APE1在肝細胞癌組織芯片的表達及臨床病理

1、APE1在肝細胞癌構造芯片的表達及臨床病理【摘要】目的探究脫嘌呤/脫嘧啶核酸內切酶1(ape1)基因在原發(fā)性肝細胞癌(h)的表達及其與臨床病理變革的干系。要領應用免疫構造化學要領,檢測包羅h及轉移灶、癌旁肝硬化構造、癌旁慢性肝炎構造和正常肝構造的構造芯片中ape1的表達環(huán)境,團結臨床病理資料舉行統(tǒng)計闡發(fā)。效果ape1在癌旁肝硬化構造、癌旁慢性肝炎構造和正常肝構造以細胞核表達為主,在h和轉移灶構造以細胞質細胞核團結表達為主(p0.01)。細胞質與細胞核染色強度均與h分級和轉移嚴密相干(p0.01),細胞質染色強度還與腫瘤包膜有無浸潤有關(p0.01)。結論ape1卵白表達與h惡性表型有關,ape

2、1卵白過表達及細胞質表達的出現(xiàn)大概成為h預后不良的指標之一?！娟P鍵詞】癌,肝細胞;內切核酸酶類;芯片闡發(fā)技能;免疫構造化學;預后expressinfape1anditslinialipliatininhepatelluararinausingtissuehipassayzhengzhihua,huangaiin,liujingfeng,zangshengbin,galingyun,henshuiping1.divisinfpathlgy,shlfbasiedialsiene,institutefnlgy,fujianedialuniversity,fuzhu350004,hina2.depar

3、tentfsurgery,theaffiliatedfirsthspital,fujianedialuniversity,fuzhu350005,hinakeyrds:arina,hepatelluar;endnuleases;irhipanalytialpredures;iunhistheistry;prgnsis肝細胞癌(hepatellulararina,h)是我國最常見的惡性腫瘤之一,其癌變是一個多步調的漸進歷程,與慢性肝臟損傷、肝炎和肝硬化有關。脫嘌呤/脫嘧啶核酸內切酶1(ape1)是一種多成效的堿基切除修復途徑的關鍵酶,具有脫嘌呤/脫嘧啶位點(ap位點)核酸內切酶(ape)活性,修

4、復烷化劑、氧自由基、電離輻射等因素產(chǎn)生的dna損傷。ap位點是dna最常見的損傷位點之一,具有細胞毒性和基因毒性,假設不克不及修復,可攔阻dna的復制,導致基因突變、染色體微衛(wèi)星不不變性或細胞凋亡,終極可導致腫瘤的產(chǎn)生。ape1別名氧化還緣故原由子1(ref-1),可調治很多轉錄因子的dna團結活性,到場細胞增殖、分化和細胞凋亡等多種關鍵的細胞反響。筆者接納構造芯片技能檢測ape1在h、轉移灶中的表達環(huán)境,闡發(fā)ape1表達與h臨床病理因素的干系。1工具與要領1.1工具網(wǎng)絡福建醫(yī)科大學隸屬第一病院19982022年手術切除標本,此中h126例,癌旁肝硬化構造(距癌構造2,鏡下無癌)95例,癌旁慢

5、性肝炎構造(距癌構造5)46例,肝表里轉移灶29例,術前均未化療及放療。男性114例,女性10例,60歲28例,60歲96例。根據(jù)?中國常見腫瘤診治范例?對腫瘤舉行構造學分類:梁狀型、假腺管型、實體型、硬化型。根據(jù)edndsn構造學分級法舉行病理學分級分為i級,并斷定有無包膜癌浸潤和產(chǎn)生肝表里轉移。根據(jù)腫瘤巨細和數(shù)目分為3組:腫瘤直徑3,腫瘤直徑35,腫瘤數(shù)目2個或直徑5。另網(wǎng)絡正常肝構造5例,泉源于1998-2022年福建醫(yī)科大學隸屬第一病院手術切除的肝血管瘤的瘤旁肝構造。1.2要領鼠抗人ape1ab(克隆號13b8e52,美國nvusbilgials公司),事情濃度118000;elivi

