《分子生物學(xué)》名詞解釋與簡答題解析

1、分子生物學(xué)名詞解釋與簡答題解析（-）名詞解釋1、分子生物學(xué)：是一門從分子水平研究生命現(xiàn)象、生命本質(zhì)、生命活動及其規(guī)律的科學(xué)。2、醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)：是分子生物學(xué)的一個重要分支,又是一門新興交叉學(xué)科。它是從分子水平上研究人體在 正常和疾病狀態(tài)下的生命活動及其規(guī)律，從分子水平開展人類疾病的預(yù)防、診斷和治療研究的一門科學(xué)。過去主要是通過生物化學(xué)方法從各種材料中提取、制備酶制劑?，F(xiàn)在主要應(yīng)用基因工程技術(shù)制取 酶制劑。4、蛋白質(zhì)工程：過去主要是釆用化學(xué)方法對純化的蛋白質(zhì)進行結(jié)構(gòu)改造,制備出有特定功能的蛋白質(zhì)?，F(xiàn)在 主要應(yīng)用基因工程技術(shù)，從改造目的基因的結(jié)構(gòu)入手，在受體細胞中表達不同結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)。5、微生物工

2、程：又稱發(fā)酵工程是利用微生物特定性狀,使微生物產(chǎn)生有用物質(zhì)或直接用于工業(yè)化生產(chǎn)的技術(shù)。6、DNA的甲基化：DNA的一級結(jié)構(gòu)中,有一些堿基可以通過加上一個甲基而被修飾，稱為DNA的甲基化。7、CG島：在整個基因組中存在一些成簇、穩(wěn)定的非甲基化CG,這類CG稱為CG島。9、順反子：由結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄生成的RNA序列亦稱為順反子。10、帽子結(jié)構(gòu)：5,端第1個核昔酸是甲基化鳥瞟吟核昔酸，它以5端三磷酸酯鍵與第2個核昔酸的5端相 連，而不是通常的3、5磷酸二酯鍵。11、核酶：在沒有任何蛋白質(zhì)（酶）存在的條件下，某些RNA分子也能催化其自身或其它RNA分子進行化學(xué) 反應(yīng)，即某些RNA具有酶樣的催化活性，這類具

3、有催化活力的RNA被命名為核酶。12、蛋白質(zhì)的變性：蛋白質(zhì)分子愛到物理化學(xué)因素（如加熱、紫外線、高壓、有機溶劑、酸、堿等）的影響時, 可使維持空間結(jié)構(gòu)的次級鍵斷裂，性質(zhì)改變，生物活性喪失，稱為蛋白質(zhì)的變性。13、蛋白質(zhì)的復(fù)性：導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性的因素除去后,某些蛋白質(zhì)又可重新回復(fù)天然構(gòu)象，表現(xiàn)出天然蛋白質(zhì)的 生物活性，稱為蛋白質(zhì)的復(fù)性。14、基因：是核酸分子中貯存遺傳信息的遺傳單位,是指貯存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA序列信息及表達 這些信息所必需的全部核昔酸序列。15、基因組：細胞或生物體中,一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和稱為基因組。16、操縱子：是指數(shù)個功能上相關(guān)聯(lián)的結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)在一起,構(gòu)成信

4、息區(qū)，連同其上游的調(diào)控區(qū)（包括啟動子 和操縱基因）以及下游的轉(zhuǎn)錄終止信號所構(gòu)成的基因表達單位，所轉(zhuǎn)錄的RNA為多順反子。轉(zhuǎn)錄單位丄儲存RNA和蛋白質(zhì)肽鏈序列信息的結(jié)構(gòu)基因與指導(dǎo)轉(zhuǎn)錄起始部位的序列（啟動子）和轉(zhuǎn)錄終止的 序列（終止子）共同組成轉(zhuǎn)錄單位。17、啟動子：是RNA聚合酶結(jié)合的區(qū)域,操縱基因?qū)嶋H上不是一個基因，而是一段能被特異阻遏蛋白識別和 結(jié)合的DNA序列。18、質(zhì)粒：是細菌細胞內(nèi)攜帶的染色體外的DNA分子，是共價閉合的環(huán)狀DNA分子，能獨立進行復(fù)制。 冬理還相逢缸具有相同復(fù)制起始位點和分配區(qū)的兩種質(zhì)粒不能共存于一個宿主菌,這種現(xiàn)象稱為質(zhì)粒 的不相容性。20、轉(zhuǎn)位因子：即可移動的基因成

