不同血管段活性差異對(duì)葛根素血管舒張作用機(jī)制的影響

1、不同血管段活性差異對(duì)葛根素血管舒張作用機(jī)制的影響摘要：研究離體血管環(huán)試驗(yàn)中不同血管段活性差異對(duì)葛根素(Puerarin, Pue)的舒張作用差 異并探討其機(jī)制。方法：SD大鼠36只，常規(guī)方法制備離體血管環(huán)標(biāo)本，分為內(nèi)皮完整組和 內(nèi)皮組兩大組，其中每組都設(shè)有遠(yuǎn)心段、中段和近心段三組。用離體血管灌流大鼠胸主動(dòng)脈 環(huán)，血管基礎(chǔ)張力定為9.8 10-3 N(1 g),測(cè)定各組血管環(huán)張力及葛根素pEC50.內(nèi)皮完整組 分別加入L-NAME與葛根素(浴槽終濃度為10-4 mol L-1)共同孵育，測(cè)定血管環(huán)張力變化， 并計(jì)算pEC50。結(jié)果：葛根素在10-71(M mol L-1范圍內(nèi)對(duì)腹主動(dòng)脈具有劑量依

2、賴性的舒 血管效應(yīng)，在10-4 mol L-1達(dá)到(6L2 3.7)%的最大舒張;去內(nèi)皮后其舒血管效應(yīng)可降低(34.6 6.1)%,比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05);遠(yuǎn)心段去內(nèi)皮及內(nèi)皮完整血管環(huán)Emax均較近心段和 中段比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；內(nèi)皮完整遠(yuǎn)心段組中，葛根素與L-硝基精亞酸(L-NAME) 共同孵育后，Emax顯著下降(P 0.05);而近心段和中段組中，L-NAME與葛根素共同孵育組 血管舒張的受抑制程度與葛根素組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)o各組pEC50比較差異均 無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05).結(jié)論：葛根素具有內(nèi)皮依賴性的舒血管效應(yīng)，但不同血管段中舒張

3、 活性存在差異，該作用與NO系統(tǒng)有關(guān)。關(guān)鍵詞：葛根素;胸主動(dòng)脈環(huán);NO合成蔭;血管舒張葛根素(Puerarin, Pue)具有擴(kuò)血管、降血壓、抗心肌缺血等作用。以往研究表明葛根素?cái)U(kuò) 血管機(jī)制存在爭(zhēng)議，可能與實(shí)驗(yàn)條件和動(dòng)物種屬不同有關(guān)。本文的研究旨針對(duì)血管條的不同 血管段血管活性不同對(duì)于葛根素血管舒張作用機(jī)制的影響，應(yīng)用NO合酶抑制劑L-硝基精 氨酸(L-NAME),探討葛根素對(duì)不同胸主動(dòng)脈段的舒張作用與NO的關(guān)系，觀察葛根素的舒 血管作用機(jī)制1資料與方法實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SD大鼠36只，體重250300 g,雌雄兼用，由青龍山動(dòng)物中心提供。藥品：重酒石酸去甲腎上腺素(NoradrenaHncB

4、itartrate, NA)購自天津金耀氨基酸有限 公司，批號(hào)：0803192;苯腎上腺素化心)，1-硝基精氨酸(13人2正)購自Fluka,批號(hào)：1115878、 40705093;氯化乙酰膽堿(Ach)購自Alfa Aesar公司，批號(hào)：10132497;葛根素，由南京師范大 學(xué)袁生教授實(shí)驗(yàn)室提供;溶于50%丙二醇進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。試劑：K-H 液：NaCl 118.0mM, KC14.7 mM, NaHCO3 25.0mM KH2Po4L2mM, MgS04 1.2 mM, CaC12 2.5 mM, glucose 11.0 mMa 均為普通國(guó)產(chǎn)分析純。儀器：MD 2 000生物信號(hào)采集系統(tǒng)購

5、自南京醫(yī)科大學(xué)。實(shí)驗(yàn)方法不同種屬動(dòng)物胸主動(dòng)脈環(huán)制備：20%烏拉坦（給藥計(jì)量1 g/kg）麻醉，給藥量為0.6 ml/100 ga取正常大鼠胸主動(dòng)脈,置于預(yù)冷以100%。2飽和的K-H液中,去除血管周圍結(jié) 締組織，制備成34 mm的血管環(huán)，并懸掛于盛有預(yù)先以95% CO2混合氣體的K-H液的5浴皿中，下段用鋼絲鉤固定住，上段與張力換能器相連，用MD 2 000生物信號(hào)采集系統(tǒng) 記錄張力Emax。浴皿中持續(xù)通入氣體，保持（37 0.5）的恒溫，給予不同前負(fù)荷，15 min換1 次緩沖液，平衡60 min,加入NA（浴槽終濃度10-6 mol L-1）預(yù)收縮2次，用K-H液洗脫至 基線后進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn)

