檢驗中心培訓(xùn)課件10 蔣玲麗-臨床PCR實驗室常見問題及整改措施 上海市臨床檢驗中心

1、臨床PCR實驗室常見問題分析及整改措施上海市臨床檢驗中心 蔣玲麗2019.3.25人員資質(zhì)督察內(nèi)容存在問題整改措施1.負(fù)責(zé)人應(yīng)至少具有中級專業(yè)技術(shù)職稱、 1.未取得上崗證的 1.及時參加培訓(xùn)醫(yī)學(xué)檢驗或相關(guān)專業(yè)背景。有從事分子診斷工作的經(jīng)歷。2.操作人員應(yīng)具備相關(guān)資質(zhì)并經(jīng)過有資質(zhì)的培訓(xùn)機構(gòu)培訓(xùn)合格取得上崗證后方可上崗。至少具有 2 名本單位在職檢驗/檢查人員。人員獨立操作；取得上崗證；2.病人報告單上的 2.規(guī)定報告審核檢測人員和審核人 操作規(guī)程。員與實際不一致；3.試劑公司人員參與檢測。3.簽發(fā)分子病理報告的醫(yī)師應(yīng)至少具有中級病理學(xué)專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格，并有從事分子病理工作的經(jīng)歷。至少1名。4

2、.簽發(fā)分子遺傳報告的醫(yī)師應(yīng)至少具有中級遺傳學(xué)專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格，并有從事分子遺傳工作的經(jīng)歷。至少1名。2人員能力評估督察內(nèi)容存在問題整改措施1.應(yīng)每年評估員工 1.缺培訓(xùn)計劃或 1.制定培訓(xùn)制度，每年制定針對性培訓(xùn)的工作能力。對新進員工在最初 6 個月內(nèi)應(yīng)至少進行 2次能力評審，保存評估記錄。針對性計劃。計劃，培訓(xùn)并記錄。2.培訓(xùn)形式可以多樣：講座、自學(xué)、觀看示例、現(xiàn)場檢測。3.效果評估形式：口頭提問、筆試、現(xiàn)場操作演示、合格證、培訓(xùn)小結(jié)。2.缺培訓(xùn)記錄或效果評估記錄 。3.缺新進人員崗前培訓(xùn)記錄。2.當(dāng)職責(zé)變更時，或離崗 6 個月以上再上崗時，或政策、程序、技術(shù)有變更時，應(yīng)對員工進行再培訓(xùn)

3、和再評估，合格后才可繼續(xù)上崗，并記錄。4.制定員工能力評審內(nèi)容和方法,定期評審員工的工作能力，并保存勝任的證據(jù)：直接觀察常規(guī)工作過程和程序、直接觀察設(shè)備維護和功能檢查、監(jiān)控檢驗結(jié)果的記錄和報告過程、核查工作記錄、評估解決問題的技能、檢驗特定樣品（留樣等）。4.再上崗缺再培訓(xùn)和再評估記錄。5.缺員工能力評審記錄。3人員管理督察內(nèi)容存在問題整改措施應(yīng)建立全部人員相 1.實驗室技術(shù)人員檔案 實驗室應(yīng)分冊建立技術(shù)關(guān)的教育背景、專 內(nèi)容過于簡單：只有學(xué) 人員技術(shù)檔案，檔案至業(yè)資格、培訓(xùn)、經(jīng) 歷、職稱、PCR上崗證 少應(yīng)包括以下內(nèi)容：歷及能力記錄檔案。 書復(fù)印件。教育和專業(yè)資質(zhì)、 證書或執(zhí)照的復(fù)印件 、以

4、前的工作經(jīng)歷、 崗位描述、 新員工入崗前介紹、崗位培訓(xùn)、能力評審等資料，并定期更新。2.未及時更新。4設(shè)施和環(huán)境條件督察內(nèi)容存在問題整改措施應(yīng)實施安全風(fēng)險評估， 有些臨床實驗室沒有限制措施， 安裝門禁或貼標(biāo)識加以限如果設(shè)置了不同的控 可以隨意出入。制區(qū)域，應(yīng)制定針對性的防護措施及合適的警告。制和控制；非檢測人員進出登記。5設(shè)施和環(huán)境條件督察內(nèi)容存在問題整改措施1.涉及基因擴增檢驗的 緩沖間大門敞開；部分緩 1. 實驗時隨手關(guān)門沖間相通；物品交叉使用實驗室分區(qū)。2.開展下一代測序2.緩沖間相同的實驗室應(yīng)封鎖通道（NGS）技術(shù)的實驗室設(shè)置遵循 “工作有序、互不干擾、防止污染”的基本原則。3.開展孕

