子量21.5kDa。侏儒癥；巨人癥；肢端肥大癥第四十四張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月44生長激素生理功能：治療垂體性侏儒癥刺激骨和軟骨的生長促進黏多糖及膠原的合成影響蛋白質、糖、脂類的代謝，最終影響肌體的生長與發(fā)育第四十五張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月45第一代：大腸桿菌生產，N端多一甲硫氨酸第二代：分泌蛋白形式，信號肽被自動切去第四十六張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月468.3.2 基因工程細胞因子類藥物細胞因子（Cytokine）

18、:由細胞分泌的能調節(jié)生物有機體生理功能，參與細胞的增殖、分化和凋亡的小分子多肽類物質。干擾素（IFN）、白細胞介素（IL）、腫瘤壞死因子（TNF）、生長因子（GF）第四十七張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月47細胞因子通過與靶細胞表面的特異性受體結合后會引發(fā)信號的轉導，導致細胞表面結構和功能的變化。作用特點：多相性、網絡性、高效性細胞因子生物學功能：調節(jié)免疫應答、抗病毒、抗腫瘤、調節(jié)肌體造血功能、促進炎癥反應?？芍委煻喾N免疫疾病、腫瘤、造血功能障礙等。第四十八張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月48第四十九張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月498.3.2.1 干擾素（in

19、terferon,IFN）1957年英國病毒生物學家Alick Isaacs和瑞士研究人員Jean Indenmann首次發(fā)現(xiàn)，利用滅活的流感病毒作用于雞胚絨毛尿囊膜后，可使細胞產生一種干擾病毒繁殖的可溶性物質，稱為干擾素。普遍存在：脾臟、肝臟、腎臟、骨髓等；可被多種因素誘發(fā)分泌，如病毒，雙鏈RNA等。第五十張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月50種類 產生細胞 用途-干擾素 白細胞 I型干擾素 antivirus,anti-tumor-干擾素 成纖維細胞 -干擾素 活化T、NK細胞 型干擾素 immune regulation干擾素來源、分類與用途IFN-1b第五十一張，PPT共八十二

20、頁，創(chuàng)作于2022年6月51干擾素位置：位于人第9號染色體上無內含子，5端非編碼區(qū)+信號肽+編碼區(qū)+ 3端非編碼區(qū)組成。表達產物：188-189個氨基酸前體，分泌時切去N端23個氨基酸，165-166個氨基酸的活性產物。四個半胱氨酸（1，29，98/99，138/139），2對二硫鍵：1 98/99，29138/139。第五十二張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月52干擾素位置：位于人第12號染色體上4個外顯子+3個內含子表達產物：143個氨基酸有糖基化第五十三張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月53干擾素生理作用：抗病毒感染：作用于細胞后能合成多種抗病毒蛋白，抑制病毒的復制。調控

21、細胞的生長：可抑制或促進細胞的生長。調節(jié)免疫細胞發(fā)揮生理效應：在臨床上已用于治療白血病、乙型肝炎、丙型肝炎、多發(fā)性硬化癥和類風濕關節(jié)炎等多種疾病。第五十四張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月541976年Greenberg等首先報道用人白細胞干擾素治療4例慢性活動性乙肝，治療后有2例HBeAg消失。 1980-1982年，基因工程方法在大腸桿菌及酵母菌細胞內獲得了干擾素，從每1升細胞培養(yǎng)物中可以得到20-40毫升干擾素。從1987年開始，用基因工程方法生產的干擾素進入了工業(yè)化生產，并且大量投放市場。 第五十五張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月55可供臨床選用的干擾素惠福仁（類淋巴

22、母細胞干擾素）：葛蘭素威康（英國）重組 IFN-1b，賽若金，國產，深圳科興 IFN-2a，羅擾素，羅氏公司（瑞士） IFN-2b，干擾能（甘樂能），先靈葆雅（美國）組合干擾素，干復津，安進（美國）。第五十六張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月56各種亞型的干擾素-（含1或2或2a或2b）療效近似；因為IFN不能通過胃腸道吸收，臨床主要采取肌肉注射和皮下注射2種方式，2h后達到血液最高濃度。吸收率可達80%以上。第五十七張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月57基因工程生產IFN大腸桿菌表達體系：溫度誘導系統(tǒng)，30振蕩培養(yǎng)至AD600達0.4后將溫度升高至42 ，繼續(xù)培養(yǎng)5h。新型干

23、擾素：長效rhIFN-干擾素聯(lián)合利巴韋林第五十八張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月588.3.2.2 紅細胞生成素（EPO）紅細胞生成素（EPO）：是一種集落刺激因子。它由腎臟和肝臟產生，其主要功能是刺激造血始細胞分化為紅細胞，維持外周血中紅細胞的正常水平。7號染色體，5個外顯子，成熟165個氨基酸糖基化：只能采用哺乳動物表達系統(tǒng)如CHO細胞。治療腎功能衰退導致的貧血、非腎性導致的貧血第五十九張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月59臨床用rh EPO美國Amgen公司的Epogen日本麒麟公司的利血寶（Espo）德國寶靈曼公司的生血素（Recormon）珠海麗珠制藥廠等10多家單