5、分,是指能夠在一個DNA分子內(nèi)部或兩個DNA分子之間移動的DNA片段。20、自私DNA：核生物基因組中也存在一些可移動的遺傳因素,這些DNA順序并無明顯生物學(xué)功能，似乎為 自己的目的而組織，故有自私DNA之稱。21、自殺基因：將某些細菌、病毒和真菌中特異性的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入腫瘤細胞，此基因編碼的特異性酶類能將原先對細胞無毒或毒性極低的前體物質(zhì)在腫瘤細胞內(nèi)代謝成毒性物質(zhì)，達到殺死腫瘤的目的，這類前體轉(zhuǎn)移酶基因 稱為22、斷裂基因：真核生物的結(jié)構(gòu)基因是不連續(xù)的,編碼氨基酸的序列被非編碼序列所打斷，因而被稱為在 編碼序列之間的序列稱為內(nèi)含子，被分隔開的編碼序列稱為外顯子。23、順式調(diào)控元件（順式作用元件）

6、：是指那些與結(jié)構(gòu)基因表達調(diào)控相關(guān)、能夠被基因調(diào)控蛋白特異性識別和 結(jié)合的DNA序列。24、反式作用因子：一些蛋白質(zhì)因子可通過結(jié)合順式作用元件而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄活性,這些蛋白質(zhì)因子稱為反式 作用因子。真核細胞內(nèi)含有大量的序列特異性的DNA結(jié)合蛋白，其中一些蛋白的主要功能是使基因開放或關(guān)閉，稱為反 式作用因子，簡稱反式因子。25、啟動子：是RNA聚合酶特異性識別和結(jié)合的DNA序列。26、上游啟動子元件：是TATA盒上游的一些特定的DNA序列,反式作用因子可與這些元件結(jié)合，通過調(diào)節(jié) TATA因子與TATA盒的結(jié)合、RNA聚合酶與啟動子的結(jié)合及轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成（轉(zhuǎn)達錄起始因子與RNA 聚合酶結(jié)合）來調(diào)

7、控瓚嶙多囈。y 因超家族丄是指一組由多基因家族及單基因組成的更大的基因家族。妥典錄轉(zhuǎn)座五_真核生物中一些中度重復(fù)序列的轉(zhuǎn)移成分則與一般細菌中的轉(zhuǎn)移成分不同，要先轉(zhuǎn)錄成 RNA,再逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA,然后重新整合到基因組中，這種逆轉(zhuǎn)錄旁路的轉(zhuǎn)移成分稱為您_筮虹以線性染色體形式存在的真核基因組DNA的末端都有一種特殊的結(jié)構(gòu)，稱，功能主要有保護 線性DNA的完整復(fù)制，保護染色體末端及決定細胞的壽命等。34、反向重復(fù)順序：是指兩個順序相同的拷貝在DNA鏈上呈反向排列。其中一種形式是兩個拷貝反向串聯(lián)在 一起，中間沒有間隔順序，這種結(jié)構(gòu)亦稱回文結(jié)構(gòu)。35、RFLP技術(shù)：通過限制酶酶切片段的長度多態(tài)性來揭示