5、婦外周血胎兒游離DNA產(chǎn)前篩查與診斷的實驗室，標(biāo)本制備區(qū)不能與其他項目的標(biāo)本制備區(qū)共用。3.各區(qū)物品可粘貼區(qū)域標(biāo)識。注明科研未根據(jù)項目相應(yīng)增加區(qū)域 根據(jù)使用技術(shù)的要求相應(yīng)增（如雜交法和芯片法等； 加區(qū)域新項目如NIPT、藥物）試劑準(zhǔn)備區(qū)形同虛設(shè)（無 試劑分裝應(yīng)在試劑準(zhǔn)備區(qū)操作移液器等）未安裝沖眼器或不能正常 II區(qū)安裝沖眼器并保證正常4.分子病理實驗室應(yīng)設(shè)置獨立的標(biāo)本前處理區(qū)，包括切片區(qū)和脫蠟區(qū)。出水移動紫外車缺或已壞未及 各實驗區(qū)配備移動紫外車并時更換 保證正常使用狀態(tài)使用狀態(tài)67實驗時不關(guān)門8增加項目后增加區(qū)域9NIPT項目增加區(qū)域10樣本污染？生物安全？11儲存設(shè)施督察內(nèi)容存在問題整改措

6、施用以保存臨床樣品和 1.冰箱溫度記錄無范圍或范圍 1.根據(jù)試劑儲存要求設(shè)置范圍。試劑的設(shè)施應(yīng)設(shè)置目 設(shè)置不合實際。標(biāo)溫度和允許范圍，并記錄。實驗室應(yīng)有溫度失控時的處理措施并記錄。2.未真實記錄或記錄不正確。 2.根據(jù)溫度計顯示溫度真實記錄。超過范圍及時處理。12冰箱溫度范圍不合適13冰箱溫度記錄依據(jù)不合適；無范圍。14不能滿足試劑儲存15設(shè)施維護和環(huán)境條件督察內(nèi)容存在問題整改措施不同的實驗區(qū)域 1.清潔用具混用，無標(biāo)識。 1.各區(qū)清潔用具做好標(biāo)識。應(yīng)當(dāng)有其各自的 2.無相應(yīng)的消毒記錄。 2.配備相應(yīng)的消毒用品（消毒清潔用具以防止 3.有記錄無相應(yīng)的消毒用品。 片、酒精等）。消毒后做好記交叉污

7、染。工作結(jié)束后應(yīng)立即對工作區(qū)進行清潔，必要時進行消毒及去污染。錄。16設(shè)施維護和環(huán)境條件督察內(nèi)容存在問題整改措施應(yīng)依據(jù)所用分析 1.無溫濕度范圍。設(shè)備和實驗過程 2.未實時記錄。的要求，制定環(huán)設(shè)計合適的表格并記錄境溫濕度控制要求并記錄。應(yīng)有溫濕度失控時的處理措施并記錄。17溫度25濕度50%無溫濕度范圍18設(shè)施維護和環(huán)境條件督察內(nèi)容存在問題整改措施分子檢驗各工作區(qū)域應(yīng)有明確的 實驗室檢驗流 1.文件規(guī)定流向要求。標(biāo)記。進入基因擴增實驗室各工 程設(shè)計滿足單 2.實際操作按規(guī)定操作。作區(qū)應(yīng)按照單一方向進行，即試 一方向要求但劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)樣品制備區(qū) 實際操作未滿擴增區(qū)擴增產(chǎn)物分析區(qū)。不同 足要求。

8、的工作區(qū)域宜使用不同的工作服（如不同的顏色）。工作人員離開各工作區(qū)域時，不應(yīng)將工作服帶出。19設(shè)備管理應(yīng)保存主要設(shè)備的檔案，檔案內(nèi)容應(yīng)包括：設(shè)備標(biāo)識、型號、序號或其它唯一性識別、到貨日期和投入運行日期、目前放置地點、接收時的狀態(tài)、儀器使用說明書或其存放處、證實設(shè)備可以使用的設(shè)備驗證報告、校準(zhǔn)和/或檢定報告、維護、損壞、故障或維修的記錄。20儀器名稱制造商名稱設(shè)備型號出廠編號實驗室設(shè)備編號接受日期接收狀態(tài)啟用日期目前放置地點本次校準(zhǔn)日期校準(zhǔn)單位下次校準(zhǔn)日期迄今所進行的維護今后維護計劃備注建議儀器接收時建立檔案21設(shè)備督察內(nèi)容存在問題整改措施從事RNA檢測，宜配備70的冷 1.標(biāo)本制備區(qū)未使 根據(jù)

