農(nóng)殘文獻(xiàn)綜述

1、 氣相色譜-質(zhì)譜法同時(shí)測定茶葉中有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量胡飛(安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)研究生學(xué)院學(xué)號14720798)摘要：本文建立了茶葉中有機(jī)氯農(nóng)藥、有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的氣相色悴質(zhì)譜(GC-MS)分析方法。優(yōu)化色譜條件，采用選擇離子監(jiān)測(SIM)模式進(jìn)行質(zhì)譜檢測。該方法的回收率范圍為65.3%142.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.0%20.6%(n=6)。以信噪比RSN=3計(jì)算各農(nóng)藥的最低檢出限為0.010.08mg/kg范圍。相對于國內(nèi)外研究現(xiàn)狀，該方法結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，滿足茶葉中多種農(nóng)藥殘留檢測要求。大量實(shí)際樣品的檢測結(jié)果表明,此方法適于出口茶葉中農(nóng)藥殘留檢測實(shí)際工作的需要。關(guān)鍵詞：氣相色譜-質(zhì)譜法；茶葉；

2、農(nóng)藥殘留；有機(jī)磷；有機(jī)氯1前言“民以食為天，食以安為先”，食品安全問題是關(guān)系到人類健康和國計(jì)民生的重大問題，作為食品的茶葉不僅是我國人民喜愛的一種主要消費(fèi)飲料，而且也是我國一項(xiàng)傳統(tǒng)的大宗出口農(nóng)產(chǎn)品12。目前世界上有160多個(gè)國家有飲茶的習(xí)慣，被譽(yù)為“東方文明象征”的茶在西方正在發(fā)出絢麗的光彩。隨著茶葉出口數(shù)量的不斷增加，內(nèi)需的不斷擴(kuò)大，對茶葉質(zhì)量安全也提出了更高的要求34。近幾年來，隨著無公害食品行動計(jì)劃的實(shí)施，各級政府對食品安全的高度重視，正加大力度禁止在茶葉中使用高毒、高殘留農(nóng)藥，扶持龍頭企業(yè)加速茶葉加工廠的改造，來提高我國茶葉質(zhì)量安全水平。茶葉是直接泡飲的食品，其衛(wèi)生質(zhì)量與人類健康息息相

3、關(guān)。近年來，為限制濫用農(nóng)藥，維護(hù)人民利益，國內(nèi)外市場都加強(qiáng)了對茶葉衛(wèi)生質(zhì)量的監(jiān)測，對茶葉中的各類農(nóng)藥殘留也提出了越來越苛刻限量要求。茶葉作為我國傳統(tǒng)的經(jīng)濟(jì)作物和出口商品，近幾年隨著出口貿(mào)易量的不斷增長，貿(mào)易技術(shù)問題也不斷涌現(xiàn)，農(nóng)藥殘留問題尤為突出。有機(jī)磷農(nóng)藥是茶葉種植戶經(jīng)常使用的一種殺蟲劑，由于價(jià)格便宜，殺蟲效果好，被廣泛使用。隨著人們生活質(zhì)量的提高和我國對外貿(mào)易的擴(kuò)大,茶葉的安全衛(wèi)生越來越受到人們的重視,已經(jīng)成為國際貿(mào)易中的技術(shù)焦點(diǎn)。但是我國茶葉農(nóng)藥殘留超標(biāo)問題嚴(yán)重,歐盟已將我國列入農(nóng)藥殘留量或潛在水平較高的國家之一,并加大了從我國進(jìn)口茶葉的監(jiān)控56。通過調(diào)查發(fā)現(xiàn),由于暖冬時(shí)常發(fā)生,蟲害加大

