白藜蘆醇在豚鼠耳蝸中的抗自由基作用

1、白藜蘆醇在豚鼠耳蝸中的抗自由基作用【關鍵詞】白藜蘆醇；,慶大霉素；,自由基Antifreeradialativityfresveratrlinguineapighlea3Departentftrhinlarynglgy,XijingHspital,FurthillitaryedialUniversity,Xian710033,hina【Abstrat】AI:Tstudythepreventinfgentaiin(G)ttxiitybyresveratrl(Res)inguineapig.ETHDS:Auditrybrainsterespnse,hlearpreparatinandtransis

2、sineletrnirspeereusedtevaluatetheeffetsfhairellnhearingthreshldandtherphlgyfhairell.SerulevelsfGasalstested.Guineapigsererandlyassignedt3grups(Gtreatedalne,GandResinbinatinandnentrlgrup).Serulevelsfsuperxidedisutase(SD),alndialdehyde(DA)erealstested.RESULTS:DAnentratininseruftheG+Resgrupassignifiant

3、lylerthanthatintheGgrup(P0.05),hileSDlevelasuhhigherthanthatintheGgrup(P0.05).ResdidntaltertheserulevelfG.rphlgialresultserensistentithfuntinalhanges.Therstdaagesurredinthebasalirles.Daagesinupperirleserelighter.Gainlyipairedtheuterhairells,nhihReshadprtetiveeffet.NLUSIN:Resaybeaprisingtherapeutiage

4、nttleanutfreeradial.【Keyrds】resveratrl;gentaiins;freeradial【摘要】目的：觀察白藜蘆醇Res的抗自由基作用.方法：將豚鼠隨機分為3組：慶大霉素組G組；ResG組；空白對照組,每組動物10只.測定聽性腦干反響ABR、耳蝸鋪片、動物血清中丙二醛DA和超氧化物歧化酶SD含量及G血藥濃度，觀察Res對自由基的影響.結果：G+Res組血液中DA較G組明顯減少(P0.05)；G+Res組SD活性明顯高于G組(P0.05).Res對G的血藥濃度無影響.耳蝸鋪片結果顯示空白對照組毛細胞排列整齊，無損傷；G組底圈毛細胞損傷嚴重，向上逐漸減輕，與聽閾升高的

5、程度相平行.而G+Res組的毛細胞局部消失，與G組比擬損傷較輕.結論：Res能對豚鼠體內自由基含量產生很明顯的影響，對G引起的耳毒性有保護作用.【關鍵詞】白藜蘆醇；慶大霉素；自由基0引言在氨基糖苷類藥物的耳毒性機制中，自由基是目前比擬完善的學說之一1-2.在正常機體內會有少量的自由基存在，病理狀態(tài)下，自由基含量會增加，直接造成細胞各成分損害，引起其代謝和功能障礙.白藜蘆醇resveratrl，Res屬于非黃酮類多酚化合物,廣泛存在于種子植物中.構造中有三個酚羥基，在機體中可以競爭性結合自由基，從而減少自由基含量，到達去除自由基的作用.中藥虎杖和葡萄皮中含有大量的Res,具有很大的藥用價值3.丙

6、二醛alndialdehyde,DA、超氧化物歧化酶superxidedisutase,SD是檢測自由基的重要參數.我們將Res與慶大霉素gentaiin,G用于動物后通過檢測動物血清中DA，SD的含量以及觀察聽性腦干反響auditrybrainsterespnse,ABR和細胞形態(tài)學的變化來研究Res對自由基的作用.1材料和方法1.1材料耳廓反射正常的安康雄性雜色豚鼠30只，體質量250350g第四軍醫(yī)大學實驗動物中心；硫酸G西安高科陜西金方藥業(yè)公司；Res西安交大保賽生物技術股份；DA，SD試劑盒南京建成生物工程研究所.1.2方法1.2.1動物分組及處理將30只豚鼠隨機分為3組，每組10只

7、.G組：120g/kg皮下注射G，1次/d，連續(xù)3k；ResG組：用Res375g/kg灌胃；G120g/kg皮下注射，1次/d，連續(xù)3k；空白對照組：不給試驗動物任何藥物.在動物實驗期間每天秤體質量以調整用藥量.用藥前及用藥后第1，3，4和6k檢測ABR，在用藥后第1，3k分別取血檢測血清中DA，SD含量及血清中G含量；第4次測ABR后每組取2只豚鼠耳蝸，供光鏡觀察耳蝸鋪片.1.2.2ABR反響閾檢測豚鼠的ABR以波最為顯著.動物在戊巴比妥鈉40g/kg皮下注射麻醉后，將針型記錄電極置前額正中皮下，參考電極置測試耳外耳道口后上皮下，鼻尖接地.用Bilgi聲刺激器，286計算機自動采樣，采用短