9、項目要求選凍設(shè)備。需要時，配備高速冷凍離 用含濾芯吸頭。用設(shè)備耗材，做心機。 標(biāo)本制備區(qū)使用的一次性加樣器吸頭應(yīng)帶有濾芯。PCR試驗用容器應(yīng)可密閉，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品不能混用 。組織標(biāo)本前處理區(qū)的設(shè)備通常應(yīng)包括切片機、裱片機、切片刀、電熱恒溫箱、脫蠟缸、水化缸及HE染色缸等。好設(shè)備區(qū)域標(biāo)識。2.采用有粉手套。3.部分可移動小設(shè)備不同區(qū)域混用。4.RNA檢測項目未配備冷凍離心機。222324科研儀器明確標(biāo)識25儀器明確標(biāo)識狀態(tài)26設(shè)備校準(zhǔn)和計量溯源督察內(nèi)容存在問題整改措施實驗室應(yīng)建立設(shè)備的校準(zhǔn)程 1.缺校準(zhǔn)程序。 1.根據(jù)儀器的實際使用要序，相應(yīng)程序中至少應(yīng)包括 或缺校準(zhǔn)詳細 求，制定實

10、際使用量程的需校準(zhǔn)的設(shè)備、校準(zhǔn)單位、 內(nèi)容。檢定或校準(zhǔn)計劃，并寫入校準(zhǔn)周期、校準(zhǔn)參數(shù)、校準(zhǔn)參數(shù)符合相關(guān)檢驗?zāi)康暮鸵蟮葍?nèi)容。需內(nèi)部比對、校準(zhǔn)的輔助設(shè)備，實驗室宜根據(jù)國家計量部門或生產(chǎn)廠商的規(guī)定制定比對或內(nèi)部校準(zhǔn)操作規(guī)程和要求。SOP中。2.缺年度校準(zhǔn)計劃。2.制定內(nèi)部比對操作規(guī)程，并可實施。包括比對結(jié)果的判讀等。3.缺內(nèi)部比對操作規(guī)程。3.根據(jù)程序每年制定校準(zhǔn)計劃。27設(shè)備校準(zhǔn)和計量溯源（外部校準(zhǔn)）督察內(nèi)容存在問題整改措施應(yīng)按國家法規(guī)要求對強檢設(shè) 1.儀器投入使用前未進行校 1.校準(zhǔn)SOP中制定儀器校準(zhǔn)參數(shù)、校準(zhǔn)周期、判斷標(biāo)準(zhǔn)備進行檢定。準(zhǔn)或未定期校準(zhǔn)或部分未校應(yīng)定期對測序儀、基因擴增儀、雜交

11、儀、加樣器、微量分光光度計、溫度計、恒溫設(shè)備、離心機和生物安全柜等進行校準(zhǔn)。有合格的校準(zhǔn)報告，并對校準(zhǔn)參數(shù)實施評估。當(dāng)校準(zhǔn)給出一組修正因子時，應(yīng)確保之前的校準(zhǔn)因子得到正確更新。2.校準(zhǔn)未覆蓋檢測量程（移液器、恒溫金屬?。?.實驗室檢測人員提出校準(zhǔn)要求3.校準(zhǔn)不符合要求設(shè)備仍使用3.實驗室審核校準(zhǔn)報告4.校準(zhǔn)報告中數(shù)據(jù)錯誤未發(fā)4.盡量提供原始數(shù)據(jù)，尤其是有些廠家校準(zhǔn)或檢定的儀器?，F(xiàn)5.未引用校準(zhǔn)因子（例溫度計、恒溫金屬?。?.缺原始記錄（擴增儀）28注1：測序儀校準(zhǔn)參數(shù)宜至少包括：緩沖液液路、光路、反應(yīng)溫度。注2：擴增儀校準(zhǔn)參數(shù)宜至少應(yīng)包括：溫度示值誤差、溫度均勻度、平均升溫速率、平均降溫速率、

12、樣本示值誤差和樣本線性，技術(shù)性能指標(biāo)應(yīng)滿足JJF1527-2015聚合酶鏈反應(yīng)分析儀校準(zhǔn)規(guī)范的要求。注3：高速冷凍離心機校準(zhǔn)參數(shù)宜包括：轉(zhuǎn)速和溫度（適用時）。注4：恒溫金屬浴的校準(zhǔn)宜包括：溫度示值誤差和溫度均勻度，并覆蓋常用的檢測溫度。注5：移液器的檢定應(yīng)包括：容量允許誤差和測量重復(fù)性，計量性能要求應(yīng)符合JJG646-2006移液器檢定規(guī)程的規(guī)定。29如何判斷符合不符合！？30容量允許誤差（%）容量允許誤差（%）標(biāo)稱容量 檢定點（l） （l）標(biāo)稱容量 檢定點（l） （l）重復(fù)性（%）重復(fù)性（%）0.10.5120.020.012.020.012.012.020.012.08.010.010.0

13、6.0212.08.04.012.08.04.08.04.03.08.04.03.06.04.02.06.04.02.04.02.01.54.02.01.5201020210.2110.06.0254050102552526.00.5110.06.02040554.0112.08.06.054.0255010108.04.031容量允許誤差（%）容量允許誤差（%）標(biāo)稱容 檢定點量（l） （l）標(biāo)稱容量 檢定點（l） （l）重復(fù)性（%）重復(fù)性（%）10508.03.02.04.02.01.54.02.01.53.02.01.54.01.51.02.01.01.02.01.01.01.51.01.