4、,一些農(nóng)民更愿意使用高毒高殘留的農(nóng)藥,這樣一方面可以降低農(nóng)藥的購買成本,另一方面也降低了施藥的頻度,節(jié)約了勞動力。在我國加入世界貿(mào)易組織后,除了采取必要的農(nóng)業(yè)措施,降低茶樹、土壤和灌溉水中的農(nóng)藥殘留量,還需發(fā)展茶葉中農(nóng)藥殘留的快速檢測方法,特別是一些禁止使用在茶葉中的高毒高殘留的農(nóng)藥,來適應(yīng)世界貿(mào)易市場和我國人民的需要。另外許多國家制定了茶葉中農(nóng)藥殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)，歐盟所頒布的農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)涉及茶葉指標(biāo)的目前已達(dá)189種，一些農(nóng)藥指標(biāo)的設(shè)置，已降為原有指標(biāo)的1%10%，更有超過85%的指標(biāo)采用儀器檢測低限作為標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，即要求分析儀器不得檢出，日本在2006年6月開始實(shí)施的新食品衛(wèi)生法，不僅將茶葉設(shè)

5、限農(nóng)藥數(shù)量增加到214種，還規(guī)定設(shè)限外的500多種農(nóng)藥殘留以“一律標(biāo)準(zhǔn)”嚴(yán)格要求，即統(tǒng)一以0.Olmg/kg為限量，同時(shí)將檢測茶湯的方法由原先采用的茶湯檢測法，修改為更嚴(yán)格的試劑直接提取干茶法。農(nóng)藥殘留量問題一直受到國內(nèi)外的普遍關(guān)注，并成為制約我國茶葉及其制品出口的主要問題。如何通過檢測，更快、更有效地控制農(nóng)藥殘留的問題是打破貿(mào)易壁壘的關(guān)鍵，為提高農(nóng)產(chǎn)品中有機(jī)磷殘留檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和保障人民健康及各國的正常貿(mào)易，如何檢測出茶葉中有機(jī)磷農(nóng)藥就顯得尤為重要。2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀2.1有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥殘留前期處理方法農(nóng)藥殘留分析方法通常包括樣品前處理和檢測兩部分，樣品的前處理技術(shù)是農(nóng)藥殘留分析的基礎(chǔ)與

6、關(guān)鍵，具有濃縮被測的痕量組分、提高方法靈敏度及去除干擾物質(zhì)的作用。近年來,新的前處理技術(shù)不斷推出和應(yīng)用,既節(jié)省了分析時(shí)間,提高了工作效率,也使整個(gè)分析過程更趨綠色環(huán)保。這些新的前處理技術(shù)包括超臨界流體萃取技術(shù)、固相萃取技術(shù)、固相微萃取技術(shù)、攪拌棒吸附萃取技、基質(zhì)固相分散技術(shù)、液相微萃取技術(shù)以及分散液相微萃取技術(shù)等。211超臨界萃取技術(shù)(SFE)超臨界萃取技術(shù)(supercriticalfluidextraction,SFE)是用超臨界液體作為萃取劑，根據(jù)樣品中組分在不同壓力和溫度條件下溶解能力變化的性質(zhì)，通過改變萃取劑流體的壓力,從而將不同組分萃取出來。其最大優(yōu)點(diǎn)是使用CO2等流體代替有機(jī)溶劑

7、，對人體無害、綠色環(huán)保,且有效地防止了熱敏性物質(zhì)的氧化和逸散,提高了樣品回收率。因而較適合于萃取熱不穩(wěn)定物質(zhì)和有毒化合物7叫D.H.Kim等已將SFE用于萃取面粉里的有機(jī)磷和有機(jī)氯殘留，避免了樣品濃縮和分析過程的干擾，提高了萃取速度,60min有7g的樣品萃取量，且聯(lián)用GC-NPD分析后，檢測限低至10ng/g。SFE是多種農(nóng)藥殘留分析中比較有前景的一個(gè)方法，十幾年來有了長足的發(fā)展,但該方法對羥基基團(tuán)的萃取稍顯困難且常規(guī)分析應(yīng)用還較少。212固相萃取技術(shù)(SPE)固相萃取技術(shù)(solidphaseextraction,SPE)基于液-固分配原理，利用固體吸附劑將液體中的農(nóng)殘化合物吸附，然后用洗