8、DNA堿基組成不同的技術(shù)稱為限制性片段長度多態(tài)性技術(shù)，簡稱O36、遺傳圖：又稱連鎖圖,是以具有遺傳多態(tài)性的遺傳標記作為“位標”遺傳學(xué)距離為“圖標”的基因組圖。37、物理圖：是以一段已知核甘酸序列的DNA片段為“位標”，以DNA實際長度（Mb或kb ）作為圖距的基因 組圖。38、光修復(fù)：生物體內(nèi)有一種光復(fù)活酶,被光激活后能利用光反提供的能量使紫外線照射引起的噺淀二聚體分 開，恢復(fù)原來的兩個核昔酸，稱為光修復(fù)。39、逆轉(zhuǎn)錄：是指以RNA為模板,利用宿主細胞中4種dNTP為原料，在引物的3端以57,方向合成與RNA 互補的DNA鏈的過程，此過程與中心法則方向相反，故稱為40、SD序列：AUG密碼子上

9、游813個堿基處存在一個稱為SD序列的結(jié)構(gòu)，該序列與小亞基中16SrRNA3 端的序列互補，當(dāng)mRNA與小亞基結(jié)合時，SD序列與16SrRNA3端互補序列配對結(jié)合，起始密碼準確的定位 于翻譯起始部位。虹屋因表達丄是指生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列過程，合成特定的蛋白 質(zhì)，進而發(fā)揮其特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的全過程。42、基因工程：將基因進行克隆,并利用克隆的基因表達、制備特定的蛋白或多肽產(chǎn)物，或定向改造細胞乃至 生物個體的特性所用的方法及相關(guān)的工作統(tǒng)稱為43、分子克隆：制備DNA片段,并通過載體將其導(dǎo)入受體細胞，在受體細胞中復(fù)制、擴增，以獲得單一 DNA 分子的

10、大量拷貝。44、DNA重組：不同來源的DNA分子可以通過末端共價連接（磷酸二酯鍵）而形成重新組合的DNA分子。這一過程稱為45、管家基因：有些在生命全過程都是必需的,且在一個生物個體的幾乎所有細胞中持續(xù)表達的基因，通常被稱為46、誘導(dǎo)表達：有些基因表達極易愛環(huán)境變化影響,在特定環(huán)境信號刺激下，有些基因的表達表面為開放或增強，則這種表達方式稱為47、嚴謹反應(yīng)：細菌在缺乏氨基酸的環(huán)境中,RNA聚合酶活性降低，RNA （ rRNA,tRNA ）合成減少或停止，這種現(xiàn)象稱為48、衰減子：細菌中的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)翻譯合成是偶聯(lián)在一起的。這一特點使細菌的一些操縱子的特殊序 列可以在轉(zhuǎn)錄過程中控制轉(zhuǎn)錄水

11、平。這些特殊序列稱為又稱弱化子，位于一些操縱子中第一個結(jié)構(gòu)基因之 前 ,是- -段能減弱轉(zhuǎn)錄作用于的順序。50、細胞通訊：細胞間識別、聯(lián)絡(luò)和相互作用的過程稱為51、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)：針對外源信號所發(fā)生的細胞應(yīng)答反應(yīng)全過程稱為52、調(diào)控結(jié)合元件：細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子有許多都是蛋白質(zhì),其分子中存在著一些特殊的結(jié)構(gòu)域，它們是信 號分子相互識別的部位，信號分子通過這些特殊結(jié)構(gòu)域的識別和相互作用而有序銜接，形成不同的信號傳遞鏈 或稱為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，這些結(jié)構(gòu)域稱為53、第二信使：G蛋白活化之后唧可激活其下游的效應(yīng)分子，如腺昔酸環(huán)化酶和磷脂酶C等。這些效應(yīng)分子 隨后可催化一些分子的產(chǎn)生或濃度和分布的變化。這些小分子