14、01005002.01.01.01.51.00.51.00.50.61.00.60.61.00.50.51.50.50.20.50.20.20.50.20.210001002002503001002010002501002002525005000125025005001252505025005000100050001000015030010000JJG646-2006檢定規(guī)程有允許范圍的要求，應(yīng)寫入SOP！32金屬浴校準(zhǔn)報告33金屬浴校準(zhǔn)報告34移液器校準(zhǔn)在100 l ，500 l和1000 l三個校準(zhǔn)點的準(zhǔn)確度和精確度完全一致！校準(zhǔn)數(shù)據(jù)不真實！35一個醫(yī)院兩次的校準(zhǔn)報告！校準(zhǔn)數(shù)據(jù)不真實！36

15、不符合校準(zhǔn)報告未經(jīng)分析，并仍在使用。37授權(quán)了經(jīng)銷，但未授權(quán)校準(zhǔn)資質(zhì)。38設(shè)備校準(zhǔn)和計量溯源（內(nèi)部比對）督察內(nèi)容存在問題整改措施分析設(shè)備和 1.無相應(yīng)的內(nèi)部比對操作規(guī) 1.完善操作規(guī)程2.保留用于比對的儀器的校準(zhǔn)報告并保證校準(zhǔn)合格，并在比對時引入校準(zhǔn)因子。3.用于比對的儀器應(yīng)覆蓋需要比對儀器的量程。4.內(nèi)部比對記錄信息最少應(yīng)包括：比對設(shè)備編號、 用于比對設(shè)備的校準(zhǔn)信息（校準(zhǔn)日期、校準(zhǔn)有效期、校準(zhǔn)單位）、比對時間、標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備實測數(shù)據(jù)、比對設(shè)備實測數(shù)據(jù)、判斷標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)論、比對人、比對日期、科室負(fù)責(zé)人。輔助設(shè)備的內(nèi)部校準(zhǔn)應(yīng)符合 CNAS-CL 31內(nèi)部校準(zhǔn)要程2.用于比對的儀器未校準(zhǔn)（移液器-無相應(yīng)校準(zhǔn)

16、過的天平；溫度計-無相應(yīng)校準(zhǔn)過的溫度計）求。3.用于比對器具量程不適合4.無記錄、記錄信息不全或記錄不真實5.比對時未引入比對器具的校準(zhǔn)因子。39用于比對的溫度計量程不合適！40儀器編號？人員？標(biāo)準(zhǔn)？41儀器編號重復(fù)？記錄可靠性？42用于比對的溫度計在比對-20時應(yīng)該引入校準(zhǔn)因子！43用于內(nèi)部溫度計校準(zhǔn)44比對設(shè)備編號比對環(huán)境記錄詳細的比對記錄原始信息記錄比對結(jié)論比對日期、比對人員、科室負(fù)責(zé)人等45設(shè)備維護與維修督察內(nèi)容存在問題整改措施設(shè)備故障后，應(yīng)首先分析故障原 1.缺部分儀器 根據(jù)儀器說明書制定每臺儀器因，如果設(shè)備故障可能影響了方 的保養(yǎng)計劃 的保養(yǎng)計劃，并寫入SOP中，法學(xué)性能，故障修復(fù)

17、后，可通過 2.缺維修后驗 并編入使用記錄表中。合適的方式進行相關(guān)檢測驗證 證。（a） 可校準(zhǔn)的項目實施校準(zhǔn)驗證，必要時，實施校準(zhǔn)；（b） 質(zhì)控物檢驗，其檢驗結(jié)果在允許范圍內(nèi)；（c） 與其他儀器或方法比對。（d） 以前檢驗過的樣品再檢驗。留樣再測判斷標(biāo)準(zhǔn)：按照項目穩(wěn)定性要求選取最長期限樣品。定性項目：選擇陰性和弱陽性樣品各1份，測量結(jié)果與預(yù)期結(jié)果一致。定量項目：選取5 份樣品，覆蓋測量區(qū)間，至少 4 份樣品測量結(jié)果偏倚7.5%。46試劑耗材管理督察內(nèi)容存在問題整改措施實驗室應(yīng)對新批號或同一批號不同貨運號的試劑和關(guān)鍵耗材進行驗收，驗收試驗至少應(yīng)包括：（a） 外觀檢查：肉眼可看出的，如包裝完整性、