8、脫液淋洗，富集目標(biāo)化合物進(jìn)行分析。該技術(shù)高效、可靠、消耗試劑少，且技術(shù)成熟，應(yīng)用廣泛，是目前國內(nèi)外有機(jī)磷和有機(jī)氯殘留分析樣品前處理中的主流技術(shù)9，使許多復(fù)雜的樣品處理難題迎刃而解。但該方法使用的裝置較貴，操作繁瑣，不同批次生產(chǎn)的SPE裝置重現(xiàn)性差且樣品用量較大。213固相微萃取技術(shù)(SPME)固相微萃取技術(shù)(solid-phasemicroextraction,SPME)，是在1990年首次提出的，1994年即被應(yīng)用在農(nóng)藥檢測中。SPME是在SPE的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，集采樣、萃取、濃縮、進(jìn)樣于一體的綜合技術(shù)。其原理是將涂有聚合物(固定相)的熔融石英纖維伸進(jìn)樣品基質(zhì)或懸于樣品上方的頂空體中，目標(biāo)

9、化合物被吸附在固定相上，經(jīng)解析后直接測定10。它與SPE相比，不使用有機(jī)溶劑為萃取劑，操作簡便，只需幾分鐘即可完成目標(biāo)物萃取，與GC聯(lián)用可測定血液等微量樣品中的有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)殘，檢測限低至ng/g級。214攪拌棒吸附萃取技術(shù)(SBSE)攪拌棒吸附萃取(Stirbarsportiveextraction,SBSE)是由荷蘭教授E.Baltussen等人于1999年提出的比較符合環(huán)保要求的萃取技術(shù)。其原理與SPME相似，是將涂有聚二甲基硅氧烷(PDMS)固定相的磁性攪拌棒直接伸進(jìn)樣品中攪拌并萃取30240min后,去除攪拌棒上的水分，經(jīng)專用的熱解析裝置解析，聯(lián)用色譜或質(zhì)譜分析。該技術(shù)簡單、高效，

10、無溶劑，不會造成二次污染，與纖維針式固相微萃取(F-iber-SPME)相比，SBSE的萃取固定相體積和靈敏度提高了50250倍，所以更適合痕量有機(jī)物的萃取富集。但由于SBSE使用了更多的固定相，因而也需更長的時(shí)間吸附溶質(zhì)。近年來，該技術(shù)在環(huán)境、生物及農(nóng)殘等樣品分析中都取得了良好的效果。在與SPME的對比中，SBSE被推薦為更適合萃取蜂蜜等高粘性樣品中有機(jī)磷的方法。C.Blasco等11萃取分析了15種商業(yè)蜂蜜中包括地蟲磷在內(nèi)的6種有機(jī)磷殘留，結(jié)果顯示SBSE的精密度和靈敏度分別是SPME的510倍及1050倍。最近，已有文獻(xiàn)研究新的固定相應(yīng)用于SBSE，但目前商品化的只有GestelGmbH

11、公司的PDMS固定相一種。因此，開發(fā)更多可商品化的固定相涂料應(yīng)用于該技術(shù)將是未來研究的方向之一。2.1.5基質(zhì)固相分散技術(shù)(MSPD)基質(zhì)固相分散(matrixsolid-phasedispersion，MSPD)是一種特殊的固相萃取技術(shù)。自1989年由Barker教授12首次提出以來便成為萃取果蔬、牛奶和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯農(nóng)殘的有效手段。其原理是將試樣直接與適量吸附劑(如C18)研磨、混勻制成半固態(tài)物質(zhì)裝柱，然后用有機(jī)溶劑洗提、分離待測物進(jìn)行測定。該方法成功避免了液-液分配中出現(xiàn)的乳化現(xiàn)象以及樣品損失，節(jié)約溶劑,污染少，且與其它一些分離、檢測方法有良好的兼容性。在檢測高脂肪和高粘性雞蛋樣品

12、里的有機(jī)磷等農(nóng)殘時(shí)，采用C18作為吸附劑研磨,乙酸乙酯和乙腈為洗脫液的MSPD前處理方法，通過GC-QqQ-MS/MS準(zhǔn)確定量和定性，結(jié)果表明該方法檢測種類高達(dá)57種,樣品分離僅需17.70min,同時(shí)避免了傳統(tǒng)萃取時(shí)待測物的損失。由于MSPD技術(shù)可對固體、半固體或粘性液體樣品中目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行萃取且易自動化，因此可以預(yù)見該技術(shù)在現(xiàn)代農(nóng)殘檢測的應(yīng)用將會越來越廣泛。216液相微萃取技術(shù)(LPME)液相微萃取(Liquid-phasemicroextraction,LPME)也稱溶劑微萃取(solventmicroextraction,SME),是1996,Jeannot等在改進(jìn)液液萃取(LLE)的基

