2022醫(yī)學(xué)課件關(guān)愛生命呵護(hù)健康紅細(xì)胞血型理論與技術(shù)

1、紅細(xì)胞血型理論與實(shí)驗(yàn)技術(shù)長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司童 軍 第一頁，共六十四頁。 主要內(nèi)容紅細(xì)胞血型相容性檢測紅細(xì)胞血型血清學(xué)檢測方法紅細(xì)胞血型系統(tǒng)介紹第二頁，共六十四頁。 紅細(xì)胞血型抗原為同種異型抗原，是人類遺傳多態(tài)性標(biāo)志之一。 自二十世紀(jì)初Landsteiner發(fā)現(xiàn)ABO血型以來，已陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了許多新的紅細(xì)胞血型抗原。國際輸血協(xié)會ISBT 2022年報告中已確認(rèn)了308個紅細(xì)胞血型抗原。并將其分為血型系統(tǒng)、血型集合和血型系列。 輸血關(guān)系最大的是ABO及Rh血型系統(tǒng)。人類紅細(xì)胞血型第三頁，共六十四頁。研 究 背 景血型系統(tǒng)第四頁，共六十四頁。血型系統(tǒng)第五頁，共六十四頁。ABO血型發(fā)現(xiàn)歷史190

2、1年，Landsteiner把幾份血液標(biāo)本中的紅細(xì)胞分別與他人的血清交叉混合后，發(fā)現(xiàn)有的血液之間發(fā)生凝集反響，有的那么不發(fā)生。將人的紅細(xì)胞血型分為A、B、C(后稱為O)三種類型。1902年他的學(xué)生Decastello及Sturli發(fā)現(xiàn)了第4種血型，即AB型。ABO血型的發(fā)現(xiàn)，開啟了血液免疫學(xué)及免疫遺傳學(xué)的新紀(jì)元。第六頁，共六十四頁。 ABH抗原的生化結(jié)構(gòu) 編 碼巖藻糖轉(zhuǎn)移酶添加巖藻糖到血型多聚糖前體的終端半乳糖上特異性H抗原形成 編 碼A或B轉(zhuǎn)移酶構(gòu)建完成A或B抗原H基因ABO基因第七頁，共六十四頁。第八頁，共六十四頁。第九頁，共六十四頁。ABO抗原的發(fā)育 在胚胎早期A和B抗原就開始產(chǎn)生。但到

3、出生時，還沒有完全發(fā)育，與抗A和抗B試劑血清反響比成人弱，24歲時才能充分表現(xiàn)出抗原性。 第十頁，共六十四頁。ABO抗體的發(fā)育 出生時，正常的抗A和抗B還沒產(chǎn)生或較弱，到三個月時，反響根本上與成年人的一樣。510歲時，抗體的產(chǎn)生到達(dá)頂峰，具有較高效價。第十一頁，共六十四頁。第十二頁，共六十四頁。孟買型與類孟買型孟買型 Bombay phenotype 紅細(xì)胞上沒有A、B、H 抗原，血清中存在抗-A、抗-B 和抗-H 抗體。 表型標(biāo)記為： OhO、OhA、 OhB、OhAB類孟買型 Bombay-like phenotype 表型標(biāo)記為: Ah、Bh、ABh第十三頁，共六十四頁。ABO血型的亞型

4、ABO亞型 subgroups) ，也稱變異型，紅細(xì)胞同屬于一種血型抗原，但在結(jié)構(gòu)上有一定的差異，性能也不完全相同。由于抗原弱，在用能看出抗體檢測抗原和用能看出抗原檢測被檢血清時不符合血清學(xué)反響特征。A亞型：A1和A2是血型血清學(xué)方法確定的最重要的A型紅細(xì)胞亞型，一般認(rèn)為有兩種抗原A和A1，A1型人紅細(xì)胞上有這兩種抗原，A2型人紅細(xì)胞只有A抗原。亞洲人中A1型約占27%；A2型人稀少。其它A亞型：A3、Ax、Aend、Am、Ay和Ael。B亞型一般比A亞型更少：B3、Bx、Bm和Bel第十四頁，共六十四頁。幾種A亞型紅細(xì)胞上的A抗原第十五頁，共六十四頁。A1與A2的區(qū)分A1型紅細(xì)胞：A抗原和A