12、能夠繼續(xù)向下游傳遞信息，因而被稱為細胞內(nèi)小 分子信使，亦稱為第二信使。已知的細胞內(nèi)小分子信使包括cAMP、cGMP、甘油二酯（DAG）、IP3和C：+等等。54、DNA重組：不同來源的DNA分子可以通過末端共價連接（磷酸二酯鍵）而形成重新組合的DNA分子，這一過程稱為55、限制酶：是一類內(nèi)切核酸酶,因而又稱為限制性內(nèi)切核酸酶。這類酶能識別雙鏈DNA內(nèi)部特異位點并且 裂解磷酸二酯鍵。56、同功異源酶：來源不同的酶,但能識別和切割同一位點，這些酶稱為57、同尾酶：有些限制酶識別序列不同,但是產(chǎn)生相同的粘性末端，這些酶為58、Klenow片段：用枯草桿菌蛋白酶可將DNA聚合酶I裂解為大小兩個片段，大

13、片段的分子量為76kD,這個片段也稱為59、噬菌體：是感染細菌的病毒,其基因組是線性雙鏈DNA分子，當(dāng)其感染宿主細胞并將基因整合到細胞后， 基因組DNA變成環(huán)狀，用于分子克隆中的載體。60、基因文庫：采用限制酶將基因組DNA切成片段,每一 DNA片段都與一個載體分子拼接成重組DNA,將所 有的重組DNA分子都引入宿主細胞并進行擴增，得到分子克隆的混合體，這樣一個混合體稱為61、cDNA文庫：將cDNA的混合體與載體進行連接，使每一個cDNA分子都與一個載體分子拼接成重組DNA。 將所有的重組DNA分子都導(dǎo)入宿主細胞并進行擴增，得到分子克隆的混合體，這樣一個混合體稱為一62、cDNA：是指體外用

14、逆轉(zhuǎn)錄酶催化,以mRNA為模板合成的互補DNA。63、轉(zhuǎn)化：是指將質(zhì)粒或其它外源DNA導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主細胞。并使其獲得新的表型的過程。 絲*丄由噬菌體和細胞病毒介導(dǎo)的遺傳信息轉(zhuǎn)移過程也稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)。實塗虹真核細胞主動攝取或被導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。66、顯微注射法：在制備轉(zhuǎn)基因動物時,將外源基因通過毛細玻璃管，在顯微鏡下直接注射到受精卵的細胞核內(nèi)，稱為67、基因定點誘變：是指將基因的某_個或某些位點進行人工替換或刪除的過程。68、雙脫氧鏈終止法：是以單鏈或雙鏈DNA為模板，采用DNA引物引導(dǎo)新生DNA的合成，因此又稱為引物 合成法，或酶促引物合成法。69、核酸分子雜交：是指具有

15、互補序列的兩條核酸單鏈在一定條件下按堿基配對原則形成雙鏈的過程。70、探針：雜交體系中已知的核酸序列稱作探針。71、DNA變性：在物理或化學(xué)因素作用下,例如加熱、酸堿或紫外線照射，可以導(dǎo)致兩條DNA鏈之間的氫鍵 斷裂，而核酸分子中的所有共價鍵（如磷酸二酯鍵、糖昔鍵等）則不受影響，稱為 ；使變性的因素解除后，兩條DNA鏈又可通過堿基互補配對結(jié)合形成DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱73、印跡：凝膠中的DNA片段如然在堿變性過程中已筌變性成単鏈并已斷裂,轉(zhuǎn)移后，各個DNA片段在膜上 的相對位置與在凝膠中的相對位置仍然一樣，因而稱為74、Northern印跡雜交：將待測RNA樣品經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然

16、后與標記的核酸探針進行固- 液相雜交，檢測RNA （主要是mRNA ）的方法。75、斑點印跡：將RNA或DNA變性后直接點樣于硝酸纖維素膜或尼龍膜上，用于基因組中特定基因及其表達 的定性及定量研究，稱76、原位雜交;核酸保持在細胞或組織切片中，經(jīng)適當(dāng)方法處理細胞或組織后，將標記的核酸探針與細胞或組 織中的核酸進行雜交，稱77、液相雜交：待測核酸分子與核酸探針都存在于雜交液中,堿基互補的單鏈核酸分子在液體中配對形成雜交 分子。目前常用的液相雜交的RNA酶保護分析法（RPA）、核酸酶S1保護分析法。78、停滯效應(yīng):（平臺期）j_隨著目的DNA擴增產(chǎn)物的逐漸積累，酶的催化反應(yīng)趨于飽和,此時DNA擴增