18、有效期等；試劑及耗材存在過期根據(jù)使用數(shù)量訂購試劑未對耗材進行質(zhì)檢或質(zhì)檢 進行耗材抑制物質(zhì)檢（除非不完整 標(biāo)明不含抑制物）（b） 性能驗證：通過實驗才能判斷的，如試劑的核酸提取效率和核酸擴增效率、 試劑的批間差異、關(guān)鍵耗材的抑制物等。1.未對不同試劑批號進行 1.不同批次試劑需要質(zhì)檢質(zhì)檢2.采用臨床標(biāo)本質(zhì)檢2.使用質(zhì)控品質(zhì)檢3.質(zhì)檢后應(yīng)有判斷規(guī)則進行3.質(zhì)檢后不知道如何判斷 判斷47注：試劑性能驗證記錄應(yīng)能反映該批試劑的核酸提取效率和核酸擴增效率。一般情況下，臨床實驗室在新批號試劑或關(guān)鍵耗材使用前，應(yīng)驗 證試劑批間差異和耗材的抑制物，符合下列要求即可視為滿足要求。用于定性檢驗的試劑，選擇陰性和弱

19、陽性的樣品進行試劑批號驗證。用于定量檢驗的試劑，應(yīng)進行新舊試劑批間的差異驗證，選取 5 個舊批號檢測過的樣品，覆蓋測量區(qū)間（包括陰性、臨界值、低值、中值和高值），至少 4 個樣品測量結(jié)果偏倚 7.5%，其中陰性和臨界值樣品必須符合預(yù)期。耗材的抑制物驗收（除非已標(biāo)明不含抑制物）：對關(guān)鍵耗材應(yīng)檢測是否存在核酸擴增的抑制物，選取 5 個舊批號檢測過的樣品，覆蓋測量區(qū)間（包括陰性、臨界值、低值、中值和高值），至少 4 個樣品測量結(jié)果偏倚 7.5%，其中陰性和臨界值樣品必須符合預(yù)期。48標(biāo)明不含抑制物的請供應(yīng)商提供證明文件，可不進行耗材抑制物質(zhì)檢！4950采用試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品進行試劑質(zhì)檢！51頻繁入庫耗材，

20、又不真實記錄。52樣品采集和運送督察內(nèi)容存在問題整改措施1.應(yīng)規(guī)定分子診斷樣品留取的具體要求，如： 1.操作規(guī)程未涉及所有樣品類型的細化操作規(guī)程，規(guī)定不同類型樣品的要求（包括血液、分泌物、痰液等）使用無 DNase 和/或無 RNase 的一次性密閉容器；正確使用抗凝管：通常全血和骨髓樣品應(yīng)進行 采集和運送抗凝處理，EDTA 和枸櫞酸鹽為首選抗凝劑，不使用肝素抗凝（核酸提取采用吸附法而不受肝素干擾時除外）；用于 RNA（如 HCV RNA）擴增檢測的血樣品宜進行抗凝處理，并盡快分離血漿，以避免 RNA的降解；如未作抗凝處理，則宜盡快分離血清。分泌物、拭子、腫瘤組織等樣品留取的注意事項等。要求2

21、.RNA樣本未及時分離血清（操作規(guī)程未規(guī)定時間）2.樣品運送應(yīng)符合相關(guān)時間、溫度、生物安全的要求5354試劑盒都簡單提供樣本采集要求，但不會提到驗收和拒收的具體標(biāo)準(zhǔn)！實驗室應(yīng)根據(jù)實際情況制定標(biāo)準(zhǔn)！55樣品接收督察內(nèi)容存在問題整改措施當(dāng)標(biāo)本驗收不合格，如患者識別或樣品 1.接收標(biāo)本時標(biāo)本 1.應(yīng)記錄收到標(biāo)本識別有問題、運送延遲或容器不適當(dāng)導(dǎo) 狀態(tài)信息記錄不完 的日期和時間，同致樣品不穩(wěn)定、樣品量不足，樣品對臨 善（尤其是獨立實 時應(yīng)記錄標(biāo)本接收床很重要或樣品不可替代，而實驗室仍 驗室）時的詳細狀態(tài)選擇處理這些樣品，應(yīng)在最終報告中說明問題的性質(zhì)，并在結(jié)果的解釋中給出警示（適用時）。示例：腦脊液、關(guān)

22、節(jié)腔穿刺液等?；诮M織/細胞學(xué)形態(tài)基礎(chǔ)的分子檢測項目應(yīng)由具有病理診斷資質(zhì)的醫(yī)師確認(rèn)樣品是否滿足檢測要求。2.分泌物標(biāo)本、分 2.實驗室應(yīng)確定標(biāo)子病理標(biāo)本缺驗收 本是否符合檢測要記錄求, 拒收標(biāo)本原因要明確3. 拒收原因缺定期分析及整改措施 3.拒收原因定期評4.檢測前、后標(biāo)本 估，制定切實可行放置同一冰箱，未 的整改措施，提高標(biāo)識區(qū)分工作效率4.標(biāo)本分區(qū)放置，或用標(biāo)識加以區(qū)分56樣品分區(qū)放置并加以標(biāo)識！57樣品接收督察內(nèi)容存在問題整改措施所有取自原始樣品的部分樣品應(yīng)可明確追溯至最初的原始樣品 。標(biāo)本檢測全過程包括核酸提取、擴增、產(chǎn)物分析、保存等應(yīng)能溯源至原始標(biāo)本。分子病理檢測項目在檢測過程中應(yīng)