6、sinplus免疫構造化學試劑盒(kit-9901,福州邁新生物科技)。根據(jù)免疫構造化學elivisinplus二步法試劑盒說明操縱,dab顯色。以pbs取代一抗作為陰性比擬。1.3制作構造芯片根據(jù)研究目的方案點陣,選擇典范地區(qū)在玻片和相應蠟塊做標識表記標幟。將本研究小組已制成的定位板蓋在受體蠟塊上1,根據(jù)定位板的點陣打孔,并從供體蠟塊已標識表記標幟的典范地區(qū)鉆取構造,每個地區(qū)3個構造孔,轉移到受體蠟塊的承載孔。將構造芯片和四周蠟質加熱交融。1.4效果斷定1.5統(tǒng)計學處置懲罰接納spss11.5統(tǒng)計軟件闡發(fā),選用參數(shù)秩和查驗對兩個樣本半定量品級資料舉行闡發(fā),選用kurskal-allish查驗

7、對多個樣本半定量資料舉行闡發(fā),選用spearan秩相干舉行指標間的相干闡發(fā)。2效果構造芯片免疫構造化學封片后不雅察,部門構造有脫片,以每個病灶的3個點(至少有2個點)滿意研究需求為尺度,不然剔除該病例。126例h中2例由于構造脫落不克不及舉行闡發(fā),別的124例均進入有用闡發(fā)。2.1ape1定位表達ape1卵白在各構造的定位表達見表1。差異實行組ape1表達方法差異,在正常肝構造、癌旁肝炎構造和癌旁肝硬化構造,ape1重要以細胞核表達為主;在h和轉移灶,ape1重要以細胞質和細胞核團結表達為主,顯微鏡下不雅察到細胞質和細胞核均出現(xiàn)棕黃色顆粒(圖1a)。124例h中,44例為單純細胞核染色,鏡下僅

8、在細胞質中出現(xiàn)棕黃色顆粒(圖1b)。表1各組ape1卵白的定位表達略2.2ape1的半定量表達各組細胞核和細胞質著色強度見表2。表2各實行組ape1卵白的半定量表達略2.3ape1表達與h臨床病理因素的干系隨著病理構造學分級的升高,ape1細胞核陽性強度依次增高(rs=0.353,p=0.001),細胞質陽性強度亦有依次增高(rs=0.217,p=0.015)。包膜浸潤組與包膜無浸潤組比擬,細胞質陽性強度具有明顯差異(p0.001),而細胞核陽性強度無差異。與無腫瘤轉移組比擬,腫瘤轉移組中細胞核陽性強度顯著升高(p=0.002)。細胞質陰性染色13例,占轉移陽性組的44.8,其他3種染色強度效

9、果均低于陰性染色組。ape1表達與年事、性別、腫瘤大孝構造學分型無關(表3)。表3ape1卵白表達與h臨床病理特性的干系略3討論本研究接納構造芯片和免疫構造化學相團結,檢測ape1在h的表達,節(jié)省實行本錢,大大進步實行服從,并包管實行條件的同一性,淘汰了因平凡實行要領中分批、分次實行造成的實行偏向,進步了實行效果的可*性。同時,通過敵手工制作構造芯片的要領舉行改進,應用改進的打孔針和取材針,進步芯片制作的服從和質量,使檢測ape1表達的實行體系更切合不雅察和進一步研究必要。ape1是一個具有雙成效的限速酶,既賣力修復種種因素產(chǎn)生的ap位點,又通過保持很多轉錄因子(如p53、nf-b、pax-5

10、、pax-8、hif-1、reb、atf和hlf等)dna團結地區(qū)特異性半胱氨酸的復原狀態(tài),維持轉錄因子的激活復原態(tài),從而調治dna團結活性,發(fā)揮緊張作用。以上兩種成效的非常均可導致腫瘤的產(chǎn)生。在人體細胞中,ape1的表達可以細胞質型、細胞核型、細胞質/細胞核型3種形式存在。既往研究在卵巢癌、皮膚惡性玄色素瘤和結腸癌等多種腫瘤中創(chuàng)造,正常構造中ape1以細胞核表達為主,腫瘤構造以質核團結表達為主,ape1表達定位的改變與腫瘤的惡性轉化嚴密相干3-5。本研究效果表現(xiàn),質核團結表達方法比例在癌旁肝炎構造和癌旁肝硬化構造、h和轉移灶組依次遞增,正常肝構造未見質核團結表達方法,差異具有統(tǒng)計學意義,提示

