復(fù)方芩柏顆粒劑提取工藝的研究

1、復(fù)方芩柏顆粒劑提取工藝的研究【摘要】本文通過對(duì)大黃、延胡索的薄層色譜進(jìn)展比照，及對(duì)小檗堿、黃芩甙含量的測(cè)定，確定了分提法優(yōu)于混提法。并采用正交實(shí)驗(yàn)法考察了浸泡時(shí)間、加水量、加醇量、提取時(shí)間、乙醇濃度幾個(gè)因素，確定了水提與醇提的工藝條件?！娟P(guān)鍵詞】黃芩甙小檗堿分提混提正交實(shí)驗(yàn)復(fù)方芩柏顆粒劑由黃芩、黃柏、大黃等11味中藥組成。臨床用于痔瘡術(shù)后感染，療效滿意。為了將藥材中有效成分充分提出，進(jìn)步制劑的質(zhì)量，本文對(duì)該制劑提取工藝進(jìn)展了系統(tǒng)的研究。1儀器與試藥1.1儀器日本島津S-930雙波長薄層掃描儀，微量進(jìn)樣器10ul上海醫(yī)用激光儀器廠。uv-1型三用紫外分析儀，X-100超聲波清洗器。1.2試藥無水

2、乙醇，甲醇，95%乙醇，苯，氯仿，甲酸，冰醋酸，乙酸乙酯，正丁醇等均為分析純，鹽酸小檗堿，黃芩甙衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所。2提取工藝道路的選擇本制劑處方由11味中藥組成，其中黃柏、秦艽、玄胡、檳榔均含生物堿，澤瀉中有效成分為三萜類化合物，易溶于有機(jī)溶劑。而其中大黃、當(dāng)歸、防風(fēng)、生地、桃仁、黃芩中的有效成分能溶于水。又因大黃、黃芩等中藥中的有效成分呈酸性，而生物堿呈堿性，酸與堿易發(fā)生反響而沉淀，從而影響其中有效成分的浸出。為此，設(shè)計(jì)了混提與分提二種工藝道路進(jìn)展比照。2.1浸膏得率依處方比例稱取藥材，分別按上述分提與混提工藝制備干浸膏，并求出浸膏得率，結(jié)果見表1。表1二種工藝的浸膏得率2.2薄層色

3、譜比照2.2.1延胡索的檢識(shí)取混提樣品粉末3g，分提樣品粉末2.6g，各加濃氨水2l，放置密塞15in，加無水乙醇40l，超聲提取1h，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)勇确?l溶解，作為供試品溶液。取延胡索藥材5g同法制成對(duì)照藥材溶液，另取延胡索乙素，用氯仿制成每1l含水量0.5g的溶液，作為對(duì)照品溶液。汲取上述四種溶液各15ul，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板以0.5%-Na為粘合劑上，以石油醚醋酸乙醋21.7為展開劑。展開前先用氨蒸氣飽和15in，展開，取出，晾干，噴稀碘化鉍鉀溶液，結(jié)果顯示混提樣品中幾乎不能檢出延胡索生物堿成分，而分提樣品的生物堿成分的斑點(diǎn)那么十清楚顯，見圖1。2.2.2大黃的檢識(shí)取混提樣品

4、粉末2g，分提樣品粉末1.8g，加甲醇30l，超聲提取30in，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)?5l水溶解，再加鹽酸2l，置水浴中加熱30in，立即冷卻置冰箱中，用乙醚分二次萃取，每次20l，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?l溶解，作為供試品溶液。另取大黃對(duì)照藥材1.0g，同法制成對(duì)照品藥材溶液。取大黃素、大黃酚標(biāo)準(zhǔn)品，加甲醇制成每1l含0.5g的對(duì)照品溶液。汲取上述三種溶液各15l及大黃素、大黃酚的標(biāo)準(zhǔn)品溶液3ul點(diǎn)于同一硅膠G薄層板以0.5%-Na為粘合劑上，以石油醚6090-乙酸乙酯-甲酸1551，展開，取出，晾干。在365n紫外燈觀察，分提，混提樣品的薄層色譜無明顯差異，見圖2。2.3小檗堿、黃