23、以病理號作為原始標(biāo)本、取材標(biāo)本（包埋盒）、蠟塊或切片的唯一性標(biāo)識。孕婦外周血胎兒游離DNA產(chǎn)前篩查與診斷的實驗室其采血管應(yīng)當(dāng)有唯一編號，該編號應(yīng)當(dāng)與知情同意書、檢測申請單和臨床報告單編號一致。原始記錄、樣本保 無論采用何種方法保證標(biāo)本的唯一編號。存及在操作過程中部分未使用唯一編號；留存標(biāo)本未使用唯一編號58樣本留存無唯一編號59標(biāo)本號不唯一，除非有可以證明溯源性的措施！60HPV分型原始數(shù)據(jù)保存61檢驗方法的驗證與確認(rèn)檢查方法存在問題整改措施檢查方法學(xué) 1.缺操作規(guī)程1.完善操作規(guī)程驗證操作規(guī)程2.如對試劑或方法進行重要修改，應(yīng)對所采用的試劑或方法進行性能驗證，實驗室應(yīng)獨自完成驗證試驗，并選擇

24、有資質(zhì)的實驗室比較。定量：精密度、正確度、線性范圍、檢出限等2.更換儀器只做部分項目的驗證；驗證參數(shù)不全、標(biāo)本數(shù)量不足。3.參比方法選擇有缺陷，無法比較4.試劑性能更換未做驗證（如定量改為定性、標(biāo)本類型更換）新開展項目或儀器、試劑、方法更新時，應(yīng)有方法學(xué)驗證的實驗記錄定性：精密度、 特異性、準(zhǔn)確度（方法學(xué)比較或與金標(biāo)準(zhǔn)比較）等5.不是實驗室完成如開展分子診斷自建項目，應(yīng)有程序評估并確認(rèn)精密度、正確度、參考范圍、可報告范圍、分析靈敏度、分析特異性等分析性能符合預(yù)期用途，必要時還需進行臨床驗證。確認(rèn)結(jié)果應(yīng)經(jīng)過實驗室負(fù)責(zé)人審核并簽字。62整改措施注1.性能驗證參考文件 -美國臨床和美國國家臨床實驗室

25、標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）文件CLSI EP5-A2定量測量方法的精密度性能評價CLSI EP9-A2用患者樣本進行方法學(xué)比對及偏倚評估CLSI EP15-A用戶對精密度和準(zhǔn)確度性能的核實指南CLSI EP6-A定量測量方法的的線性評價：統(tǒng)計方法注：性能驗證過程中所有的檢測數(shù)據(jù)均為一個獨立測試的結(jié)果，不能采用提取好的DNA或RNA進行評估63實驗室根據(jù)實際使用情況選擇并進行驗證！64室內(nèi)質(zhì)控1督查內(nèi)容存在問題整改措施應(yīng)制定室內(nèi)質(zhì)量控制程序如檢測過程中對被檢基因組DNA質(zhì)量有規(guī)定時，應(yīng)符合制造商規(guī)定的要求， 目)。并保留 DNA 質(zhì)量評價記錄。1.室內(nèi)質(zhì)控未覆蓋全 1.規(guī)定每個項目的室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程。

26、部項目(尤其定性項2.初審實驗室方法學(xué) 2.質(zhì)控品應(yīng)監(jiān)控對用于基因突變檢測的石蠟包埋樣品， 驗證時有時不做室內(nèi)應(yīng)有病理醫(yī)師從組織形態(tài)學(xué)對腫瘤細 質(zhì)控。核酸提取、擴增、產(chǎn)物分析等標(biāo)本胞的存在與否及其數(shù)量進行評價，并 3.采用提取好的DNA或 檢測全過程。決定是否需要對腫瘤細胞進行富集。 RNA或試劑盒提供的質(zhì)當(dāng)分子診斷結(jié)果與臨床和其他實驗結(jié) 粒作為室內(nèi)質(zhì)控，未果不符時，應(yīng)記錄并分析原因，適當(dāng) 監(jiān)控核酸提取、擴增時采取糾正措施。整個過程。65室內(nèi)質(zhì)控2督查內(nèi)容存在問題整改措施定性檢測項目，每次實驗應(yīng)設(shè)置陰性、 1.不是每次實驗都做 理解室內(nèi)質(zhì)控的弱陽性和/或陽性質(zhì)控物。 室內(nèi)質(zhì)控。 作用；每次實驗

