紫外可見(jiàn)分光光度法基礎(chǔ)_第1頁(yè)
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1、關(guān)于紫外可見(jiàn)分光光度法基礎(chǔ)第一張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月教學(xué)目標(biāo) 1、了解紫外-可見(jiàn)分光光度法的特點(diǎn); 2、掌握光的吸收定律的意義; 3、學(xué)習(xí)分光光度計(jì)的基本構(gòu)造; 4、學(xué)會(huì)用標(biāo)準(zhǔn)曲線法和標(biāo)準(zhǔn)比較法測(cè)定物質(zhì)的含量; 5、掌握吸收曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線的不同之處 6、理解紫外-可見(jiàn)分光光度法的誤差和測(cè)量條件的選擇。第二張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月 第一節(jié) 概述 第三張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月一、光學(xué)分析法: 根據(jù)待測(cè)物質(zhì)(原子或分子)發(fā)射或吸收的電磁輻射,以及待測(cè)物質(zhì)與電磁輻射的相互作用而建立起來(lái)的定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法,統(tǒng)稱為光學(xué)分析法。 它是利用物質(zhì)的

2、分子或離子對(duì)某一波長(zhǎng)范圍的光的吸收作用,對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性分析、定量分析及結(jié)構(gòu)分析, 所依據(jù)的光譜是分子或離子吸收入射光中特定波長(zhǎng)的光而產(chǎn)生的吸收光譜。二、紫外-分光光度法 按所吸收光的波長(zhǎng)區(qū)域不同,分為紫外(200400nm)分光光度法和可見(jiàn)(400760nm)分光光度法,合稱為紫外-可見(jiàn)分光光度法。第四張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月三、特點(diǎn): 1、靈敏度高。待測(cè)物質(zhì)的濃度下限可達(dá)10-710-4g/ml,非常適用于微量或痕量組分的分析。 2、準(zhǔn)確度高。定量分析的相對(duì)誤差一般為1%5%。 3、選擇性好。待測(cè)物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的電磁輻射的吸收也不相同,測(cè)定時(shí),可以選擇適當(dāng)?shù)妮椛洳ㄩL(zhǎng)排除或減

3、少某些干擾。 4、儀器設(shè)備。設(shè)備簡(jiǎn)單,操作簡(jiǎn)便,測(cè)定快速。 2、應(yīng)用范圍廣。很多無(wú)機(jī)離子和有機(jī)化合物都可以測(cè)定。第五張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 基礎(chǔ)知識(shí)第六張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月一、光的本質(zhì)1、光的波粒二象性光是一種電磁波,是一種能在空間高速傳播的粒子流,具有波動(dòng)性和粒子性,即波粒二象性。粒子性:把光作為具有一定能量的光子(或光量子)加以 描述。是一束一束的。 牛頓的微粒說(shuō)能很好地解釋光的直進(jìn)、影的形成、反射、折射等現(xiàn)象缺點(diǎn):微粒說(shuō)不能解釋當(dāng)一束光射到兩種介質(zhì)界面時(shí),既有反射,又有折射,何種情況下反射,何種情況下折射?在解釋兩束光相遇后,為何仍能沿原方

4、向傳播這一常見(jiàn)的現(xiàn)象第七張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月波動(dòng)性:惠更斯的波動(dòng)說(shuō):光可以看作是某種振動(dòng)在介質(zhì)中的傳播 水波、聲波的反射和折射現(xiàn)象比較容易見(jiàn)到,所以波動(dòng)說(shuō)解釋反射、折射是可以令人信服的至于兩列水波互相穿過(guò),幾個(gè)人的說(shuō)話聲音可以同時(shí)聽(tīng)到,都是人們熟知的現(xiàn)象第八張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月 = C / 式中: 為頻率 C 為光速 為波長(zhǎng) 可用波長(zhǎng)( )、頻率()和速度(C)等來(lái)描述??梢?jiàn),光的微粒說(shuō)和波動(dòng)說(shuō)在解釋光現(xiàn)象時(shí),都各有成功的一面,但都不能完滿地解釋當(dāng)時(shí)的一切光現(xiàn)象。 在其后的100多年中,主要由于牛頓的崇高地位及聲望,因而微粒說(shuō)一直占主導(dǎo)地位,波動(dòng)說(shuō)發(fā)