17、產(chǎn)物 的增加減慢，進入相對穩(wěn)定狀態(tài)，即出現(xiàn)79、筑巢PCR：先用一對外側(cè)弓I物擴增含目的基因的大片段，再用內(nèi)側(cè)引物以大片段為模板擴增獲取目的基因。80、多重PCR：是在一次反應(yīng)中加入多對引物,同時擴增一份DNA樣品中不同序列的PCR過程。81、連接酶鏈反應(yīng)（LCR連接酶擴增反應(yīng)LAR）：是以DNA連接酶將某 DNA鏈的5磷酸與另_相鄰鏈的3 羥基連接為基礎(chǔ)的循環(huán)反應(yīng)。82、基因打靶：是指通過DNA定點同源重組,改變基因組中的某一特定基因，從而在生物活體內(nèi)研究此基因 的功能。若定向敲除某個基因，稱為基因敲除，若定向?qū)⒁欢位蛐蛄刑娲硪欢位蛐蛄?，稱為基因敲入。83、基因敲除：通過DNA同源重組

18、,使得ES細胞特定的內(nèi)源基因被破壞而造成其功能喪失,然后通過ES細 胞介導(dǎo)得到該基因喪失的小鼠模型的過程稱為;其基本程序丄（1）構(gòu)建打靶載體；（2）ES細胞的體外培養(yǎng);（3 ）重組載體轉(zhuǎn)染ES細胞；（4）重組體轉(zhuǎn)染的ES細胞的鑒定；（5 ） ES細胞胚胎移植和嵌合體雜交育種。84、打靶載體：由部分殘留的待敲除基因的同源片段、位于其內(nèi)部的neo基因和位于其外側(cè)的HSV - tk基因共同構(gòu)成的載體即為 85、DNA芯片技術(shù)：指在固相支持物上原位合成寡核昔酸或者直接將大量DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標記的樣品雜交，通過對雜交信號的檢測分析，即可得出樣品的遺傳信息。DNA芯

19、 片的類型丄原位合成芯片和DNA微集陣列。86、自發(fā)突變：引起DNA 一級結(jié)構(gòu)改變的原因主要有兩類丄一類是復(fù)制時堿基的偶然性錯配，由此引起的突 變稱為自發(fā)突變；另一類是體內(nèi)代謝過程中產(chǎn)生的自由基由某些環(huán)境因素引起的DNA一級結(jié)構(gòu)改變，由此引 起的突變稱為誘發(fā)突變。87、錯義突變：DNA分子中堿基對的取代,使得mRNA的某一密碼子發(fā)生變化，由它所編碼的氨基酸就變成 另一種不同的氨基酸，使得多肽鏈中氨基酸的順序也相應(yīng)地發(fā)生改變，這種突變稱88、同義突變：堿基取代,在蛋白質(zhì)水平上沒有引起變化，氨基酸沒有被取代，這是因為突變后的密碼子與原 來的密碼子代表同一個氨基酸，這種突變稱為同義突變。89、移碼突

