化學(xué)發(fā)光介紹

1、化學(xué)發(fā)光介紹第1頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一化學(xué)發(fā)光免疫分析方法簡介化學(xué)發(fā)光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA） 是近十年來在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高靈敏度、檢測范圍寬、操作簡便快速、標(biāo)記物穩(wěn)定性好、無污染、儀器簡單經(jīng)濟等優(yōu)點。它是放射性免疫分析與普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的發(fā)展方向。CLIA發(fā)展迅猛，已占各種免疫分析的首位，是目前放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析最佳的取代者。 第2頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一化學(xué)發(fā)光免疫測定是目前世界公認先進的標(biāo)記免疫測定技術(shù)，

2、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)具有高度的準(zhǔn)確性和特異性，成為檢驗方法中最為重要的技術(shù)之一?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)作為疾病診斷的主要手段已被廣泛用于機體免疫功能、傳染性疾病、內(nèi)分泌功能、腫瘤標(biāo)志物、性激素、甲狀腺功能等方面的體外診斷實驗中。第3頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一化學(xué)發(fā)光是一種特異的化學(xué)反應(yīng)，有機分子吸收化學(xué)能后發(fā)生能級躍遷，產(chǎn)生一種高能級的電子激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定的中間體，當(dāng)其返回到基態(tài)而發(fā)出光子，即為化學(xué)發(fā)光。將化學(xué)發(fā)光與抗原抗體相結(jié)合而形成的免疫分析技術(shù)，即為化學(xué)發(fā)光免疫分析。 化學(xué)發(fā)光的發(fā)光類型通常分為閃光型（flash type）和輝光型（glow type）兩種。閃光

3、型發(fā)光時間很短，只有零點幾秒到幾秒。輝光型又稱持續(xù)型，發(fā)光時間從幾分鐘到幾十分鐘，或幾小時至更久。閃光型的樣品必須立即測量，必須配以全自動化的加樣及測量儀。測量輝光型的樣品可以使用通用型儀器，也可以配全自動化儀器。北京泰格科信的化學(xué)發(fā)光免疫分析診斷試劑發(fā)光類型為輝光型。第4頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一化學(xué)發(fā)光免疫分析的優(yōu)勢 靈敏度高靈敏度高是化學(xué)發(fā)光免疫分析關(guān)鍵的優(yōu)越性，其靈敏度可達 10-22 mol/L （ RIA 為 10 -12 mol/L ）?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析能夠檢出放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無法檢出的物質(zhì)，對疾病的早期診斷具有十分重要的意義。 第5

4、頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一寬的線性動力學(xué)范圍 發(fā)光強度在 4 6 個量級之間與測定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。這與顯色的酶免疫分析吸光度（ OD 值）為 2.0 的范圍相比，優(yōu)勢明顯。雖然 RIA 也有較寬的線性動力學(xué)范圍，但放射性限制了其應(yīng)用。 光信號持續(xù)時間長輝光型的 CLIA 產(chǎn)生的光信號持續(xù)時間可達數(shù)小時甚至一天。簡化了實驗操作及測量。 第6頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一分析方法簡便快速絕大多數(shù)分析測定均為僅需加入一種試劑（或復(fù)合試劑）的一步模式。 結(jié)果穩(wěn)定、誤差小樣品系直接自己發(fā)光，不需要任何光源照射，免除了各種可能因素（光源穩(wěn)定性、

5、光散射、光波選擇器等）給分析帶來的影響，使分析結(jié)果靈敏穩(wěn)定可靠。 安全性好及使用期長免除了使用放射性物質(zhì)。到目前為止，還未發(fā)現(xiàn)其危害性；試劑穩(wěn)定，保存期可達一年。 第7頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一目前化學(xué)發(fā)光開展的項目1、乙肝兩對半（表面抗原、表面抗體、E抗原、E抗體、核心抗體）6、肝纖維化檢測（HA,LN,PCIII,CIV,FN）2、腫瘤標(biāo)志物（AFP,CEA,PSA,FPSA,FER,CA199,CA125,CA153,B-2MG）7、不育不孕類（AOA,AEA,ASA,ATB.ACA.ZB,HCG）3、性激素系列（LH,FSH,TSH,E2,PRO,PRL,