5、展很緩慢人類對(duì)光本性的認(rèn)識(shí),還期待新的現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)直到19世紀(jì)初,人們發(fā)現(xiàn)了光的干涉現(xiàn)象,進(jìn)一步研究了光的衍射現(xiàn)象干涉和衍射是波動(dòng)的重要特征,從而光的波動(dòng)說(shuō)得到迅速發(fā)展人類對(duì)光的本性的認(rèn)識(shí)達(dá)到一個(gè)新的階段第九張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月麥克斯韋的電磁說(shuō),認(rèn)為:(1)光也是一種電磁波。(2)光有波的一般性質(zhì)。(3)光的真空中傳播速度是c=3108m/s。(4)色光是由頻率決定的。即:不同的頻率對(duì)應(yīng)不同的顏色的光。愛(ài)因斯坦的光子說(shuō) 光是由大量的一份一份的光子組成的一束光子流。每一份光子是一個(gè)能量單元。光既是電磁波,也是光子。光既有波動(dòng)性,也有粒子性。波動(dòng)性和粒子性是矛盾的辯證統(tǒng)一。第十

6、張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月2、光的波譜性質(zhì)所有的電磁波本質(zhì)相同,不同電磁波,波長(zhǎng)或頻率不同電磁波譜:把電磁波按波長(zhǎng)大小順序排列起來(lái)??梢?jiàn)光:人眼能感覺(jué)到的光。光譜區(qū)域:X射線遠(yuǎn)紫外近紫外可見(jiàn)光近紅外中紅外遠(yuǎn)紅外微波射頻10nm200nm380nm780nm2.5um25um1mm按照波長(zhǎng)不同:可見(jiàn)光:400-760nm;紫外光(線):200-400nm;紅外線(光):760nm-1000um。第十一張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月可見(jiàn)光的顏色和互補(bǔ)色: 在可見(jiàn)光范圍內(nèi),不同波長(zhǎng)的光的顏色是不同的。平常所見(jiàn)的白光(日光、白熾燈光等)是一種復(fù)合光,它是由各種顏色的光按一定

7、比例混合而得的。利用棱鏡等分光器可將它分解成紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等不同顏色的單色光。 白光除了可由所有波長(zhǎng)的可見(jiàn)光復(fù)合得到外,還可由適當(dāng)?shù)膬煞N顏色的光按一定比例復(fù)合得到。能復(fù)合成白光的兩種顏色的光叫互補(bǔ)色光。 物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系:當(dāng)白光照射到物質(zhì)上時(shí),如果物質(zhì)對(duì)白光中某種顏色的光產(chǎn)生了選擇性的吸收,則物質(zhì)就會(huì)顯示出一定的顏色。物質(zhì)所顯示的顏色是吸收光的互補(bǔ)色。第十二張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月單色光:具有單一波長(zhǎng)的光;復(fù)合光:由不同波長(zhǎng)的光混合而成的光;如太陽(yáng)光等光的色散:通過(guò)棱鏡,太陽(yáng)光能散射出紅、橙、黃、 綠、青、藍(lán)、紫等各種單色光的現(xiàn)象。補(bǔ)色光:兩種適當(dāng)顏色的單

8、色光按一定強(qiáng)度比例混合后得到白光,則這兩種單色光互稱補(bǔ)色光。第十三張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月二、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收與其呈現(xiàn)的顏色1、光的顏色:可見(jiàn)光區(qū),不同顏色的光,具有不同的波長(zhǎng)/nm 顏色互補(bǔ)光400-450紫黃綠450-480藍(lán)黃480-490綠藍(lán)橙490-500藍(lán)綠紅500-560綠紅紫560-580黃綠紫580-610黃藍(lán)610-650橙綠藍(lán)650-760紅藍(lán)綠第十四張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月2、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收當(dāng)電磁輻射的能量與所需的能量相等時(shí),電磁輻射 與物質(zhì)之間才能發(fā)生相互作用而被吸收。因?yàn)殡姶?輻射的波長(zhǎng)越長(zhǎng),則頻率越低,其能量越小。為什

9、么不同的物質(zhì)呈現(xiàn)不同的顏色? 由于溶液對(duì)光的選擇性吸收引起的,溶液呈現(xiàn)的是被吸收物質(zhì)的互補(bǔ)色。如:硫酸銅溶液吸收黃光,呈現(xiàn)蘭色。 高錳酸鉀溶液吸收綠色光,呈現(xiàn)紫紅色。 請(qǐng)問(wèn)一束白光透過(guò)紅色玻璃后,何種顏色的光被吸收了?何種顏色的光幾乎不被吸收?第十五張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月物質(zhì)的顏色與光的關(guān)系完全吸收完全透過(guò)吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光黑色白色藍(lán)色無(wú)色:對(duì)光譜中各種色光透過(guò)程度相同。有色:物質(zhì)的顏色由它透過(guò)或反射的光決定。黑色:幾乎吸收所有的入射光。白色:幾乎全部反射入射光。第十六張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月 一束平行單色光照射溶液時(shí),光的一部分被吸收,

