圓二色譜實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、圓二色譜應(yīng)用技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解圓二色(CD)光譜的工作原理。2、學(xué)會(huì)運(yùn)用圓二色譜測氨基酸，蛋白質(zhì)，DNA。二、實(shí)驗(yàn)原理對R和L兩種圓偏振光吸收程度不同的現(xiàn)象。這種吸收程度的不 同與波長的關(guān)系稱圓二色譜，是一種測定分子不對稱結(jié)構(gòu)的光譜法。 圓二色光譜是一種差光譜，樣品在左旋偏振光照射下的吸收光譜與其 在右旋吸收光譜照射下的偏振光之差。物質(zhì)的吸收光譜決定物質(zhì)的顏 色。如果一個(gè)物質(zhì)對左旋偏振光和對右旋偏振光的吸收不同,那么稱 該物質(zhì)具有圓二色性(circulardi2chroism,簡稱CD)。同樣，如果一個(gè)物 質(zhì)對于不同方向的線偏振光的吸收不同,那么該物質(zhì)具有線二色性。 很多各向異性的品體具

2、有線二色性;而很多生物大分子和有機(jī)分子具 有圓二色性在分子生物學(xué)領(lǐng)域中主要用于測定蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)，也 可用來測定核酸和多糖的立體結(jié)構(gòu)。圓二色譜儀由光源、單色器、起偏器、圓偏振發(fā)生器、試樣室和 光電倍增管組成。三、實(shí)驗(yàn)步驟1.通高純氮?dú)?5min后，開機(jī)點(diǎn)亮氙燈:打開主機(jī)電源INSTRUMENTPOWER;打開氙燈電源 XENONLMAPPOWER;等待 LMAPready 燈亮；按紅色 IGNITELMAP 按鈕打開主板電源INSTRUMENTPOWER打開Thermocubechiller （開關(guān)在冷卻器左邊）打開軟件，設(shè)置參數(shù)，選擇數(shù)據(jù)保存設(shè)置；選擇保存位置；開 始實(shí)驗(yàn)，保存數(shù)據(jù)6 關(guān)軟

3、件 TerminateCDSProgram 中關(guān)閉7關(guān)氙燈電源XENONLMAPPOWER8 關(guān)閉 Thermocubechiller9等待10min后關(guān)閉高純氮?dú)猓上刃邢率霾襟E）10清洗比色皿、注射泵及其他附件11光盤刻錄數(shù)據(jù)12關(guān)閉主機(jī)電源INSTRUMENTPOWER四、試驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)處-200/-250 1 I 1 I 1 I 1 I 1 I 1InolblrcsAD-5no-KPIrcseD180200220240260280300Wavelength(nm)-10180200220240260280300Wanelength(nm)圖：a為稀釋前曲線，b為稀釋20倍后曲線在蛋白質(zhì)分子中，肽鏈的不同部分可分別形成a-螺旋、。-折疊、p- 轉(zhuǎn)角等特定的立體結(jié)構(gòu)。這些立體結(jié)構(gòu)都是不對稱的。蛋白質(zhì)的肽鍵 在紫外185240納米處有光吸收，因此它在這一波長范圍內(nèi)有圓二 色性。幾種不同的蛋白質(zhì)立體結(jié)構(gòu)所表現(xiàn)的橢圓值波長的變化曲線 圓二色譜是不同的。a-螺旋的譜是雙負(fù)峰形的，p-折疊是單負(fù)峰 形的，無規(guī)卷曲在波長很短的地方出單峰。蛋白質(zhì)的圓二色譜是它們 所含各種立體結(jié)構(gòu)組分的圓二色譜的代數(shù)加和曲線。因此用這一波長 范圍的圓二色譜可研究蛋白質(zhì)中各種立體結(jié)構(gòu)的含量。在上面兩幅圖中，