高考生物必備知識(shí)點(diǎn)：DNA的粗提取與鑒定

1、5/52019年高考生物必備知識(shí)點(diǎn)：DNA的粗提取與鑒定查字典生物網(wǎng)的小編給各位考生整理了2019年高考生物必備知識(shí)點(diǎn)：DNA的粗提取與鑒定 ,希望對(duì)大家有所幫助。更多的資訊請(qǐng)持續(xù)關(guān)注查字典生物網(wǎng)。小編推薦：高考成績(jī)不理想 ,?？瞥煽?jī)也能上本科高考生物必備知識(shí)點(diǎn)：DNA的粗提取與鑒定一、實(shí)驗(yàn)原理DNA在氯化鈉溶液中的溶解度 ,是隨著氧化鈉的濃度的變化而改變的。當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 molL時(shí) ,DNA的溶解度最大 ,濃度為 014 molL時(shí) ,DNA的溶解度最低。利用這一原理 ,可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出。DNA不溶于95%的酒精溶液 ,但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)那么可以溶于酒精

2、溶液。利用這一原理 ,可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNA。DNA中含有脫氧核糖 ,能與二苯胺沸水浴反響生成藍(lán)色物質(zhì) ,因此 ,二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。高考生物必備知識(shí)點(diǎn)：DNA的粗提取與鑒定二、目的要求1. 學(xué)會(huì)DNA的粗提取和鑒定的方法。2. 觀察提取出來(lái)的DNA物質(zhì)的顏色和形狀。材料用具材料：活雞或鮮血雞血。儀器：離心機(jī)、恒溫水裕鍋、載玻片 ,玻璃棒 ,濾紙 ,滴管 ,量簡(jiǎn)100 mL ,l個(gè) ,燒杯100 mL ,l個(gè) ,50 mL、500 mL各 2個(gè) ,試管20 mL ,2個(gè) ,漏斗 ,試管夾 ,紗布。試劑：酒精的體積分?jǐn)?shù)為95的溶液實(shí)驗(yàn)前置于冰箱內(nèi)冷卻24 h ,蒸餾水 ,

3、檸檬酸鈉的質(zhì)量濃度為 01gmL的溶液 ,氯化鈉的物質(zhì)的量濃度分別為 2 molL和0015 mol/L的溶液 ,二苯胺試劑。高考生物必備知識(shí)點(diǎn)：DNA的粗提取與鑒定三、方法步驟實(shí)驗(yàn)前需要制備雞血細(xì)胞液由教師完成 ,制備的方法是：取檸檬酸鈉的質(zhì)量濃度為 01 gmL的溶液抗凝劑100 mL ,置于500 mL燒杯中。將宰殺活雞流出的雞血約180 mL注入燒杯中 ,同時(shí)用玻璃棒攪拌 ,使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合 ,以免凝血。然后 ,將血液倒入離心管內(nèi) ,用 1000 rmin的離心機(jī)離。2min ,此時(shí)血細(xì)胞沉淀于離心管底部。實(shí)驗(yàn)時(shí) ,用吸管除去離。心管上部的澄清液 ,就可以得到雞血細(xì)胞液。1

4、.提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)將制備好的雞血細(xì)胞液5 mL10mL ,注入到50 mL燒杯中。向燒杯中參加蒸餾水20 mL ,同時(shí)用玻璃棒充分?jǐn)嚢? min ,使血細(xì)胞加速破裂。然后 ,用放有紗布的漏斗將血細(xì)胞液過(guò)濾至500mL。取其濾液。2.溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA將氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol的溶液40mL參加到濾液中 ,并搖動(dòng)燒杯 ,使其混合均勻 ,這時(shí)DNA在溶液中呈溶解狀態(tài)。3.析出含DNA的粘稠物沿?zé)瓋?nèi)壁緩緩參加蒸餾水 ,同時(shí)用玻璃棒不停地輕輕攪拌 ,這時(shí)燒杯中有絲狀物出現(xiàn) ,注意觀察絲狀物呈什么顏色。繼續(xù)參加蒸餾水 ,溶液中出現(xiàn)的粘稠物會(huì)越來(lái)越多。當(dāng)粘稠物不再增加時(shí)停止參加蒸餾水

5、這時(shí)溶液中氯化鈉的物質(zhì)的量濃度相當(dāng)于0.14 molL。4.濾取含DNA的粘稠物用放有多層紗布的漏斗 ,過(guò)濾步驟3中的溶液至 500mL的燒杯中 ,含 DNA的粘稠物被留在紗布上。5.將DNA的粘稠物再溶解取 1個(gè) 50 mL燒杯 ,向燒杯內(nèi)注入氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 molL的溶液 20mL。用鈍頭鑷子將紗布上的粘稠物夾至氯化鈉溶液中 ,用玻璃擇不停地?cái)嚢?,使粘稠物盡可能多地溶解于溶液中。6.過(guò)濾含有DNA的氯化鈉溶液取1個(gè)100 mL燒杯 ,用放有兩層紗布的漏斗過(guò)濾步驟5中的溶液。取其濾液 ,DNA溶于濾液中。7.提取含雜質(zhì)較少的DNA在上述濾過(guò)的溶液中 ,參加冷卻的、酒精的體積分?jǐn)?shù)

