糖鏈的序列測定-Smith降解法

1、 糖鏈的序列測定一Smith降解法摘要：Smith降解是將高碘酸氧化產(chǎn)物用硼氫化合物（如硼氫化鉀或硼氫化鈉）還原成穩(wěn)定的多羥基化合物。然后進行適度的酸水解，用紙層析鑒定水解產(chǎn)物，由水解產(chǎn)物可以推斷多糖各組分的連接方式及次序。以葡聚糖為例，其反應(yīng)式如下圖：以1-2位鍵合的糖基經(jīng)高碘酸氧化，平均每個糖基僅消耗一分子高碘酸，并且無甲酸釋放；Smith降解后產(chǎn)生甘油。以1-4位鍵合的糖基經(jīng)高碘酸氧化，平均每個糖基僅消耗一分子高碘酸，并且無甲酸釋放；Smith降解后產(chǎn)生赤蘚醇。以1-3位鍵和的糖基不被高碘酸氧化；Smith降解后仍為原來糖。以1-6位鍵和的糖基或非還原末端基（1-6）經(jīng)高碘酸氧化，消耗二

2、分子高碘酸，同時釋放一分子甲酸；Smith降解后產(chǎn)生甘油。Smith降解是將高碘酸氧化產(chǎn)物用硼氫化合物（如硼氫化鉀或硼氫化鈉）還原成穩(wěn)定的多羥基化合物。然后進行適度的酸水解，用紙層析鑒定水解產(chǎn)物,由水解產(chǎn)物可以推斷多糖各組分的連接方式及次序。以葡聚糖為例，其反應(yīng)式如下圖：Ch2oh2CHOH以1-2位鍵合的糖基經(jīng)高碘酸氧化，平均每個糖基僅消耗一分子高碘酸，并且ch2ohCHjOHOtlJgLXVJ1Oo以i-4位鍵合的糖基經(jīng)高碘酸氧化，平均無甲酸釋放；Smith降解后產(chǎn)生赤蘚醇。CHiOHOH*H?OCHOHCHiOHCHOH害基僅消耗一分子高碘酸，并且H（甘訕CHohOdIO-CHOHO.O

3、hO“CHOOHCO.赤鮮醇乙二醇CHjOHOtOH0OM-OCHOh2ohOHCH2OH二右叫斗u.OH5HjHCHiOHOH10.CHjOH耳CHOHh+ICH.OHtH：OH來糖。川乙二醉糖基不被高碘酸氧化；Smith降解后仍為原:11001*-OH以6位鍵和的糖基或非還原末端基(1酸，同時釋放一分子甲酸；Smith降解后產(chǎn)生甘油。OH碘酸氧化，消耗二分子高碘ohOHCH,OHKBH.h+HjOOH叩.O1O4CHOv/OH甘油OHCO.CHtOHCHO+HCOOHCHjOH0J1CCHiO-CHjOHhoh?oO丄CHaOH土-&OHHOJCHOH本實驗通過紙層析檢測終產(chǎn)物中的甘油、赤

4、蘚醇和糖?！緦嶒灢牧稀浚?、tr油乙二醇CHSOH(CHiOH乙二靜0.1mol/L醋酸。2mol/L硫酸。硼氫化鉀。紙層析試劑及器材：除顯色劑外，同實驗二。硝酸銀顯色劑：A:16%硝酸銀水溶液：丙酮為1：9(V/V)eB:1%NaOH乙醇溶液(W/V)。C:6mol/L氫氧化銨?！緦嶒灢僮鳌窟€原和水解高碘酸氧化后經(jīng)乙二醇處理的溶液對流水透析48小時，蒸餾水透析24小時，于40C以下減壓濃縮至10ml左右，加入70mg硼氫化鉀于室溫、暗處攪拌18小時24小時以還原多糖醛。用0.1mol/L醋酸中和至pH67，對流水透析48小時，蒸餾水透析24小時，減壓蒸干，加1mol/L硫酸2ml，封管，100C水解8小時，用碳酸鋇粉末中和，定量濾紙過濾，濾液減壓濃縮后，通過紙層析方法檢測。紙層析操作詳見實驗2(單糖組成分析)。展層后，將濾紙取出，自然干燥，噴上試劑A，自然干燥，將濾紙浸入試劑B中，待斑點顯出后，再浸入試劑C中以洗去