6、TES,HCG,B-HCG）8、優(yōu)生優(yōu)育類（TOX,CMV,HSVI,HSVII,RUB）4、甲狀腺功能（T3,T4,FT3,FT4,TSH,TM,TG,TPO）9、其他類（ALB,一些藥物測試等）5、糖尿病系列（C肽，INS,INS-AB,GAD,PINS,ICA）10、不斷發(fā)展中的其他臨床檢測項目。第8頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一為什么要開展乙肝“兩對半”定量檢測乙型病毒性肝炎是世界性的傳染病，嚴重地威脅著人類的健康。我國是乙型病毒性肝炎高發(fā)病國家。據(jù)統(tǒng)計全世界無癥狀攜帶者（HBsAg攜帶者）超過2.8億，我國占1億以上，且多數(shù)無癥狀。所以乙肝的早期診斷對控制傳

7、染源、降低發(fā)病率及疾病的治療均具有很重要的意義。酶標(biāo)（ELISA）檢測始于20世紀80年代中期，它對乙肝“兩對半”定性測定在疾病的診斷，病情監(jiān)測，療效觀察起到了一定的作用，但酶標(biāo)檢測HbsAg靈敏度較低，不能真正意義上定量測定血清中HbsAg含量。隨著臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，定性檢測已經(jīng)遠遠不能滿足臨床及患者的要求?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析定量測定乙肝“兩對半”大大彌補了酶標(biāo)定性測定及靈敏度低的不足。第9頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一一、化學(xué)發(fā)光極大地提高了檢測靈敏度 HBsAg是HBV感染的特異標(biāo)志，HBsAg的出現(xiàn)就可作為乙肝的早期診斷，絕大多數(shù)HBV感染者外周血可出現(xiàn)HBsAg

8、?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析檢測HBsAg靈敏度可達0.2ng/ml，而酶標(biāo)（EIASA）檢測的靈敏度為2ng/ml，放射免疫（RIA）靈敏度為1ng/ml，化學(xué)發(fā)光免疫分析極大地提高檢測的靈敏度。因此，在急性乙肝早期化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測能及早檢出HBsAg，縮短窗口期的時間，而酶標(biāo)檢測在乙肝早期往往HBsAg呈陰性；其次，可發(fā)現(xiàn)低濃度HBsAg攜帶者；在部分慢性乙肝患者中，由于機體缺乏對HBV包膜蛋白的免疫應(yīng)答，HBsAg表達較低，酶標(biāo)檢測可出現(xiàn)HBsAg和表面抗體（HBsAb）均陰性的情況，化學(xué)發(fā)光免疫分析檢測的高靈敏度則可避免這些情況的發(fā)生，為正確判斷病情提供依據(jù)。并且目前病毒性肝炎和其他病因所致

9、的肝病甚多，而且臨床癥狀、體征及肝功能無特殊改變差異，故只有依靠高靈敏度的病原學(xué)鑒別診斷。第10頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一1縮短急性乙肝HBsAg 測定“窗口期”2如病毒發(fā)生變異后，表達量較低，常規(guī)ELISA測不出抗原，而化學(xué)發(fā)光免疫分析定量具有極高的靈敏度，可發(fā)現(xiàn)并極有可能同時測定出HBsAg和HBsAb。3. 可發(fā)現(xiàn)低濃度HBsAg攜帶者。特別是一些群體如醫(yī)護工作者、病人家屬等，由于長期密切接觸，但又非直接經(jīng)血傳播感染成急性乙肝，而是長期少量感染，并刺激機體產(chǎn)生一定的免疫力，可能呈低濃度感染，特別應(yīng)當(dāng)引起人們的足夠重視，密切關(guān)注并采取措施防止發(fā)展成乙肝或慢性攜

10、帶者。第11頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一二、兩對半定量可動態(tài)觀察療效和病情監(jiān)測 疾病的發(fā)生、發(fā)展、療效、預(yù)后是一個動態(tài)的變化過程， 化學(xué)發(fā)光免疫分析定量檢測乙肝“兩對半”各項標(biāo)志物的濃度變化可對乙肝的病程、治療、預(yù)后起動態(tài)監(jiān)測的作用，能夠讓醫(yī)生對病情療效作出合理的解釋提供依據(jù)，指導(dǎo)治療。1、定量檢測HBsAg，對肝炎病人動態(tài)療效觀察很有價值。HBsAg和HBsAb濃度的變化，可以預(yù)見急性乙肝是否處于恢復(fù)期。如HBsAg濃度降低，HBsAb的濃度逐漸升高，可說明病情正往恢復(fù)期發(fā)展。反之，HBsAg濃度處于較高水平或上升趨勢，而HBsAb一直處于較底水平，則容易發(fā)展為慢