27、如為基因突變、 基因多態(tài)性或基因 2.質(zhì)控物未覆蓋陰性、 都宜做室內(nèi)質(zhì)控。型檢測，則應(yīng)包括最能反映檢測情況 弱陽和強陽。基因突的突變或基因型樣品，每批檢測的質(zhì) 變未覆蓋多型別?？刂辽賾?yīng)有一種基因突變或基因型，并建議在一定周期內(nèi)涵蓋所有基因突變或基因型 。并在操作規(guī)程中詳細規(guī)定質(zhì)控品設(shè)置。定量檢測項目，每次實驗應(yīng)設(shè)置陰性、弱陽性和陽性質(zhì)控物。66不做室內(nèi)質(zhì)控，只做標(biāo)準(zhǔn)品。67室內(nèi)質(zhì)控3督察內(nèi)容存在問題整改措施質(zhì)控規(guī)則應(yīng)確保試驗的穩(wěn)定性和檢驗結(jié) 1.未及時判斷；未及 實驗室應(yīng)根據(jù)統(tǒng)計果的可靠性。 時分析失控或分析流 學(xué)質(zhì)控方法建立檢定量檢測項目質(zhì)控圖應(yīng)包括質(zhì)控結(jié)果、 于形式。 測項目的控制限。質(zhì)控

28、物名稱、濃度、批號和有效期、質(zhì) 2.實驗室未根據(jù)統(tǒng)計 并及時分析?？貓D的中心線和控制界線、分析儀器名 學(xué)質(zhì)控方法建立實驗 實驗室應(yīng)根據(jù)統(tǒng)計稱和唯一標(biāo)識、方法學(xué)名稱、檢驗項目 室自身檢測項目的控 學(xué)質(zhì)控方法建立檢名稱、試劑和校準(zhǔn)物批號、每個數(shù)據(jù)點 制限。的日期和時間、干擾行為的記錄、質(zhì)控人員及審核人員的簽字、失控時的分析測項目的控制限。并進行累積評價。結(jié)果有效性判斷未關(guān) 結(jié)果有效性判斷除注標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系 室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控數(shù)或內(nèi)參是否滿足試 外，還應(yīng)滿足試劑處理程序和糾正措施等。定性檢測項目陰陽性符合預(yù)期。檢測項目結(jié)果有效性判斷除室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控外，還應(yīng)判斷相關(guān)參數(shù)是否滿足試劑說明書的要求。劑說

29、明書的要求。說明書的要求 。68結(jié)果有效性判斷！69室內(nèi)質(zhì)控失控分析流于形式！70低值質(zhì)控偏倚15.29%2017年第二次室間質(zhì)評五個項目中有一個不符合，1721標(biāo)本我室結(jié)果4.16，低于平均值4.7，檢測結(jié)果偏低，可能是耗材方面原因，更換耗材后看能否提高擴增效率 2017.10HBVDNA低值數(shù)據(jù)偏低，可能為耗材原因，更換后看能否提高效率2017.171次數(shù)32斜率閾值相關(guān)系數(shù) 擴增效率-5.10-4.1258.9048.330.9739 57.06%0.9895 74.87%標(biāo)準(zhǔn)曲線不符合！3672次數(shù)24斜率相關(guān)系數(shù)擴增效率-3.35-3.38-3.210.99890.99940.998

30、498.84%未及時輸入軟件就不能2597.63% 及時發(fā)現(xiàn)失控！26104.89%73室內(nèi)質(zhì)控失控處理及原因分析多種因素可導(dǎo)致出現(xiàn)失控，這些因素包括：操作失誤，試劑、校準(zhǔn)物、質(zhì)控物失效、儀器維護不良以及采用不當(dāng)?shù)馁|(zhì)控規(guī)則和太小的質(zhì)控限范圍，一個分析批測定的質(zhì)控物數(shù)不當(dāng)?shù)?。尋找失控原因和處理的步驟如下：重新測定同一質(zhì)控物新開一瓶質(zhì)控物進行儀器維護或更換試劑重新校準(zhǔn)請專家?guī)椭ⅲ喝缡钦媸Э?，在查出原因進行糾正后，應(yīng)重新檢測患者標(biāo)本后發(fā)出檢測報告。74弱陽性樣本常見的失控原因核酸提取中的隨機誤差。如核酸提取中的丟失、有機溶劑的去除不徹底、標(biāo)本中擴增抑制物的殘留等。儀器的問題。如擴增儀孔間溫度的不均