20、變：在編碼序列中,單個堿基數(shù)個堿基的缺失或插入以及片段的缺失或插入等均可使突變位點之后 的三聯(lián)體密碼閱讀框發(fā)生改變，不能編碼原來的正常蛋白質(zhì)，即所謂90、原癌基因：是一種正常細胞的正?；?在正常細胞中編碼關(guān)鍵性調(diào)控蛋白，在細胞增殖和分化中起重要 調(diào)控作用，它不具有致癌性，但當(dāng)其受到物理、化學(xué)或病毒等致癌因素的作用而失控或發(fā)生突變時，可過度表 達或持續(xù)表達其產(chǎn)物，就變成了癌基因，可以使細胞惡性轉(zhuǎn)化。92、抑癌基因（抗癌基因）存在于正常細胞內(nèi)的一大類可抑制細胞生長并具有潛在抑癌作用的基因。其表達 產(chǎn)物主要包括跨膜受體、胞質(zhì)調(diào)節(jié)因子或結(jié)構(gòu)蛋白、轉(zhuǎn)錄因子和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子、細胞周期因子、DNA損傷修復(fù)

21、因子以及其它一些功能蛋白。心噸期素週期依姬性鯉監(jiān)_有些蛋白激酶的細胞周期特異性或時相性激活依賴于一類呈細胞周期特異性 或時相性表達、累積與分解的蛋白質(zhì)，后者被稱為細胞周期素，前者螞甚動困壬丄在癌變的啟動階段使細胞發(fā)生癌前期改變的因素。95、基因診斷：是以DNA和RNA為診斷材料，通過檢查基因的存在、缺陷或表達異常，對人體狀態(tài)和疾病作 出診斷的方法和過程。96、基因治療：通過在特定靶細胞中表達該細胞本來不表達的基因,或采用特定方式關(guān)閉、抑制異常表達基因， 達到治療疾病目的的治療方法。97、基因置換：（基因矯正）：將特定的目的基因?qū)胩囟ǖ募毎?通過定位重組，以導(dǎo)入的正常基因置換基因 組內(nèi)原有的缺

22、陷基因。98、基因添加（基因增補）：通過導(dǎo)入外源基因使靶細胞表達其本身不表達的基因。99、基因干預(yù)：采用特定的方式抑制某個基因的表達,或者通過破壞某個基因而使之不能表達，以達到治療疾 病的目的。（二）簡答題1、衰老與基因的結(jié)構(gòu)與功能的變化有關(guān)，涉及到：（1）生長停滯；（2）端?？s短現(xiàn)象；（3）DNA損傷的累積與修復(fù)能力減退；（4）基因調(diào)控能力減退。2、超螺旋的生物學(xué)意義：（1）超螺旋的DNA比松馳型DNA更緊密，使DNA分子體積變得更小，對其在細胞的包裝過程更為有利;（2）超螺旋能影響雙螺旋的解鏈程序，因而影響DNA分子與其它分子（如酶、蛋白質(zhì)）之間的相互作用。3、原核與真核生物學(xué)mRNA的區(qū)

23、別：原核：往往是多順反子的，即每分子mRNA帶有幾種蛋白質(zhì)的遺傳信息(來自幾個結(jié)構(gòu)基因)。5端無帽子結(jié)構(gòu)，3端一般無多聚A尾巴。(3 ) 一般沒有修飾堿基，即這類mRNA分子鏈完全不被修飾。真核：5端有帽子結(jié)構(gòu)3,端絕大多數(shù)均帶有多聚腺昔酸尾巴，其長度為20-200個腺昔酸。分子中可能有修飾堿基，主要有甲基化。分子中有編碼區(qū)與非編碼區(qū)。4、tRNA的共同特征：(!)單鏈小分子，含73-93個核昔酸。含有很多稀有堿基或修飾堿基。5,端總是磷酸化，5,末端核昔酸往往是pG。分子中約半數(shù)的堿：三級結(jié)構(gòu)是倒L型。5、核酶分類：異體催化的剪切型，如RNaseP;自體催化的剪切型，如植物類病毒等；內(nèi)含子的