10、一部分透過(guò)溶液,一部分被器皿的表面反射Io = Ia + It + Ir三、透光率與吸光度Io:入射光的強(qiáng)度;Ia:吸收光的強(qiáng)度;It:透射光的強(qiáng)度;Ir:反射光的強(qiáng)度。入射光 I0透射光 It1、透光率第十七張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月在分光光度法中,測(cè)定時(shí)都是采用同樣材質(zhì)的比色皿,反射光的強(qiáng)度基本上是不變的,約占4,其影響可以相互抵消,上式可簡(jiǎn)化為Io = Ia +It 透過(guò)光強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度Io之比稱為透光度或透光率。常用 T 表示:從上式可以看出: 溶液的透光度越大,說(shuō)明對(duì)光的吸收越小,濃度低;相反,透光度越小,溶液對(duì)光的吸收越大,濃度高。 2、吸光度:透光率的倒數(shù)取

11、對(duì)數(shù)。透光率的倒數(shù)能夠反映溶液對(duì)光的吸收程度。T 取值為0.0 % 100.0 %;全部吸收: T = 0.0 %全部投射: T = 100.0 %第十八張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月四、吸收光譜 在溶液濃度和液層厚度一定的條件下,用不同波長(zhǎng)的單色光分別測(cè)定溶液的吸光度,以波長(zhǎng)()為橫坐標(biāo),以吸光度()為縱坐標(biāo)所描繪的曲線,稱為吸收光譜曲線,簡(jiǎn)稱吸收曲線,也可稱為-曲線或吸收光譜。圖9-3 高錳酸鉀溶液的吸收曲線例如:用400-760nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)的單色光分別測(cè)定三種不同濃度的KMnO4溶液,可以繪制出三條形狀相似的吸收曲線。 KMnO4溶液的吸收曲線能夠清楚地描述KMnO4對(duì)不同

12、波長(zhǎng)的光的吸收情況。吸收峰:曲線上凸起部分。最大吸收波長(zhǎng):吸收峰最高處所對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)。常用max表示。KMnO4溶液對(duì)525nm附近的綠光有最大吸收。 max=525nm第十九張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月吸收光譜曲線的意義: 1、根據(jù)溶液吸光度()大小,測(cè)定溶液濃度(c)這是紫外-可見(jiàn)分光光度法定量分析的依據(jù)。不同濃度的溶液,在相同波長(zhǎng)范圍內(nèi)所形成的吸收峰的高度不同。濃度越大,吸收峰越高,吸光度越大。 2、根據(jù)吸收光譜曲線的形狀和最大吸收波長(zhǎng),可定性測(cè)定物質(zhì)。這是紫外-可見(jiàn)分光光度法定性分析的依據(jù)。物質(zhì)的性質(zhì)相同,吸收光譜曲線的形狀相似,最大吸收波長(zhǎng)相同 3、當(dāng)溶液濃度、溫度和液層

13、厚度一定時(shí),溶液對(duì)max的光吸收程度最大。因此,為了獲得較高的測(cè)定靈敏度常用最大吸收波長(zhǎng)( max )的光作為測(cè)定溶液吸光度的入射光。 如擬測(cè)定KMnO4溶液的吸光度,則應(yīng)選擇何種波長(zhǎng)的光作為入射光?思考第二十張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) 基本理論第二十一張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月一、光的吸收定律 當(dāng)一束平行的單色光通過(guò)均勻、無(wú)散射的含有吸光性物質(zhì)的溶液時(shí),在入射光的波長(zhǎng)、強(qiáng)度及溶液的溫度等條件不變的情況下,該溶液的吸光度()與溶液的濃度(c)及液層厚度()的乘積成正比。A = KcL K稱為吸光系數(shù),在一定條件下是常數(shù)。適用條件:1、適用于均勻、無(wú)散射的溶