5、芩甙浸出效率的比擬2.3.1小檗堿含量的測(cè)定取分提和混提浸膏粉末約0.5g，精細(xì)稱定，置25l容量瓶中，加20l無水EtH，浸泡入1h，超聲提取1.0h，加無水乙醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。用薄層掃描法測(cè)定小檗堿的含量，并計(jì)算浸出率，結(jié)果見表2。表2小檗堿浸出率2.3.2黃芩甙浸出率的測(cè)定取分提、混提樣品粉末約0.5g，精細(xì)稱定，置25l容量瓶中，加50%乙醇20l，浸泡1h，超聲1h，加50%乙醇，定容至刻度，搖勻，過濾，濾液作為供試品溶液，用薄層掃描法測(cè)定黃芩甙含量，并求出浸出率，結(jié)果見表3。表3黃芩甙浸出率轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4結(jié)果分析由薄層色譜比照可知，延胡索以分提效果較佳，

6、因分提所得斑點(diǎn)與單味藥材幾乎一樣，且斑點(diǎn)明晰明顯，而混提樣品幾乎不能檢出生物堿成分的斑點(diǎn)，說明生物堿類成分未被浸出。大黃的薄層色譜中，分提與混提未見明顯差異。從浸出率比照可知，分提工藝小檗堿的浸出率明顯大于混提工藝，但黃芩甙的浸出率分提與混提工藝無明顯差異，綜合上述分析可以認(rèn)為分提工藝優(yōu)于混提工藝。因此，選定分提工藝作為該制劑的提取工藝。3提取工藝條件的優(yōu)選3.1水提工藝條件的優(yōu)選3.1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)采用正交實(shí)驗(yàn)法，選定浸泡時(shí)間、提取時(shí)間、加水量三個(gè)因素作為考察對(duì)象，以黃芩甙浸出率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用L423正交表安排實(shí)驗(yàn)，所選因素程度見表4。表4因素程度表3.1.2試驗(yàn)方法取黃芩、大黃、當(dāng)歸、桃仁、

7、生地、防風(fēng)，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表的安排見表4，進(jìn)展提取，收取二次提取液，準(zhǔn)確濃縮至300l備用。黃芩甙的測(cè)定:精細(xì)汲取濃縮液5l，置于10l容量瓶中，再精細(xì)參加5l無水乙醇，搖勻，靜置，取上清液作為供試品溶液，用薄層掃描法測(cè)定黃芩甙的含量，并求出黃芩甙浸出率。3.1.3數(shù)據(jù)處理與結(jié)果分析對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)展處理，由直觀分析可知，因素對(duì)黃芩甙浸出率影響最大，其次為B、A。最正確工藝條件為A1B22，即浸泡0.5h，加水量分別為藥材的10、8倍量，煎提二次，提取時(shí)間分別為2.0、1.5h。3.2醇提工藝條件的優(yōu)選3.2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)采用正交試驗(yàn)法，選定加醇量，乙醇濃度，提取時(shí)間三個(gè)因素作為考察對(duì)象，以小檗堿浸

8、出率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用L423正交表安排試驗(yàn)，所選項(xiàng)因素程度見表5。表5因素程度表3.2.2實(shí)驗(yàn)方法取黃柏、秦艽、延胡索、澤瀉、檳榔按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表的安排見表5進(jìn)展提取，搜集二次提取液，準(zhǔn)確濃縮至300l，備用。小檗堿含量的測(cè)定:精細(xì)汲取上清液10l，濃縮至5l，作為供試品溶液，用薄層掃描法測(cè)定小檗堿的含量，并求出小檗堿浸出率見表6。3.2.3數(shù)據(jù)處理與結(jié)果分析對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)展處理見表6，由直觀分析可知，因素對(duì)小檗堿浸出率影響最大，其次為A、B。最正確工藝條件為A2B12即用95%乙醇為溶媒，浸泡12h，加熱回流提取二次，加醇量分別為藥材的8、6倍量，提取時(shí)間分別為2.0、1.5h。表64小結(jié)與討論4.1芩柏顆粒劑由11味中藥組方制劑而成，根據(jù)它們各自所含的成分不同，水溶性、醇溶性的不同，以及酸與堿易發(fā)生反響而影響有效成分的浸提，從而將它們分成兩組，分開進(jìn)展提齲薄層色譜及小檗堿、黃芩甙浸出率均顯示分提優(yōu)于混提。4.2正交試驗(yàn)結(jié)果說明，水提工藝的最正確工藝條件為A