5、1抗原A2型紅細(xì)胞：A抗原雙花扁豆Dolichos biflous )種子提取液第十六頁，共六十四頁。Rh血型系統(tǒng)1939Levine及Stetson在一個新生兒溶血疾病的母親的血清中，發(fā)現(xiàn)可凝集85%白種人的紅血球抗體。1940Landsteiner及Wiener以恒河猴(Rhesus monkey)的紅血球免疫兔子產(chǎn)生抗體，也可凝集85%白種人的紅血球。因此命名為Rh抗原。恒河猴L(fēng)W抗原第十七頁，共六十四頁。Rh血型系統(tǒng)抗原RH血型系統(tǒng)抗原46個，其中D、C、E、c、e為主要的血型抗原。D抗原：只存在與人紅細(xì)胞膜，不存在與其它組織細(xì)胞中，體液分泌中也無D抗原。D抗原分類：根據(jù)D抗原的數(shù)量和

6、質(zhì)量不同以及抗原性不同，將D抗原分類為5種：常見D抗原、弱D、不完全型D、不完全型弱D及增強(qiáng)D。第十八頁，共六十四頁。Rh血型系統(tǒng)抗原頻率 D antigen 85% C antigen 70% c antigen 80% E antigen 30% e antigen 98%第十九頁，共六十四頁。Rh血型系統(tǒng)抗體Rh抗體主要通過輸血和妊娠免疫產(chǎn)生。一般在初次免疫后2-6個月內(nèi)出現(xiàn)。對Rh(D)初次免疫的人，經(jīng)再次免疫后，在三周內(nèi)抗體濃度可達(dá)最頂峰。同種異型抗體：RhD陰性人輸用D陽性血而產(chǎn)生的抗-D抗體。絕大局部人血清同種異體抗體都是IgG類抗體，多數(shù)在鹽水介質(zhì)中不發(fā)生直接凝集。單克隆抗-D

7、：人鼠或人人淋巴細(xì)胞雜交瘤制備而成。第二十頁，共六十四頁。紅細(xì)胞血型相容性檢測交叉配血血型檢測抗體篩檢及鑒定第二十一頁，共六十四頁。紅細(xì)胞血型血清學(xué)反響能看出紅細(xì)胞： 反定型紅細(xì)胞 不規(guī)那么抗體檢測紅細(xì)胞 譜紅細(xì)胞能看出抗體： 抗A 抗B 抗D 抗M、抗N AHG用能看出的檢測未知的第二十二頁，共六十四頁。 血型檢測血型檢測：確定待檢者的ABO、RhD血型。ABO血型定型： 正定型：是用能看出特異性抗體來測定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的抗原。 反定型：是用能看出抗原的紅細(xì)胞來測定血清中有無相應(yīng)的抗體。第二十三頁，共六十四頁。ABO血型定型抗A抗BA細(xì)胞B細(xì)胞結(jié)果(試劑)(待檢者)AB第二十四頁，共六十四

8、頁。ABO血型定型正定型反定型血型比例%（亞洲）抗-A 抗-BA細(xì)胞B細(xì)胞-+O43+-AB5+-+A27-+-B25第二十五頁，共六十四頁。RhD抗原檢測抗D結(jié)果(試劑)(待檢者)D陽性第二十六頁，共六十四頁。我國臨床常規(guī)RhD血型的檢測，應(yīng)用不識別DVI型D抗原的單克隆抗體。對不出現(xiàn)凝集的標(biāo)本判斷為RhD陰性；對出現(xiàn)弱反響凝集反響強(qiáng)度2+的病人受血者，將其視為RhD陰性，只能輸用RhD陰性的紅細(xì)胞；對弱反響的獻(xiàn)血者視為RhD陽性。初篩RhD陰性和弱反響的標(biāo)本，應(yīng)該進(jìn)一步研究確定其RhD表型，應(yīng)用能夠識別DVI型的單克隆抗體；同時進(jìn)行吸收放散實(shí)驗(yàn)，以排除Del型。第二十七頁，共六十四頁。亞型

9、鑒定方法凝集抑制試驗(yàn)：可溶性抗原與相應(yīng)能看出抗體結(jié)合能夠全部或局部抑制抗體活性，通過此試驗(yàn)可確定抗原的特異性。又稱唾液分泌試驗(yàn)。吸收放散試驗(yàn)：抗體與相應(yīng)抗原在適合條件下發(fā)生凝集或致敏，但這種結(jié)合是可逆的，如改變某些物理條件時，抗體又可以從結(jié)合的紅細(xì)胞上解脫下來，這種試驗(yàn)方法叫做吸收放散試驗(yàn)。第二十八頁，共六十四頁。放散技術(shù)第二十九頁，共六十四頁。 放散試驗(yàn)種類 酸放散 熱放散 ZZAP放散 二磷酸氯喹放散第三十頁，共六十四頁。ABO亞型的血清學(xué)特征A A B B TE C H N I C A L MANUA L 16th edition P366第三十一頁，共六十四頁。各種A亞型的鑒別紅細(xì)胞弱