13、礎(chǔ)上，最先提出的一種前處理技術(shù)。一般來說，液相微萃取有兩種模式，一種是直接液相微萃取(DI-LPME),另一種是頂空液相微萃取(HS-LPME)。直接微萃取是將掛在微量進(jìn)樣器上的有機(jī)溶劑滴浸入水樣中，待測物通過擴(kuò)散進(jìn)入有機(jī)溶劑,過了設(shè)定時(shí)間后將液滴抽回注射器，直接注入GC分析,不需任何預(yù)處理和提純。頂空液相微萃取與直接微萃取的操作基本類似，所不同的是進(jìn)樣器上的有機(jī)溶劑液滴是懸于密封瓶中水樣的上方。LPME具有簡單、低廉和使用溶劑少，易與GC、HPLC或LC-MS直接聯(lián)用等優(yōu)點(diǎn)。Khalili-Zanjani等應(yīng)用LPME-GC-FPD萃取、檢測了水樣中的9種有機(jī)磷殺蟲劑，在最佳條件下，方法的的

14、檢出限為0.010.04mg/L,基體加標(biāo)回收率為96%104%。此外，利用室溫離子液體代替有機(jī)溶劑，結(jié)合LPME技術(shù)分析環(huán)境中的有機(jī)磷等污染物，取得了低的檢測限和良好回收率，拓展了LPME的應(yīng)用范圍。2.1.7分散液相微萃取技術(shù)（DLLME）分散液相微萃取（dispersiveliquid-liquidmicroextraction,DLLME）由M.Rezaee等14于2006年首次提出，其原理與LPME相同，是對LPME的改進(jìn)和發(fā)展。目的是為了解決待測物損失、縮短樣品處理時(shí)間等問題。研究人員把少量的有機(jī)分散劑加入到有機(jī)萃取劑中一起混合快速地注入水樣形成乳濁液，水樣中的待測物被分散的有機(jī)萃

15、取劑富集,經(jīng)過幾分鐘的離心分層，用微量進(jìn)樣器吸取萃取溶劑直接注入GC或HPLC進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)證明，分散液相微萃取需要的萃取溶劑非常少，與SPME等相比，萃取時(shí)間更短，只需幾分鐘卻對萃取結(jié)果毫無影響,同時(shí)溫度和鹽濃度也對萃取結(jié)果幾乎不產(chǎn)生影響。分散劑的選擇對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的影響,但并不顯著，唯一具有影響的是萃取劑的選擇。因此,DLLME只適用于親脂性高或中等的分析物（K500）,對于高度親水的中性分析物，是不適用的;而對于具有酸堿性的分析物，可通過控制樣品溶液的pH值使分析物以非離子化狀態(tài)存在，從而提高分配系數(shù)。目前，該技術(shù)應(yīng)用于水樣中有機(jī)化合物以及農(nóng)殘的萃取分析較為普遍。選取氯苯為萃取劑，丙酮

16、為分散劑,結(jié)果只需5mL的樣品量及少于3min的提取時(shí)間便可萃取水中13種有機(jī)磷殘留，檢測限更低至3pg/mLE.C.Zhao等將DLLME運(yùn)用范圍擴(kuò)展到食品行業(yè)，用于萃取西瓜和黃瓜的有機(jī)磷殘留,結(jié)果表明回收率為67%111%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2%9%。該技術(shù)已成為前處理技術(shù)領(lǐng)域新的研究熱點(diǎn)，引起農(nóng)藥殘留分析界的高度關(guān)注。218超聲波輔助提取法超聲波提取法就是利用超聲波來加速物質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)、或啟動新的反應(yīng)途徑、或改善其溶解能力等物理化學(xué)性能，以提高化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)率、或獲得新的化學(xué)反應(yīng)物質(zhì)、或提高物質(zhì)的分離提取效率。超聲波提取法在提取過程中產(chǎn)生的沖擊波能直接反復(fù)高頻沖擊食品，破壞食品和農(nóng)藥的表面吸附，

