牛脾中RNA提取的工藝_第1頁
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文檔簡介

1、牛脾中RNA提取的工業(yè)化生產(chǎn) 生物0801班 劉清泉 王 琨1應(yīng)用前景 脾臟是機(jī)體重要的免疫器官，富含淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。其RNA無種屬特異性，可在不同種屬間交叉轉(zhuǎn)移免疫功能。利用脾臟提取的RNA可作為非特異免疫信息刺激并增強(qiáng)受體的免疫防御能力，并可促使癌細(xì)胞逆轉(zhuǎn)。臨床上主要用于治療免疫功能低下的疾病及呼吸道疾病、肺心病、慢性氣管炎、銀屑病、蕁麻疹，并可作為治療惡性腫瘤的輔助用藥。2生產(chǎn)主要原理以牛脾為原料，提取活性RNA，利用苯酚法提取，可以選用紫外掃描、凝膠電泳及HPLC對所得的制品進(jìn)行鑒定及含量測定。而本生產(chǎn)選用紫外吸收法來進(jìn)行RNA純度的檢測。檢測采用公式計(jì)算：3高效液相色譜法

2、比較：4生產(chǎn)過程（1）將細(xì)胞置于含有十二烷基磺酸鈉（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的中 ，加等體積水飽和酚，靜置一段時(shí)間，使形成上層水相和下層酚相。核酸溶于水相，被苯酚變性的蛋白質(zhì)或者溶于酚相，或者在兩相界面處形成凝膠層。5（2）采用的0.15mol/L 緩沖液系統(tǒng)可使大部分RNA-蛋白復(fù)合物解離，而DNA-蛋白復(fù)合物只有極少部分解離；用酚處理時(shí)DNA-蛋白復(fù)合物變性，在低溫條件下從水相中除去，這樣得到的RNA 制品中混雜的DNA-蛋白復(fù)合物極少。（3）用氯仿-異戊醇繼續(xù)處理RNA 制品，可進(jìn)一步除去其中少量的蛋白質(zhì)。最后用乙醇使RNA 從水溶液中沉淀出來。本法得到的RNA 不僅純度高，而且多呈自然狀態(tài)，可供繼續(xù)研究之用。 6生產(chǎn)的主要流程RNA-蛋白復(fù)合物解離。破碎細(xì)胞DNA-蛋白復(fù)合物變性氯仿-異戊醇繼續(xù)處理 沉淀靜置分層，取上層水相 成 品 RNA低溫處理十二烷基磺酸鈉、等體積水飽和酚0.15mol/L 緩沖液酚處理乙醇7生產(chǎn)所需主要

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