10、凝集A3 AxAend混合視野凝集(Mf），唾液中含有A物質(zhì)A3與抗A10 紅細(xì)胞呈十分弱的mf凝集Aend及/或抗只與抗AB呈弱凝集AxA1B反應(yīng)不凝集能吸附及放散抗AAm Ay Ael容易吸附放散抗AAm分泌型唾液中有一定量的A物質(zhì)不容易吸附放散抗AAy分泌型唾液含少量的A物質(zhì)吸附放散抗AAel分泌型唾液只含H物質(zhì)無A物質(zhì)第三十二頁，共六十四頁?？笵單克隆抗體第三十三頁，共六十四頁。抗體篩檢及鑒定 用能看出抗原的O型紅細(xì)胞篩檢細(xì)胞及譜細(xì)胞，檢測病人血清中是否含有抗體及對所檢測到的抗體特異性進(jìn)行鑒定。第三十四頁，共六十四頁?？贵w定義不規(guī)那么抗體的含義：通常把抗A、抗B以外的所有紅細(xì)胞血型抗體

11、稱為不規(guī)那么抗體。如抗D、抗N、抗M抗體。完全抗體或不完體抗體： 與相應(yīng)抗原紅細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中或在中性微柱凝膠中出現(xiàn)凝集反響的抗體稱為完全抗體。完全抗體大局部是IgM類抗體，但非所有IgM類抗體都是完全抗體。大局部IgG抗體為不完全抗體，但一些IgG抗體也是完全抗體。第三十五頁，共六十四頁。臨床有意義和臨床無意義抗體： 能引起新生兒溶血病HDN和血型不相容輸血免疫溶血的抗體為臨床有意義抗體。如母體免疫IgG抗體抗-D能夠穿過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，引起胎兒溶血。反之為臨床無意義抗體，如Lewis血型同種異型抗體常是IgM抗體，但極少見溶血性輸血反響和引起HDN，故該血型抗體為臨床無意義抗體。 第三十

12、六頁，共六十四頁。檢測方法方法原理局限性酶檢測技術(shù)破壞紅細(xì)胞表面的唾液酸，降低其表面電荷，減少紅細(xì)胞間斥力，使得紅細(xì)胞靠攏，在不完全抗體的作用下，紅細(xì)胞便出現(xiàn)凝集。改變其他系統(tǒng)(尤其是M，N，F(xiàn)ya，F(xiàn)yb)抗原的構(gòu)型破壞其抗原性。酶還可能改變細(xì)胞懸液的物理性質(zhì)，可導(dǎo)致紅細(xì)胞的非免疫性聚集。凝聚胺法凝聚胺是一種多價陽離子氨基聚合物，它可以引起正常紅細(xì)胞的可逆性凝集，如果被抗體致敏的紅細(xì)胞與凝聚胺連在一起，就會發(fā)生不可逆凝集。在使用凝聚胺檢測抗體活性時，抗原抗體在低離子介質(zhì)中孵育，可促進(jìn)紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體的反應(yīng)，使得抗原抗體更有效的結(jié)合。經(jīng)再懸液中和后，抗體介導(dǎo)的特異性凝集仍然存在，而非特異凝集的

13、細(xì)胞散開。破壞Kell系統(tǒng)抗原抗人球蛋白法一些IgG類抗體(主要是免疫抗體，如Rh血型抗體)是一種7s球蛋白，分子量小，分子長度只250A，與紅細(xì)胞相應(yīng)抗原結(jié)合后，在鹽水介質(zhì)中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應(yīng)，但在加入抗-IgG的抗體后，以其搭橋則可出現(xiàn)凝集反應(yīng)操作繁瑣，耗時長第三十七頁，共六十四頁。第三十八頁，共六十四頁。酶作用縮短紅細(xì)胞間距離第三十九頁，共六十四頁。酶對紅細(xì)胞抗原的作用抗原增強(qiáng)抗原性破壞KiddRhLewisIPFya FybM NS s第四十頁，共六十四頁?？谷饲虻鞍讬z測技術(shù)分類： 直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)DAT 間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT)試劑： 多特異性抗人球(抗-IgG+抗-C3