31、一性、孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致性等。試劑的問題。如Taq酶和/或逆轉(zhuǎn)錄酶的失活、探針的純度及標(biāo)記效率和核酸提取試劑的效率等。陰性樣本常見的失控原因主要為擴增產(chǎn)物的“污染”和/或臨床標(biāo)本的核酸提取過程中發(fā)生的標(biāo)本間的交叉 “污染”。75室間質(zhì)評督察內(nèi)容存在問題整改措施應(yīng)按照 CNAS-RL02能力驗 1. 未簽字。每次反饋結(jié)果應(yīng)仔細對待簽字確認(rèn)，并分析室間質(zhì)評反饋結(jié)果，對不合格項目，應(yīng)及時查找原因，采取糾正措施。證規(guī)則的要求參加相應(yīng)的能力驗證/室間質(zhì)評。 應(yīng)保留參加能力驗證/室間質(zhì)評的結(jié)果和證書。實驗室負(fù)責(zé)人或指定人員應(yīng)監(jiān)控室間質(zhì)評活動的結(jié)果，并在結(jié)果報告上簽字 。2.室間質(zhì)評結(jié)果原因分析流于

32、形式，缺乏針對性。76室間質(zhì)控失控處理及原因分析收集和審核數(shù)據(jù)：書寫誤差的檢查質(zhì)控記錄，校準(zhǔn)狀況及儀器性能的檢查如可行時，重新分析原來樣品和計算結(jié)果評價該分析物實驗室的歷史檢測性能問題分類書寫誤差方法學(xué)問題技術(shù)問題室間質(zhì)量評價樣品的問題室間質(zhì)量評價的評價問題經(jīng)調(diào)查后無法解釋的問題77無室間質(zhì)評項目的替代方案督察內(nèi)容存在問題整改措施對沒有開展能力驗證/室 1. 未比對。 1. 對無室間質(zhì)評的項目應(yīng)間質(zhì)評的檢驗項目，應(yīng) 2.選擇比對實驗室無相 規(guī)定比對程序（包括比對實通過與其他實驗室比對 關(guān)資質(zhì)；比對樣本不合 驗室、樣本數(shù)、樣本濃度）。的方式確定檢驗結(jié)果的 適。2.應(yīng)使用臨床標(biāo)本監(jiān)測檢測3. 樣本

33、為非原始標(biāo)本， 全過程。而是提取產(chǎn)物。可接受性3.確認(rèn)結(jié)果并分析。4.未分析結(jié)果。應(yīng)滿足如下要求：規(guī)定比對實驗室的選擇原則；樣品數(shù)量：至少 5 份，包括正常和異常水平或不同常見基因突變或基因型；頻率：至少每年 2 次；判定：80%符合要求。分子病理、藥物基因組學(xué)、產(chǎn)前篩查與診斷100%符合。結(jié)果不一致時，應(yīng)分析原因，并采取有效的糾正措施，及時評估糾正措施有效性。78AB定量和定性比對？79檢驗結(jié)果的可比性督察內(nèi)容存在問題 整改措施實驗室使用兩套及以上檢測系統(tǒng)檢測 1.未做驗 1.同一個項目盡量同一項目時，應(yīng)有比對數(shù)據(jù)表明其檢證；固定在一個檢測系測結(jié)果的一致性，比對頻次每年至少1 次，樣品數(shù)量不

34、少于 20，濃度水平應(yīng)覆蓋測量區(qū)間；計算回歸方程，系統(tǒng)誤差應(yīng)7.5%。2.驗證標(biāo) 統(tǒng)上；每年至少1本量不足 次，每次至少20個3.未做人 樣本。濃度覆蓋測應(yīng)定期（至少每年 1 次，每次至少 5 員比對。 量范圍，計算回歸份臨床樣品）進行檢驗人員的結(jié)果比方程，系統(tǒng)誤差應(yīng)小于7.5%。2.人員比對應(yīng)寫入操作規(guī)程。對、考核并記錄。比對結(jié)果至少 4 個樣品測量結(jié)果偏倚7.5%，其中陰性和臨界值樣品必須符合預(yù)期。80結(jié)果復(fù)核督察內(nèi)容存在問題整改措施應(yīng)制定定性檢測項目臨界標(biāo)本 無復(fù)檢制度, 應(yīng)在操作規(guī)程中詳細規(guī)的復(fù)檢制度，復(fù)檢范圍和結(jié)果報告規(guī)則遵從試劑說明書規(guī)定的要求。NGS檢測顯示為影響臨床決策的核酸變異結(jié)果，在簽發(fā)報告之前，需要另外采用備選方法（如Sanger測序、SNP芯片等）對其進行確認(rèn)。未按實際規(guī)定 定;進行復(fù)檢 仔細審核報告，符合復(fù)檢范圍的進行復(fù)檢并記錄。81臨床樣品的儲存、保留和處置督察內(nèi)容存在問題整改措施原始樣品、核酸提取物 1.操作規(guī)程未規(guī)定保存時 1.操作規(guī)程應(yīng)詳細規(guī)定；和/或核酸擴增產(chǎn)物應(yīng)規(guī) 間；樣品保存時間短于規(guī) 標(biāo)本應(yīng)按相關(guān)規(guī)定保存定保存期，便于復(fù)查。