17、加速農(nóng)藥在提取液中的溶解和擴(kuò)散，這大大縮短了分析測試的時(shí)間，加快了分析的速度，提高了農(nóng)藥殘留的提取率。超聲波輔助提取法已在食品的農(nóng)殘分析中得到廣泛應(yīng)用，杜曉剛等將超聲波提取-吸附分離的預(yù)處理技術(shù)用于氣相色譜法檢測茶葉中的農(nóng)藥殘留，經(jīng)試驗(yàn)表明該方法回收率高，靈敏度高。夏瀟瀟等15采用超聲波萃取LC-MS-MS分析技術(shù)對葉菜中28種農(nóng)藥殘留建立了快速檢測方法，回收率為83.6%98.7%。魏俊嶺等對比超聲波提取與其他傳統(tǒng)提取法在氣相色譜法測定蔬菜中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留，結(jié)果表明，超聲波提取法回收率達(dá)到82.8%-110.2%,回收率高于震蕩提取和索式提取。2.1.9其他處理方法除了上述常用方法外還有凝膠

18、滲透色譜技術(shù)（GPC）、微波輔助萃取技術(shù)（MAE）、加速溶液萃?。ˋSE）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、索氏提取等。2.2有機(jī)磷和有機(jī)氯分析方法有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥的測定方法有酶抑制法、生物傳感器法、分光光度法、比色分析法、電化學(xué)法和色譜法等。由于有機(jī)磷在茶葉中含量很低，屬于痕量級。所以對方法的靈敏度等的要求比較高。酶抑制法酶抑制法主要是根據(jù)有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酯酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，使昆蟲中毒致死的毒理學(xué)原理來檢測農(nóng)藥殘留16。利用農(nóng)藥對膽堿酯酶的抑制作用，加入特定顯色劑，通過顏色深淺的變化確定是否有農(nóng)藥殘留及其相對量。按膽堿酯酶分解底物和采

19、用儀器不同，常分為酶抑制率測定法和速測卡法兩種。酶抑制率測定法，利用農(nóng)藥對膽堿酯酶的抑制作用與農(nóng)藥殘留量成正相關(guān)，膽堿酯酶催化水解物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用速測儀在410nm等特定波長處測定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率并依此判別樣品中是否有農(nóng)藥殘留。目前市場上速測儀產(chǎn)品眾多，有2、4、8、10、24、36、96通道等多種，大多是由分光光度計(jì)在結(jié)果計(jì)算功能上進(jìn)行改進(jìn)的專用農(nóng)殘速測儀。使用的膽堿酯酶以乙酰膽堿酯酶（AChE）和乙酰膽堿酯酶（BChE）為主，用抑制率判定超標(biāo)與否。該方法用簡單方便，可直接顯示檢測結(jié)果，也可通過數(shù)據(jù)管理軟件上傳檢測數(shù)據(jù)，是目前省市和縣區(qū)質(zhì)檢單位日常檢測的主要

20、速測儀器。速測卡法（紙片法），將膽堿酯酶和淀粉乙酸酯固化在卡片上，利用膽堿酯酶催化水解淀粉乙酸酯（紅色）為乙酸和淀粉（藍(lán)色），有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶的催化有抑制作用，使催化、水解、變色過程發(fā)生改變，從而判斷樣品中是否有農(nóng)藥殘留存在，使用的膽堿酯酶以AChE為主17。該方法常使用部分專用速測儀進(jìn)行酶反應(yīng)等操作，可用肉眼進(jìn)行顏色的辨認(rèn)以判斷超標(biāo)與否，其操作簡單、使用方便，靈敏度比酶抑制率測定法低，因此適用于生產(chǎn)基地、農(nóng)貿(mào)市場以及超市的一般性監(jiān)測篩查。生物傳感器法生物傳感器通常是利用生物活性物質(zhì)（如酶、抗原、抗體、細(xì)胞、組織等）作為傳感器的識別元件，當(dāng)活性物質(zhì)與樣品中的待測物發(fā)生特異性反