11、性乙肝或攜帶者。2、定量測定HBeAg和HBeAb濃度的變化，可以反映病情變化和治療效果。明確測定HbeAg向抗-Hbe轉(zhuǎn)換的時期，即表現(xiàn)為HbeAg濃度下降和抗-Hbe濃度升高的過程。高濃度的HbeAg還可間接提示病毒處于高復(fù)制狀態(tài)，具有較高的傳染性。高濃度的抗-Hbe一方面提示病情的好轉(zhuǎn)，而在某些時候（如肝功能指標(biāo)很差）可能與肝壞死、肝硬化、肝癌有關(guān)。3、HBcAb濃度的高低可以反映病毒感染的狀態(tài)，高濃度的HBcAb提示乙肝急性感染；低濃度一般為恢復(fù)期或既往感染。有利于對慢性肝炎活動性和非活動性的判斷。慢性乙肝呈抗-Hbc持續(xù)高濃度，故可以用于慢性乙肝的分類。4. 有利于對慢性肝炎活動性和

12、非活動性的判斷。非活動性慢性乙肝各項指標(biāo)相對穩(wěn)定，活動性往往呈進行性變化。第12頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一三、HBsAb的定量測定能夠?qū)贵w是否真正具有“中和”HBV的免疫力作出正確評價，對乙肝的預(yù)防起到監(jiān)督作用。 HBsAb的含量在10mIU/mI以上病人在用ELISA測定就可呈HBsAb“陽性”結(jié)果，但并不提示機體都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10100mIU/mI之間的樣本，定性雖為“陽性”，但此時機體對HBV的免疫力較弱，甚至不能預(yù)防HBV感染，仍有感染HBV的危險。只有HBsAb的含量達到100mIU/mI以上時才可確定具有抵抗HBV入侵的作用。

13、HBsAb的含量越高，機體抵抗HBV入侵的能力越強，持續(xù)保護時間越長。作定量測定，根據(jù)HBsAb的含量可判斷機體對HBV的免疫狀態(tài)及乙肝疫苗的免疫效果，HBsAb的含量較低，應(yīng)該加強注射一針乙肝疫苗，使HBsAb的濃度提高起到保護作用。同時，乙肝疫苗接種后機體產(chǎn)生免疫力因個體差異而不同，有的可產(chǎn)生高濃度的抗體并持續(xù)數(shù)十年。而有的人產(chǎn)生的抗體濃度不是很高，且持續(xù)時間也不長，數(shù)年后就逐漸消失，這部分人應(yīng)及時關(guān)注HBsAb濃度變化，必要時也應(yīng)加強注射一針乙肝疫苗（但也有人認為機體在受到病毒感染時，會產(chǎn)生記憶反應(yīng)，迅速提高免疫力）。因此定量測定對乙肝疫苗免疫力的評價和高危人群預(yù)防免疫具有重要意義，特別

14、是在少年兒童預(yù)防乙肝方面。第13頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一四、降低科室成本 大家都知道進口試劑因試劑價格昂貴,并且標(biāo)準(zhǔn)品等要單買，從而使乙肝“兩對半”定量難以普及。乙肝“兩對半”進口化學(xué)發(fā)光試劑價格較高，國產(chǎn)化學(xué)發(fā)光試劑價格比進口試劑的低的多。國家已實行了同一種方法學(xué)統(tǒng)一收費標(biāo)準(zhǔn)，不分國產(chǎn)或進口試劑，上海、浙江等城市已執(zhí)行國產(chǎn)、進口化學(xué)發(fā)光試劑檢測項目同一個收費標(biāo)準(zhǔn)。用質(zhì)量、性能與進口乙肝“兩對半”試劑相當(dāng)?shù)膰a(chǎn)試劑，可以降低科室成本。第14頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一化學(xué)發(fā)光與常用免疫分析方法對比方法優(yōu) 點缺 點化學(xué)發(fā)光操作簡單，成本

