同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科ISO15189體系文件05尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)

1、同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物組項(xiàng)目操作指導(dǎo)書TJYYJYKWSW/XMZ105第2版標(biāo)題：尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)第1章 第05號(hào)第 PAGE 3 頁 共 NUMPAGES 3 頁1 概述1.1 尿培養(yǎng)常見病原菌：80%為革蘭陰性桿菌，其中以大腸埃希菌最為常見，占尿路感染的70%以上，其次為變形桿菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)氣腸桿菌、沙門菌等；20%為革蘭陽性菌，以腸球菌為多見，次為葡萄球菌、糞鏈球菌、結(jié)核分枝桿菌、少數(shù)為厭氧菌等；支原體、依原體、真菌感染呈上升趨勢。1.2 尿培養(yǎng)常見污染菌：類白喉棒狀桿菌，枯草桿菌等。2 病人準(zhǔn)備和標(biāo)本采集：2.1 中段尿采集法： 2.1.1 女性:

2、成年女性外陰部先以肥皂水清洗，再以無菌水沖洗，用無菌沙布檫拭，以手指將陰唇分開，棄去前段尿,留取中段尿5-7ml于無菌試管內(nèi)送檢。2.1.2 男性: 翻轉(zhuǎn)包皮，用肥皂水清洗尿道口，用清水沖洗，留取中段尿5-7ml于無菌試管內(nèi)送檢。2.1.3 兒童、嬰兒: 先以無菌生理鹽水棉球洗凈其外陰部和外生殖器，將無菌試管或瓶對準(zhǔn)尿道口，以膠布固定于皮膚上，待尿排出后送檢。2.1.4 兩側(cè)腎盂尿: 由?？漆t(yī)生采集，左右側(cè)標(biāo)本必須注明，避免混淆而誤診。2.1.5 膀胱穿刺: 此法用于厭氧菌培養(yǎng)。恥骨上皮膚經(jīng)碘伏消毒后，再以75%乙醇檫拭，用無菌注射器作膀胱穿刺，吸取尿液后排去注射器內(nèi)的空氣，針頭插于無菌橡皮塞

3、上送檢。3 培養(yǎng)基與試劑：3.1 血平板、麥康凱平板、MTM 平板，見: 基本分離培養(yǎng)基及配制。3.2 革蘭染液，本室自配。4 標(biāo)本的處理：4.1 涂片檢查: 中段尿標(biāo)本無需離心，取一滴制成涂片，待其自然干燥，革蘭染色后鏡檢，每油鏡視野查見1個(gè)以上細(xì)菌，有診斷意義，依據(jù)染色性狀報(bào)告結(jié)果，如： 查見革蘭陰性桿菌，1/油鏡視野。 4.2 淋球菌涂片: 一般取晨尿10-15ml，離心沉淀涂片，革蘭染色后鏡檢。報(bào)告：找到革蘭陰性雙球菌或未找到革蘭陰性雙球菌。4.3 抗酸染色：參見:抗酸菌檢驗(yàn)操作規(guī)程4.4 分離培養(yǎng)：取中段尿接種綿羊血瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板，置35、5% CO2 培養(yǎng)18-24 小時(shí)

4、,觀察結(jié)果；有些細(xì)菌生長較慢，可延長培養(yǎng)一天后觀察。 4.5 菌落計(jì)數(shù)： 用定量接種環(huán)(10ul)取尿液10ul，接種血平板，涂抹均勻，待表面干燥后，置35、5% CO2 培養(yǎng)18-24小時(shí)，計(jì)數(shù)菌落，乘以100，即為每ml尿液的菌落數(shù)。4.6 淋病奈瑟菌培養(yǎng)：接到標(biāo)本后立即離心沉淀，接種“淋球菌培養(yǎng)基” 置35、5% CO2 培養(yǎng)48小時(shí)，觀察結(jié)果。4.7 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)：參見抗酸菌檢驗(yàn)操作規(guī)5 結(jié)果觀察:5.1 MTM 平板：菌落無色透明、半透明樣小菌落，直徑1-2mm,氧化酶陽性，革蘭染色為陰性雙球菌，必要時(shí)作生化鑒定。報(bào)告：檢出淋病奈瑟菌5.2 血平板及麥康凱瓊脂平板：可視需要作菌落

5、涂片觀察，作菌種鑒定和藥敏試驗(yàn)，參見“細(xì)菌鑒定操作規(guī)程”。6 報(bào)告方式：6.1 10%的尿路感染患者，可分離出兩種病原菌；若同一份標(biāo)本分離出了3種以上不同細(xì)菌，應(yīng)認(rèn)為受到污染，報(bào)告：雜菌生長，重送標(biāo)本。6.2 革蘭陰性桿菌菌落計(jì)數(shù)大于105cfu/ml；革蘭陽性計(jì)數(shù)大于104cfu /ml有診斷意義；報(bào)告鑒定及敏感試驗(yàn)結(jié)果。6.3 考慮到病人留取尿標(biāo)本時(shí)可能已使用過抗生素，細(xì)菌生長受抑制, 菌量減少,因此當(dāng)菌落計(jì)數(shù)小于上述診斷標(biāo)準(zhǔn)，僅有一種細(xì)菌生長時(shí)，亦報(bào)告鑒定及敏感試驗(yàn)結(jié)果。7 操作流程:中段尿 離心沉淀 定量培養(yǎng) 分離培養(yǎng) 涂片檢查 T-M 培養(yǎng)基 計(jì)數(shù)菌落 血瓊脂、麥康凱平板 直接涂片革蘭染色 離心沉淀涂片找鏡檢 淋病奈瑟菌 35 5% CO2 培養(yǎng) 觀察菌落、染色鏡檢 生化鑒定試驗(yàn) 藥敏試驗(yàn) 報(bào)告 8 臨床意義: 8.1 尿標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)對泌尿道感染性疾病的診斷、治療有重要意義。革蘭陰性桿菌菌落計(jì)數(shù)大于10萬/ml；革蘭陽性計(jì)數(shù)大于1萬/ml有診斷意義。8.2 通過藥物敏感試驗(yàn)，指導(dǎo)臨床醫(yī)生用藥。8.3 抗酸菌檢查：明確診斷泌尿道結(jié)核。8.4 淋病奈瑟菌檢查 確診淋病。9 注意事項(xiàng):9.1 通常應(yīng)取晨起第一次尿液送檢。9.2 患者接受抗菌素治療，使有關(guān)細(xì)菌受到抑制，可影響標(biāo)本的陽性