21、應(yīng)（如發(fā)光、發(fā)熱、顏色變化、形成復(fù)合物等）時(shí)，產(chǎn)生的光、熱等可以通過信號轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柡凸庑盘柕?，由檢測器經(jīng)過分析處理，實(shí)現(xiàn)對待測物的定性和定量檢測。目前常見的有酶生物傳感、免疫生物傳感器、微生物傳感器、細(xì)胞傳感器等，按信號轉(zhuǎn)化器的不同又可分為化學(xué)傳感器、光導(dǎo)纖維生物傳感器、半導(dǎo)體生物傳感器、熱生物傳感器、表面等離子體共振生物傳感器等。酶生物傳感器是利用有機(jī)磷農(nóng)藥與乙酰膽堿酯酶的活性部位發(fā)生不可逆的鍵合從而抑制酶活性，酶反應(yīng)產(chǎn)生的pH值變化由電位型生物傳感器檢測1819。免疫生物傳感器是利用抗體和抗原之間的特異性結(jié)合所產(chǎn)生的免疫化學(xué)反應(yīng)，微生物傳感器則是利用細(xì)菌、放線菌和真菌等微生物活細(xì)胞

22、的代謝功能制成傳感器檢測污染物。表面等離子體共振（SPR）生物傳感器是利用在金屬和電介質(zhì)界面處入射光場在適當(dāng)?shù)臈l件（能量與動量匹配）下引發(fā)金屬表面的自由電子相干振蕩的一種物理現(xiàn)象，可分為棱鏡耦合復(fù)合結(jié)構(gòu)SPR傳感器和光纖SPR傳感器。例如，可以將已知的生物分子固定在5nm的Au膜表面，加入與其互補(bǔ)的目標(biāo)生物分子，兩者結(jié)合將使Au膜與溶液界面的折射率上升，依據(jù)共振角改變程度對互補(bǔ)的目標(biāo)生物分子進(jìn)行定量檢測。生物傳感器已在環(huán)境監(jiān)測、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，其操作方便、靈敏度高、反應(yīng)時(shí)間短、儀器自動化程度高，是一種發(fā)展迅速的在線快速檢測方法。但目前生物傳感器技術(shù)在農(nóng)殘檢測方面還存在穩(wěn)定性和重現(xiàn)

23、性差、使用壽命短等尚未解決的技術(shù)問題，短時(shí)期內(nèi)還無法廣泛應(yīng)用于農(nóng)殘檢測中。分光光度法分光光度法是較早用于有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥殘留測定的方法之一。由于在分光光度法的操作過程中沒有分離步驟，因此目標(biāo)化合物顏色反應(yīng)的特異性便成為其定量分析的主要手段。將經(jīng)過前處理的樣品在堿性條件下水解，產(chǎn)生磷酸鹽，在一定酸度條件下能和鉬酸銨反應(yīng)，產(chǎn)生磷鉬雜多酸，回入還原劑氯化亞錫時(shí)，磷鉬雜多酸變成藍(lán)色絡(luò)合物，用分光光度計(jì)進(jìn)行測定。近年來分光光度法主要集中在西維因分析上，并且對不同的樣品前處理技術(shù)、不同的耦合試劑或不同的波長條件下的測定進(jìn)行了研究。分光光度法用于農(nóng)藥殘留量測量，要求進(jìn)行必要的樣品富集以提高靈敏度，同時(shí)操作

24、煩瑣，易受其他物質(zhì)，現(xiàn)已經(jīng)很少使用。2.2.4氣相色譜法（GC）氣相色譜是農(nóng)殘分析中最常見的方法之一，常用于氣相色譜法的檢測器主要有電子捕獲檢測器（ECD）、熱導(dǎo)檢測器（TCD）、氫火焰離子化檢測器（FID）、氮磷檢測器/堿火焰離子化檢測器（NPD/AFID）、原子發(fā)射檢測器（AED）等。有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥不能進(jìn)行分離檢測。因此，在實(shí)際操作中，將有機(jī)磷農(nóng)藥水解，或通過衍生反應(yīng)提高有機(jī)磷農(nóng)藥的熱穩(wěn)定性，達(dá)到GC對有機(jī)磷農(nóng)藥的測定的要求。方法快速、簡便、準(zhǔn)確，具有良好的通用性。遺憾的是，學(xué)校沒有NPD的檢測器。2.2.5氣相色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用（GC/MS）GC/MS是將氣相色譜儀和質(zhì)譜儀串聯(lián)起來，成