15、較低，靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定進口試劑成本較高，國產(chǎn)試劑合理放射免疫試劑成本低，靈敏度較高操作復(fù)雜，放射性污染，有效期短酶聯(lián)免疫試劑成本低，操作簡單靈敏度低，適用于定性和半定量時間分辨靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定操作復(fù)雜，反應(yīng)時間長，試劑成本較高電化學(xué)發(fā)光靈敏度較高，試劑較穩(wěn)定試劑成本高，儀器維護費用較高，有本底干擾第15頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一化學(xué)發(fā)光免疫分析法作為非放射性的免疫分析法，具有靈敏度高、所需時間短、無污染、檢測范圍寬等特點，隨著各種自動發(fā)光分析儀器面市，以及不同類型的化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒的不斷推出，使得檢測項目更多，檢測速度提高，這些勢必推動化學(xué)發(fā)光免

16、疫分析的迅速發(fā)展，成為時間分辨、放射免疫和酶聯(lián)免疫分析的取代者，已成為檢驗的主流,使實驗室更好、更快地為臨床服務(wù)。第16頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一顯著的經(jīng)濟效益對醫(yī)院：增加了設(shè)備、患者多了一種選擇，增加了盈利的渠道對科室：改進了方法，科室收益上升，科室地位得到提高對醫(yī)生：擺脫了患者投訴的煩惱，增加了臨床病情的判斷能力。第17頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一化學(xué)發(fā)光和酶法對比項目名稱收費標(biāo)準(zhǔn)(元)每月標(biāo)本量每年毛收入(萬元)每年成本(萬元)年凈收入/萬元(保守估計)乙肝兩對半18015*22天71.28 23.76每人份60元 47.52化學(xué)

17、發(fā)光免疫僅乙肝五項年凈收入總計47.52萬元 乙肝兩對半25 15*22天9.901.19每人份3元8.71酶法試劑乙肝五項年凈收入總計 8.71萬元 其余化學(xué)發(fā)光項目：腫瘤5項，激素8項，糖尿病5項，肝纖維化5項等，都可以創(chuàng)造較大的效益。 第18頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一目前化學(xué)發(fā)光檢測產(chǎn)品介紹分類兩大類一、原裝進口主要以貝克曼、羅氏、雅培、日本東曹等等為主特點：1、儀器試劑為全部封閉配套試劑，自動化程度較高2、檢測成本較高3、對每天的標(biāo)本量有一定要求，主要面向中大型醫(yī)院二、國產(chǎn)產(chǎn)品主要以北京泰格科信、北京科美、廈門波生、鄭州安圖等為主特點：1、儀器試劑一般為配

18、套，但是在廠家授權(quán)下半開放2、檢測成本較低3、面向中小型醫(yī)院4、缺點為自動化程度不高。第19頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一北京泰格科信化學(xué)發(fā)光介紹1、化學(xué)發(fā)光檢測儀一臺2、全自動洗板機一套3、電腦打印機一套第20頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一第21頁，共23頁，2022年，5月20日，23點0分，星期一北京泰格科信化學(xué)發(fā)光特點綜述方法學(xué) 化學(xué)發(fā)光免疫測定是目前世界公認先進的標(biāo)記免疫測定技術(shù)，半自動化學(xué)發(fā)光原理是采用辣根過氧化物酶（hrp）標(biāo)記（抗原或抗體）化學(xué)發(fā)光底物是魯米諾，辣根過氧化物酶作用于底物發(fā)光，通過化學(xué)發(fā)光儀測定各孔的發(fā)光強度，發(fā)光強度與樣本濃度存在線性關(guān)系?；瘜W(xué)發(fā)光受自然光干擾遠小于熒光，因而在方法學(xué)上化學(xué)發(fā)光要好于熒光。 檢測項目 肝炎類、性激素類、甲狀腺功能類、肝纖維化類、腎功能類、腫瘤標(biāo)志物類、糖尿病類、優(yōu)生優(yōu)育類、不孕不育類。 操作步驟（以乙肝為例） 1.試劑盒平衡至室溫。2.工作洗滌液：將10ml濃縮洗滌液和240ml蒸餾水或去離子水在干凈的瓶中混合均勻備用。3按順序加入：加樣量（l）孔 別校準(zhǔn)品孔待測樣本孔 S1S550-待測樣本-50酶結(jié)合物50 50 加貼封板膜，輕振混勻，37溫育0.5小時4.小心將封板膜揭下，用洗板機洗滌5次，每