6、。去內(nèi)皮組以機(jī)械法去除內(nèi)皮。血管內(nèi)皮活性的檢驗(yàn)：用Phe（浴槽終 濃度10-6 mol L-1）處理動(dòng)脈環(huán)使其收縮至平臺(tái)，加入Ach（浴槽終濃度10-5 mol L-1）動(dòng)脈環(huán) 舒張至平分，檢驗(yàn)內(nèi)皮完整性，舒張活性70%為內(nèi)皮完整;舒張活性20%則認(rèn)為內(nèi)皮去除。葛根素對(duì)苯腎上腺素引起的收縮的影響：隨機(jī)選取大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)，分為去內(nèi)皮組、 內(nèi)皮完整組、溶劑對(duì)照及正常對(duì)照組，葛根素用Phe（浴槽終濃度10-6 mol L-1）處理動(dòng)脈環(huán)使 其收縮至平臺(tái)，加入葛根素（浴槽終濃度10-710-4 mol L-1）動(dòng)脈環(huán)舒張至平臺(tái)，記算舒張 百分?jǐn)?shù)。胸主動(dòng)脈環(huán)的區(qū)域差異性：將大鼠的胸主動(dòng)脈從近心段開始剪成

7、6段，編號(hào)16, 取1、3、6分為作為近心段、中段和遠(yuǎn)心段，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)1。分為去內(nèi)皮組和內(nèi)皮完整組。 兩組動(dòng)脈環(huán)分別經(jīng)預(yù)處理后，使溶液中累加苯腎上腺素的濃度依次（10-910-5 mol L-1）,測(cè) 定Phe引起大鼠胸主動(dòng)脈條收縮的改變。后用K-H液洗3次，待主動(dòng)脈條張力恢復(fù)正常并 平衡45 min后,加入，孵育20 min后重復(fù)以上過程;或用L-NAME（浴槽終濃度10 mol L-1） 和葛根素（引起最大舒張百分?jǐn)?shù)的濃度）共同孵育20 min后，重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)。2結(jié)果葛根素最大舒張濃度：結(jié)果如圖1所示，葛根素引起最大舒張的濃度為104 mol L-1,去 內(nèi)皮組和內(nèi)皮完整組的最大舒張百分?jǐn)?shù)為

8、（40.2 7.78）%和（61.2 3.87）%,與溶劑及正常對(duì)照組 相比，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.01）；葛根素對(duì)去內(nèi)皮組與內(nèi)皮完整組的舒張作用比較差異 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）,去內(nèi)皮組明顯舒張作用下降;溶劑與正常對(duì)照組相比，比較差異無統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義（P0.05）,說明其對(duì)體外血管環(huán)無影響。3討論體外血管環(huán)實(shí)驗(yàn)作為篩選心血管活性化合物及研究心血管活性物質(zhì)的作用機(jī)制常用的基礎(chǔ) 實(shí)驗(yàn)被廣泛應(yīng)用，但同時(shí)由于不同種屬動(dòng)物不同部位的血管作用仍存在差異，并且操作規(guī)范 因人而異，從而相同化合物可能得到不同結(jié)果。而葛根素舒張血管作用機(jī)制在國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中 就大不相同。本文著重研究了體外血管環(huán)試驗(yàn)中容易被忽略的因素，即遠(yuǎn)心段、中段與近心 段的血管環(huán)活性差異。早在上世紀(jì)80年代，KitaT等在研究中就發(fā)現(xiàn)在家兔家族性高膽固醉血癥模型中，遠(yuǎn)段 胸主動(dòng)脈的血管損傷程度要比其他段血管嚴(yán)重許多。而在Honda H等1研究中，則發(fā)現(xiàn)中 段和遠(yuǎn)心段血管較近心段血管舒張作用的不同與乙酰膽堿誘導(dǎo)的內(nèi)皮源性NO的釋放有關(guān)。 本實(shí)驗(yàn)中遠(yuǎn)心段血管環(huán)對(duì)于異丙腎上腺素誘導(dǎo)的血管收縮活性以及葛根素誘導(dǎo)的血管舒張 作用活性較中段和近心段血管環(huán)弱。而葛根素于L-NAME孵育后乙酰膽堿誘導(dǎo)的血管舒張 作用均減弱，但對(duì)于遠(yuǎn)心段血管環(huán)作用最強(qiáng)，產(chǎn)生這種作用的機(jī)制