25、為一個(gè)整機(jī)使用的檢測技術(shù)。它既有氣相色譜的高分離性能，又具有質(zhì)譜準(zhǔn)確鑒定化合物結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，可達(dá)到同時(shí)定性、定量的目的，氣相色譜一離子捕獲質(zhì)譜法（GCITMs）是一種多殘留檢測方法，可用來檢測土壤中的有機(jī)磷等一些污染物20。氣相色譜一化學(xué)電離質(zhì)譜法（GCCIMS）可用來分析水果、蔬菜中多種致癌農(nóng)藥殘量GC/MS可以減少物的影響，提高食品的靈敏度。GC/MS法不僅根據(jù)樣品中待測組分在圖譜上的保留時(shí)間，更主要是根據(jù)在此保留時(shí)間內(nèi)殘留農(nóng)藥裂解的特征離子碎片原理，由質(zhì)譜儀按其分子量和分子結(jié)構(gòu)對農(nóng)藥準(zhǔn)確定性分析，并以此作為定量的依據(jù)，從而克服了由于未凈化掉的雜質(zhì)峰與農(nóng)藥保留時(shí)間重疊而造成將雜質(zhì)峰誤碼判為農(nóng)

26、殘的缺點(diǎn)。雖然GC/MS具有高的分享和確認(rèn)能力，但對于穩(wěn)定性差的化合物的分析卻存在一些困難。GC/MS技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測中已經(jīng)有許多成功的實(shí)例。萬益群21等用氣質(zhì)聯(lián)用測定土壤中12種有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留分析方法，該方法對0.1ug.mL-1和0.5ug.mL-12個(gè)嘗試添加水平的回收率分別為70.1119.0%和78.1119.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為6.309.80和5.208.23.劉芃巖等22大米中多種殘留農(nóng)藥的萃取氣相色譜質(zhì)譜分析。該方法簡便、快速、靈敏，能夠滿足同時(shí)測定大米中多種農(nóng)藥殘留的要求，可以作為大米中農(nóng)藥多殘留的例行分析和確證分析的方法。2.2.6高效液相色譜法（HP

27、LC）從1977年第一次采用HPLC柱后衍生測定有機(jī)磷農(nóng)藥殘留以來，采用HPLC柱后水解或柱后衍生方法對復(fù)雜介質(zhì)中有機(jī)磷農(nóng)藥的殘留量進(jìn)行檢測越來越普遍。有機(jī)磷農(nóng)藥的HPLC檢測大多數(shù)米用反相C18或C8柱，常用的流動相為甲醇一水或乙腈一水。早期常用的檢測手段是紫外檢測器（UV）。一般說來，高效液相色譜法的檢出限比氣相色譜的要高。HPLC對于氣相色譜法不能分析的高沸點(diǎn)或熱不穩(wěn)定的農(nóng)藥可以進(jìn)行有效的分享檢測與GC相經(jīng)HPLC的流動相參與分離機(jī)制，其組成、比例和PH值可以靈活調(diào)節(jié)，這樣更有利于分離。此法干擾性強(qiáng)、柱效高、分離能力強(qiáng)、安全率高、準(zhǔn)確度和精密度好。2.2.7液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC/M

28、S）LC/MS可首先由色譜將待測混合物進(jìn)行分離，再由質(zhì)譜檢測器檢測，依次得到化合物的分子、離子及碎片信息，質(zhì)譜數(shù)據(jù)用作化合物的確證鑒定，此過程不僅可以得到更有意義的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，而且可以在一定程度上排除基質(zhì)的干擾，克服離子抑制，優(yōu)化質(zhì)譜檢測信號。LC/MS技術(shù)是殘留分析的理想檢測手段。對于需要高靈敏度、寬適用范圍、復(fù)雜基質(zhì)的多殘留特快速篩選工作而言，液質(zhì)聯(lián)用無疑是首選的最佳檢測手段23。HPLC/MS不僅具有良好的分享和確認(rèn)能力，并且能對熱不穩(wěn)定化全物進(jìn)行更好的分析，因此HPLC/MS無疑是一個(gè)分析有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的解決辦法。2.2.8其他分析方法在農(nóng)藥殘留分析中還有活體生物檢測法、免疫分析法、化學(xué)