8、純音tneburst，上升下降時間各2s，平臺時間1s1kHz，8kHz刺激，間隔75s，掃描時間20s，疊加256次，帶通濾波801500Hz,在屏蔽隔聲室內常規(guī)測試.1.2.3耳蝸硬鋪片標本制備4將動物麻醉致死，取出聽泡暴露骨性耳蝸，于顯微鏡下在冰盒內快速摘除鐙骨，刺破圓窗，挑開蝸頂；用510g/LAgN3分別從蝸尖和蝸底圓窗反復灌注，完畢后將標本浸入510g/LAgN3液體中，置4冰箱1520in，用25L/L戊二醛固定灌注標本，灌注方法同上，放入冰箱內固定24h，取出標本在陽光下曝光4060in使標本由黃色變成黑色，再置于25L/L戊二醛于4冰箱固定24h，解剖顯微鏡下常規(guī)制備，別離各

9、圈基底膜，甘油封片.1.2.4檢測血清中DA，SD用藥后19d于各組動物心肌取血.離心，取血清-20凍存.采用DA，SD試劑盒，按說明操作檢測.2結果實驗中G組2只動物死亡，死前均消瘦、耳廓反射消失、無力.G+Res組有1只動物死亡.空白對照組無死亡.2.1ABR檢測結果用藥后各組動物ABR出現(xiàn)閾移.1KHzABR閾移：G組28.82.9dB；ResG組5.22.9dB，兩組間差異顯著P0.01，圖1.8kHzABR閾移：G組40.33.7dB；Res+G組12.42.2dB，兩組間差異顯著P0.01高頻聽力損失比低頻重圖2.2.2用藥后兩組動物的耳蝸鋪片比擬空白對照組耳蝸鋪片毛細胞排列整齊，

10、無缺失圖3.G組底圈毛細胞損傷最重圖4，底圈和第二圈外毛細胞損失嚴重，向上逐漸減輕，與聽閾升高的程度相平行.而ResG組相對較輕(圖5).2.3DA含量和SD活力用藥1，3k時，Res+G組血清的DA含量均低于G組，差異顯著P0.05；G組血清SD活力均低于ResG組P0.01，表1.表1不同組間的DA，SD，BUN，r和血清G含量比擬(略)2.4腎功檢測結果用藥1，3k時，Res+G組血清尿素氮BUN和肌酐r均明顯低于G組P0.05，表1.圖5白藜蘆醇組3k時毛細胞局部消失4002.5血清濃度組間血清G濃度無顯著差異(P0.05)；Res對G的血藥濃度無影響.3討論近年來，天然藥物由于其毒副

11、作用小，藥物來源范圍廣泛等原因，在新藥研制領域受到越來越多的重視和關注.Res屬于非黃酮類多酚化合物，廣泛存在于種子植物中.Res的構造中有三個酚羥基，在機體中可以競爭性結合自由基，從而減少自由基含量，到達去除自由基的作用.而氨基糖甙類抗生素的耳毒作用機制之一為自由基學說.此學說認為正常機體組織內有少量的自由基存在，病理狀態(tài)下自由基含量會增加，其中以氧族羥基自由基為主，由于性質不穩(wěn)定，氧化作用強，對膜構造的攻擊最為嚴重，能引起膜脂質氧化，通透性增加造成細胞死亡5-6.我們的結果顯示Res與G同時使用具有保護G所致耳蝸損傷時耳蝸的SD活性作用，增強了內源性氧自由基去除酶的功能，抑制脂質過氧化反響

12、，減少氧自由基的代謝產物DA，從而保護耳蝸毛細胞：試驗有Res+G組和G組的聽閾有明顯差異，SD和DA的數據顯示，Res+G組和G組有明顯差異，具有統(tǒng)計學意義.耳蝸鋪片照片顯示：G組的毛細胞損傷情況比Res+G組嚴重.Res+G組對耳蝸毛細胞有保護作用.腎功檢測結果也顯示Res對G的腎毒性有保護作用，由以上結果可看出Res是一種有效的自由基去除劑并且對G的毒性有抑制作用.但是否具有直接去除氧自由基的作用，還有待于進一步研究.【參考文獻】1SngBB,ShahtJ.VariableeffiayfradialsavengersandirnhelatrstattenuategentaiinttxiityinguineapiginvivJ.HearRes,1996，94(12):87-93.2王錦玲，黃維國，陳陽.水楊酸鈉抗慶大霉素耳毒性作用機理研究J.中華耳鼻咽喉科雜志，2000，351：66.3許小燕，潘林梅.天然植