11、hape1卵白表達定位的改變,即從細胞核表達方法轉釀成細胞質表達方法,具有緊張意義。細胞質表達方法的出現(xiàn),大概與腫瘤的侵襲、轉移有關。該效果與以往對肺癌、乳腺癌的相干研究效果同等6-7。如今,對ape1的定位表達機制尚缺乏明白的表達。tell等研究創(chuàng)造,種種導致ape1表達加強的應激因素(如uv、hbv、hv和rs等),可到場調控ape1在細胞內運輸8。ape1在惡性腫瘤中的細胞質定位,大概是外來因子造成了線粒體內的dna損傷,在線粒體內出現(xiàn)了dnaap位點的修復。因此,推測ape1在惡性腫瘤中的定位機制與其所受的應激有關。本研究創(chuàng)造ape1在h中重要定位于細胞質,而hbx是引起ape1移位至

12、細胞質的重要損傷因子,推測h中ape1在細胞質表達與hbx損傷有嚴密干系。vittri等創(chuàng)造,低分化肝細胞癌與高分化肝細胞癌比擬,ape1細胞質染色強度顯著加強9。在腦星形細胞腫瘤中創(chuàng)造,、級腫瘤的ape1核表達陽性強度明顯高于級,并與腫瘤復發(fā)有關10,進一步提示ape1的表達加強與腫瘤的惡性分化具有顯著干系。本研究效果表現(xiàn),細胞核表達陽性強度和細胞質表達陽性強度在各實行組中差異。在正常組、癌旁肝炎組、癌旁肝硬化組、h組和轉移組同樣別離呈依次遞增趨勢(p0.001)。因此以為ape1過表達與h產(chǎn)生、生長嚴密相干。進一步闡發(fā)ape1表達程度與臨床各病理參數(shù)之間的干系,效果表現(xiàn)ape1細胞核和細胞

13、質陽性強度與腫瘤病理學分級、有無肝表里轉移灶嚴密相干,后者還與包膜有無腫瘤浸潤有關。ape1在細胞質和胞核過表達均與h的惡性臨床表型有嚴密干系。puglisi等研究效果表現(xiàn),ape1卵白的細胞質定位與肺癌、乳腺癌的不良預后有關6-7。由于本研究尚缺乏完備的隨訪資料,未能對ape1卵白的表達與預后的干系舉行直接表達,但本研究表現(xiàn),ape1的細胞質表達與腫瘤的轉移有關,且ape1過表達還與包膜侵占和病理學分級有干系,而這些參數(shù)與h的侵襲力和預后均有非常嚴密的干系。因此推測,ape1卵白的細胞質表達及細胞質+細胞核過表達大概與h的預后有關。對h中ape1表達特點的研究具有緊張意義,其細胞質表達方法的

14、出現(xiàn)和陽性強度的變革,可作為斷定h患者預后和腫瘤惡性表型的指標之一。【參考文獻】1臧盛兵,黃愛民,高凌云,等.手工制作構造芯片要領的改進及其在肝細胞癌研究中的應用j.中國構造化學與細胞化學雜志，2022，163:385-388.2babergera,riethdrfl,ilde-langshk,etal.strnglyreduedexpressinftheellyleinhibitrp27inendetrialneplasiaj.virhsarh,1999,434(5):423-428.3tannerb,gries,shifferi,etal.nulearexpressinfapurini/a

15、pyriidiniendnuleaseinreasesithprgressinfvarianarinasj.gynelnl,2022,92(2):568-577.4yangs,iranik,heffrnse,etal.alteratinsintheexpressinftheapurini/apyriidiniendnulease-1/redxfatr-1(ape/ref-1)inhuanelanaandidentifiatinfthetherapeutiptentialfresveratrlasanape/ref-1inhibitrj.lanerther,2022,4(12):1923-193

16、5.5牟江洪,肖華亮,向德兵,等.大腸癌ref-1/ape的表達特點及其意義j.第三軍醫(yī)大學學報,2022,28(2):111-113.6puglisif,aprileg,inisinia,etal.prgnstisignifianefape1/ref-1subellularlalizatininnn-sallelllungarinasj.antianerres,2001,21(6a):4041-4049.7puglisif,barbnef,tellg,etal.prgnstirlefape/ref-1subellularexpressininstage-breastarinasj.nlrep,2002,9(1):11-17.8tellg,daanteg,aldelld,etal.theintraellularlalizatinfape1/ref-1:rethanapassi