14、) 單特異性抗人球(抗-IgG或抗-C3)第四十一頁，共六十四頁。SensitizationAgglutination byAnti-human Globulin第四十二頁，共六十四頁。DATPt.RBCs+ AHG觀察凝集并判讀結(jié)果IATRBCs + 血清+ AHG觀察凝集并判讀結(jié)果抗人球蛋白檢測技術(shù)第四十三頁，共六十四頁?？谷饲虻鞍自囼?yàn)應(yīng)用直接抗人球蛋白試驗(yàn)在臨床上主要應(yīng)用于： 胎母血型不合新生兒溶血病HDN 免疫溶血性輸血反響LHTR 自身免疫溶血性貧血AIHA 藥物導(dǎo)致的免疫溶血性貧血 間接抗人球蛋白試驗(yàn)應(yīng)用于： 紅細(xì)胞血型定型； 相容性配血實(shí)驗(yàn)； 產(chǎn)前檢查； 弱D抗原檢測 第四十四頁

15、，共六十四頁。洗滌參加AHG離心陽性直接抗人球蛋白第四十五頁，共六十四頁。間接抗人球蛋白+離心孵育后洗滌陽性陰性陽性陰性加入AHG第四十六頁，共六十四頁。參加對照細(xì)胞后離心觀察結(jié)果Coombs 對照細(xì)胞 (CCC, CC)假陰性結(jié)果陰性結(jié)果陽性陰性第四十七頁，共六十四頁。洗滌加入抗人球蛋白試劑后離心陽性未洗滌假陰性False Negative Tests第四十八頁，共六十四頁?？贵w篩檢篩檢紅細(xì)胞IS3730AHGCCOI1+-2+OII3+-2+1、說明抗體為IgM抗體2、存在劑量效應(yīng)第四十九頁，共六十四頁。劑量效應(yīng) Kidd、Duffy、Rh及MNMNSs系統(tǒng)中抗原存在劑量效應(yīng)。第五十頁，共

16、六十四頁?？贵w篩檢篩檢紅細(xì)胞IS3730AHGCCOI-3+NTOII-2+說明篩檢的抗體為IgG類抗體第五十一頁，共六十四頁。抗體鑒定DCcEeKkAHG1+-+3+2+-+-+-3+-+-+-3+4-+-+-+-5-+-+-6-+-+3+Anti-K第五十二頁，共六十四頁。抗體鑒定DCcEeJkaJkbAHG1+-+W+2+-+-+-3+-+-+-2+4-+-+W+5-+-+-6-+-+-2+Anti-Jka第五十三頁，共六十四頁。交叉配血試驗(yàn) 相容性配血試驗(yàn)，檢測受血者血清中抗體和獻(xiàn)血者紅細(xì)胞抗原是否相合試驗(yàn)為主側(cè)交叉配血試驗(yàn)，檢測受血者紅細(xì)胞和獻(xiàn)血者血清中抗體是否相合試驗(yàn)為次側(cè)交叉配血

17、試驗(yàn)，對其中是不完全抗體的，應(yīng)用間接抗人球蛋白試驗(yàn)確定其相容性。 第五十四頁，共六十四頁。目 的防止發(fā)生輸血反響增加體內(nèi)紅細(xì)胞的存活率進(jìn)一步確定 ABO血型定型正確檢測抗體的另一方法第五十五頁，共六十四頁。血型檢測常規(guī)方法玻片法試管法微板法固相凝集法微柱凝膠法第五十六頁，共六十四頁。孵育洗滌YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYLISS+Sample+固相凝集實(shí)驗(yàn)技術(shù)第五十七頁，共六十四頁。陽性離心弱陽性陰性指示細(xì)胞+第五十八頁，共六十四頁。微柱凝膠檢測參加血清及紅細(xì)胞 凝膠離心力反響腔第五十九頁，共六十四頁。分 類中性膠：微柱腔內(nèi)及凝膠中不含特異性抗體,也不含抗人球蛋白。抗人球膠：微柱腔內(nèi)及凝膠中含抗人球蛋白。特異性膠：微柱腔內(nèi)及凝膠中含特異性抗體。 第六十頁，共六十四頁。應(yīng) 用ABO、RhD血型定型抗人球蛋白檢測 抗體篩檢及鑒定 交叉配血新生兒溶血病檢測第六十一頁，共六十四頁。Thank you 第六十二頁，共六十四頁。聯(lián)系方式：辦公：043