29、計(jì)量法、比色卡法等23。農(nóng)藥殘留分析的發(fā)展趨勢隨著人們對環(huán)境保護(hù)和安全衛(wèi)生意識的提高，農(nóng)殘檢測要求也越來越高。色譜分析由于其高效能的色譜柱可將各組分或雜技分離，高靈敏度和專一性強(qiáng)的檢測器解決了早期不能檢出的微量農(nóng)藥、代謝物和降解產(chǎn)物的分析，在農(nóng)殘的檢測領(lǐng)域運(yùn)用越來越普遍，幾乎已經(jīng)代替了原來的化學(xué)法、比色法和生物測定法。利用高靈敏度和高精密度分析食品及其在線聯(lián)用技術(shù)來分析農(nóng)藥殘留成為了必然趨勢。在樣品的制備和前處理方面也呈現(xiàn)出微量化、自動化、無毒化、快速化和低成本的趨勢24。國外的農(nóng)藥殘留方面的非常嚴(yán)格，并且有相應(yīng)在的標(biāo)準(zhǔn)，相比這下，中國在這方面還較薄弱。因此應(yīng)該盡快制定各行業(yè)殘留標(biāo)準(zhǔn)，盡量減少

30、有機(jī)磷農(nóng)藥施用量，完善農(nóng)殘檢測體系。茶葉中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測定可以用乙腈作為提取劑，超聲波萃取作為前處理，用氣相與質(zhì)譜聯(lián)用來檢測。結(jié)論茶葉樣品前處理方法和技術(shù)已經(jīng)成為農(nóng)藥痕量分析進(jìn)一步發(fā)展的瓶頸，尋找準(zhǔn)確高效的前處理方法一直是國際農(nóng)產(chǎn)品和食品安全研究領(lǐng)域的一個(gè)重要課題。目前我國對出口茶葉農(nóng)藥殘留的檢測方法主要是采取浸漬法或均質(zhì)器提取法提取，固相萃取小柱凈化，氣相色譜法進(jìn)行測定。但是茶葉中雜質(zhì)多，傳統(tǒng)的樣品前處理法存在操作復(fù)雜，過柱耗時(shí)長，成本高等缺陷，不能滿足大批量樣品快速檢測的要求。因此，尋求檢測時(shí)間短、靈敏度高、選擇性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、操作簡單的茶葉農(nóng)殘分析技術(shù)，特別是對甲胺磷、乙酰甲胺磷、三

31、唑磷等一些高毒高殘留的茶葉農(nóng)藥殘留的檢測具有重要的意義。本論文的目的是尋找一種能對茶葉中甲胺磷、乙酰甲胺磷、久效磷等有機(jī)磷農(nóng)殘留進(jìn)行定性、定量分析的最佳方法。參考文獻(xiàn)劉韶光，蔣顧偉,羅國武茶葉農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)概述J茶葉通訊,2006,32:14-18.ZhiQiangHuang,YongJunLi,BoChenaeta1.Simultaneousdeterminationof102pesticideresiduesinChineseteasbygaschromatography-massspectrometerJ.JournalofChromatographyB,2007,853:154-162.吳洵對現(xiàn)行有機(jī)茶行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的幾點(diǎn)看法和建議J茶葉,2005,31:153-155.魯成銀無公害茶葉質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)體系J.茶葉,2004,30(4):187-189.陳石榕對歐盟茶葉農(nóng)藥殘留新標(biāo)準(zhǔn)的思考J.農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化,2000,7:28-291.楊揚(yáng),金鳳明，杜曉剛，等.對堿浸法離子選擇電極測定茶葉中氟含量方法的改進(jìn)J.蘇工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào),2004,16(4):33-351.陳紅平，劉新，汪慶華，等氣相色譜)串聯(lián)質(zhì)譜法測定茶葉中88種農(nóng)藥殘留量J.色譜,2011,29(5):409-416.邱月明,溫可可,白樺