14、液、固體和氣體;2、適用于一定濃度范圍的稀溶液。第二十二張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月二、吸光系數(shù)溶液濃度不同,其物理意義和表達(dá)式不同。通常用兩種表達(dá)方法來(lái)描述。(一)摩爾吸光系數(shù): 在波長(zhǎng)一定時(shí),溶液濃度為1mol/L,液層厚度為1cm時(shí)的吸光度,常用表示,其單位為L(zhǎng)/molcm。 104時(shí)稱為強(qiáng)吸收; 102時(shí)稱為若吸收; 介于兩者之間時(shí)稱為中強(qiáng)吸收。(二)吸光系數(shù): 在波長(zhǎng)一定時(shí),溶液濃度為1g/L,液層厚度為1cm時(shí)的吸光度,常用表示,其單位為L(zhǎng)/gcm。 第二十三張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月二、吸光系數(shù) 和不能直接測(cè)定。通過(guò)測(cè)定已知準(zhǔn)確濃度的稀溶液的吸光度,

15、根據(jù)光的吸收定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式計(jì)算。 二者之間的換算關(guān)系: = M(三)比吸光系數(shù)(百分吸光系數(shù)):中國(guó)藥典中使用 在波長(zhǎng)一定時(shí),溶液濃度為1%,液層厚度為1cm時(shí)的吸光度,常用E1%1cm表示,其單位為100ml/gcm。 第二十四張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月 當(dāng)入射光的波長(zhǎng)、溶劑的種類、溶液的溫度和儀器的質(zhì)量等因素確定時(shí),、和比吸光系數(shù)只與待測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)有關(guān),是物質(zhì)的特征常數(shù)之一,可以表示物質(zhì)在單位厚度時(shí)對(duì)某一特定波長(zhǎng)光的吸收能力。 不同物質(zhì)對(duì)同一波長(zhǎng)單色光可以有不同的吸光系數(shù)同一物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的單色光也會(huì)有不同的吸光系數(shù)。 一般用物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)max的吸光系數(shù)作為一定條件

16、下衡量靈敏度的特征常數(shù)。 吸光系數(shù)是紫外-可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行定性和定量分析的重要參數(shù)之一。 或越大,表明相同濃度的溶液對(duì)某一波長(zhǎng)的入射光越容易吸收,測(cè)定的靈敏度越高。一般值在103以上時(shí),就可以用分光光度法定量測(cè)定。第二十五張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月例1: 用雙硫腙測(cè)定Cd2+溶液的吸光度。若配制濃度為140g/L的Cd2+溶液,并置于厚度為1cm的吸收池中,在max=525nm波長(zhǎng)處,測(cè)得吸光度為0.220,試計(jì)算摩爾吸光系數(shù)。解法見(jiàn)本書P83頁(yè)例2: 用鄰菲羅啉測(cè)定鐵的吸光度。標(biāo)準(zhǔn)溶液中Fe2+的濃度為500g/L,置于厚度為1cm的吸收池中,在max=508nm波長(zhǎng)處,測(cè)

17、得吸光度為0.099,試計(jì)算該溶液的摩爾吸光系數(shù)和吸光系數(shù)。解法見(jiàn)本書P84頁(yè)第二十六張,PPT共二十九頁(yè),創(chuàng)作于2022年6月小 結(jié) 紫外-可見(jiàn)分光光度法是通過(guò)測(cè)定待測(cè)物質(zhì)在紫外-可見(jiàn)光區(qū)(200-760nm)的吸光度,對(duì)待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。 物質(zhì)對(duì)光的吸收具有選擇性。用不同波長(zhǎng)的入射光分別測(cè)定某種溶液的吸光度,以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)所描繪的曲線,稱為吸收曲線,亦稱為吸收光譜,并由此找出該物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)。 具有單一波長(zhǎng)的光稱為單色光。由不同波長(zhǎng)的光混合而成的光稱為復(fù)合光。如果將兩種適當(dāng)顏色的單色光按一定強(qiáng)度比例混合后得到白光,則這兩種單色光互稱為補(bǔ)色光。當(dāng)一束白光通過(guò)某種溶液時(shí),溶液呈現(xiàn)最大吸收色光的補(bǔ)色光的顏色。 當(dāng)一束強(qiáng)度為Io平行單色光通過(guò)某溶液時(shí),將透射光強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度Io的比值稱為透光率,用T表示。透光率的倒數(shù)能夠反映溶液對(duì)光的吸收程度。在實(shí)際應(yīng)用時(shí),對(duì)透光率的倒數(shù)取對(duì)數(shù),稱為吸光度,用A表示

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