6、為 95的溶液 50mL使用冷卻的酒精 ,對(duì)DNA的凝集效果較佳 ,并用玻璃棒攪拌 ,溶液中會(huì)出現(xiàn)含雜質(zhì)較少的絲狀物。用玻璃棒將絲狀物卷起 ,并用濾紙吸取上面的水分。這種絲狀物的主要成分就是DNA 。注意觀察絲狀物是什么顏色的。8.DNA的鑒定取兩支20 mL的試管 ,各參加氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為0015 molL的溶液5 mL ,將絲狀物放入其中一支試管中 ,用玻璃棒攪拌 ,使絲狀物溶解。然后 ,向兩支試管中各參加4mlL的二苯胺試劑?；旌暇鶆蚝?,將試管置于沸水中加熱 5 min ,待試管冷卻后 ,觀察并且比擬兩支試管中溶液顏色的變化。將觀察的結(jié)果填寫(xiě)在?實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(cè)?上。高考生物必備知識(shí)點(diǎn)

7、：DNA的粗提取與鑒定1.DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)原理(1)粗提取原理：在NaCl溶液濃度低于0.14mol/L時(shí) ,DNA的溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而降低;在0.14mol/L時(shí) ,DNA的溶解度最小;當(dāng)NaCl溶液濃度繼續(xù)增加時(shí) ,DNA溶解度又增大。(2)純化原理：DNA不溶于酒精 ,但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精。(3)鑒定DNA原理：在沸水浴條件下 ,DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色。2.實(shí)驗(yàn)材料的選擇及處理(1)不選擇豬血等哺乳動(dòng)物的血液 ,因?yàn)椴溉閯?dòng)物成熟的紅細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核。(2)需要在雞血中參加抗凝劑檸檬酸鈉溶液 ,防止血液凝固。(3)需除去雞血中的血漿 ,因?yàn)檠獫{中無(wú)DNA。特別

8、提醒：不同生物的組織中DNA含量不同在選取材料時(shí) ,應(yīng)本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原那么。3.生物實(shí)驗(yàn)過(guò)程步驟：提取細(xì)胞核物質(zhì)溶解核內(nèi)DNA析出DNA粘稠物濾取含DNA的粘稠物DN A粘稠物的再溶解過(guò)濾含有DNA的氯化鈉溶液提取含雜質(zhì)較少的DNADNA的鑒定。操作要點(diǎn)：(1)2次加蒸餾水：第一次是在是為了使血細(xì)胞吸水膨脹破裂 ,加水后必須充分?jǐn)嚢枋寡?xì)胞充分破裂;第二次加蒸餾水是為了稀釋氯化鈉溶液。(2)3次加氯化鈉溶液：第一次加氯化鈉后 ,必須充分晃動(dòng)燒杯 ,使二者混合均勻 ,加速染色質(zhì)中DNA與蛋白質(zhì)別離 ,使DNA充分游離并溶解在氯化鈉溶液中;第二次加氯化鈉溶液也是為了DNA的

9、再溶解 ,這時(shí)溶液中的蛋白質(zhì)含量已很少;第三次加氯化鈉溶液還是為溶解DNA。(3)6次攪拌：除最后一次攪拌外前5次攪拌均朝一個(gè)方向: ,并且在析出DNA、DNA再溶解和提取中 ,各步攪拌都要輕緩玻璃棒 ,不要直插燒杯底部防止DNA分子斷裂。(4)3次過(guò)濾：第一次過(guò)濾 ,留濾液;第二次過(guò)濾 ,留粘稠物;第三次過(guò)濾 ,留濾液。注意這3次過(guò)濾都用紗布 ,獲得沉淀物或粘稠物的通常為多層 ,獲得濾液的紗布層數(shù)適當(dāng)減少。特別提醒：假設(shè)以植物為實(shí)驗(yàn)材料 ,步驟上大致相同 ,在材料的處理上有幾點(diǎn)不同：一是增加研磨步驟 ,目的是破壞細(xì)胞壁;二是參加洗滌劑 ,目的是溶解細(xì)胞膜及核膜;三是加食鹽 ,可加速細(xì)胞膜及核膜的破裂。4.DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)考前須知(1)用冷酒精濃縮和沉淀DNA時(shí)所用的95%酒精 ,必須經(jīng)過(guò)充分預(yù)冷后才能使用 ,冷酒精與含 DNA的氯化鈉溶液體積比是2：1 。如果用冷酒精處理后 ,懸浮于溶液中的絲狀物較少 ,可將混合液放于冰箱中再冷卻幾分鐘 ,然后再用玻璃棒卷起絲狀物。(2)雞血細(xì)胞破碎以后釋放的DNA ,容易被玻璃容器吸附 ,由于細(xì)胞內(nèi)DNA的含量本來(lái)就比擬少 ,再被玻璃容器吸附去一局部 ,提取到的DNA就會(huì)更