24、位：益比奧，寧紅欣，愛血寶 第六十張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月60基因工程生產紅細胞生成素的主要步驟？第六十一張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月618.3.2.3 白介素（interleukin，IL） 1979年第二屆國際淋巴因子研討會指出，白介素是一類免疫調節(jié)因子，指由白細胞產生，介導白細胞或免疫細胞間相互作用的淋巴因子。白細胞介素在傳遞信息，激活與調節(jié)免疫細胞，介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應中起重要作用。 第六十二張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月62白細胞介素（IL）生理功能：在免疫調節(jié)中起重要作用:促進多種T細胞增殖和分化促進天然殺傷細胞的殺

25、傷能力促進B細胞的增殖和分化促進多種細胞因子和細胞因子受體的表達，因而在抗腫瘤和抗感染中發(fā)揮重要功能。第六十三張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月63人白介素-2又稱T細胞生長因子，由133個氨基酸組成的單鏈，分子量15-17.5kD。3個半胱氨酸（cys58,105, 125），cys58,105之間形成二硫鍵才有活性。有糖基化位點，但糖基化與否并不影響功能?；钚约性贜端。對熱不穩(wěn)定。人白介素-11又稱脂肪細胞生長抑制因子，由178個氨基酸組成的單鏈，分子量23-24kD。無半胱氨酸，富含脯氨酸和堿性氨基酸。無糖基化位點?；钚约性贑端和Met59。對熱穩(wěn)定，80處理不喪失活性。第六

26、十四張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月64IL生物活性和臨床應用： IL-2：處于調節(jié)機體免疫應答的細胞因子網絡的中心環(huán)節(jié)，對機體免疫監(jiān)視和抗腫瘤免疫應答具有重要意義。不能直接殺傷腫瘤細胞。用于治療腫瘤、免疫缺陷和感染性疾病等。用于抗感染治療，如麻風病。先天和后天性免疫缺陷，如HIV。第六十五張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月65rhIL-21984年批準用于臨床試驗，1992年FDA批準上市，Proeukin，血管肉瘤，腎癌。國內：1997年先后上市，有安特魯克，辛洛爾，德路生等。第六十六張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月66IL-11：是一種血小板生長因子，用于治療

27、癌癥患者放化療后血小板減少唯一安全有效藥物。 多功能造血細胞因子促進骨髓增殖。銀屑病。第六十七張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月67rhIL-111997年美國FDA批準Genetics Institute（GI公司）研制的rhIL-11上市。國內2001年公布批準上市，質量與進口相當，一家為酵母，其余為大腸桿菌表達系統(tǒng)。第六十八張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月68干細胞因子（hSCF）又稱肥大細胞生長因子，steel因子，kit配體：能刺激骨髓造血干細胞和造血始細胞增殖，是造血干細胞增殖分化的關鍵因子。與IL-3、EPO等有協(xié)同效應。248個氨基酸組成，是一種酸性糖蛋白?？?/p>

28、用于治療原發(fā)或繼發(fā)性的干細胞功能異常的疾病第六十九張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月69人表皮生長因子（hEGF）53個氨基酸組成生理作用：對多種細胞如表皮細胞、上皮細胞等有刺激效應對內皮細胞有刺激作用促進新血管的生成主要用于外傷、潰瘍、燒傷等。hEGF還能促進正常表皮細胞的新陳代謝,添加到美容護膚品中可以達到美白、抗皺、延緩衰老的作用。第七十張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月708.3.3 基因工程抗體抗體（antibody，Ab） ：在抗原物質刺激下產生的，能與相應抗原發(fā)生特異性免疫反應的的蛋白質分子。是機體免疫細胞被抗原激活后，由分化成熟的B細胞-漿細胞合成、分泌的一類能

29、與相應抗原特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。 抗體是免疫系統(tǒng)在外界抗原刺激下產生的一種蛋白。第七十一張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月71抗體結構與功能組成：2條輕鏈2條重鏈抗體作用：體液免疫功能與特異性抗原結合發(fā)生免疫反應活化補體與不同受體結合介導型免疫反應或調節(jié)吞噬細胞的吞噬功能第七十二張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月72抗體的產生經歷了三個階段經典免疫方法產生的異源多克隆抗體細胞工程產生的鼠源單克隆抗體基因工程產生的人源單克隆抗體 單克隆抗體是由識別一種抗原決定簇的細胞所產生的均一性抗體，它反應的特異性高、親和力強、效價高、血清交叉反應少。第七十三張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月73抗原制備和提純與動物免疫 動物免疫 (Balb/小鼠)骨髓瘤細胞及飼養(yǎng)細胞的制備和培養(yǎng) 細胞融合 陽性克隆單克隆化 陽性克隆篩選 有限稀釋法 篩選方法建立 單克隆抗體的制備和凍存 單克隆抗體的純化 單克隆抗體特異性鑒定單克隆抗體的功能研究 單克隆抗體應用研究 制備單克隆抗體是復雜而費時的工作，整個技術流程。第七十四張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月74流程第七十五張，PPT共八十二頁，創(chuàng)作于2022年6月75基因工程抗體基因工程抗體：以基因工程技