24、自我剪接型，如四膜蟲大核26SrRNA前體。6、hnRNA變成有活性的成熟的mRNA的加工過程：5,端加帽；3端加尾(3 )內(nèi)含子的切除和外顯子的拼接分子內(nèi)部的甲基化修飾作用。核昔酸序列的編輯作用。7、反義RNA及其功能：堿基序列正好 與有意義mRNA互補的RNA稱為反意義或反義RNA,又稱調(diào)節(jié)RNA。這類RNA是單鏈RNA,可與mRNA配對結(jié)合形成雙鏈，最終抑制mRNA作為模板進行翻譯。這是其主要調(diào)控 功能，還可作為DNA復(fù)制的抑制因子，與引物RNA互補結(jié)合抑制DNA的復(fù)制，以及在轉(zhuǎn)錄水平上與mRNA5 末端互補，阻止RNA合成轉(zhuǎn)錄。8、病毒基因組分型：(1)雙鏈DNA (2 )單鏈正股DN

25、A (3 )雙鏈RNA(4)單鏈負股RNA(5 )單鏈正股RNA9、病毒基因組結(jié)構(gòu)與功能的特點：(1)不同病毒基因組大小相差較大;(2)不同病毒的基因組可以是不同結(jié)構(gòu)的核酸。(3 )病毒基因組有連續(xù)的也有不連續(xù)的；(4 )病毒基因組的編碼序列大于90%；(5 )單倍體基因組?；蛴羞B續(xù)的和間斷的。相關(guān)基因叢集；基因重疊(9 )病毒基因組含有不規(guī)則結(jié)構(gòu)基因，主要類型有:a、幾個結(jié)構(gòu)基因的編碼區(qū)無間隔；b、mRNA沒有5端的帽結(jié)構(gòu)；c結(jié)構(gòu)基因本身沒有翻譯起始序列。10、原核生物基因組的結(jié)構(gòu)的功能特點：基因組通常僅由一條環(huán)狀雙鏈DNA分子組成?；蚪M中只有1個復(fù)制起點。(3 )具有操縱子結(jié)構(gòu)。1編碼

26、順序一般不會重疊?；蚴沁B續(xù)的，無內(nèi)含子，因此轉(zhuǎn)錄后不需要呀虹編碼區(qū)在基因組中所占的比例(約占50%)遠遠大于真核基因組，但又遠遠小于病毒基因組。基因組中重復(fù)序列很少具有編碼同工酶的基因。(9 )細菌基因組中存在著可移動的DNA序列，包括插入序列和轉(zhuǎn)座子。(10)在DNA分子中具有多種功能的識別區(qū)域。11、真核生物基因組結(jié)構(gòu)與功能的特點：每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目，除了配子為單倍體外，體細胞一般為雙倍體。真核基因組遠遠大于原核生物的基因組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)龐大。都由一個結(jié)構(gòu)基因與相關(guān)的調(diào)控區(qū)組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子。含有大量重復(fù)順序。(5 )基因組內(nèi)非編碼的順序占90%以上。真核基因是

27、斷裂基因。功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族，它們可串聯(lián)在一起，亦可相距很遠，但即使串聯(lián)在一起的成簇的基 因也是分別轉(zhuǎn)錄的。真核生物基因組中也存在一些可移動的遺傳因素，這些DNA順序并無明顯生物學(xué)功能，似乎為自己的目的而組織，故有自私DNA之稱。12、根據(jù)同源性程度，主要分五種類型：核酸序列相同，實際上是多拷貝基因；核酸序列高度同源，如人類生長激素基因家族;編碼產(chǎn)物具有同源功能區(qū)；(4 )編碼產(chǎn)物具有小段保守基序;基因超家族。DNA復(fù)制的基本過程：DNA雙鏈解開；RNA引物的合成；DNA鏈的延長；切除引物、填補缺口、連接相鄰DNA片段；(5 )切除和修復(fù)錯配堿基。14、DNA的損傷方式：轉(zhuǎn)換：由一

28、種嚅咲變成另一種嚅嚏，或種瞟吟變成另一種噤吟；顛換：嚅吟與瞟吟互換。轉(zhuǎn)換和顛換只引起DNA局部的改變，而DNA其它部分的結(jié)構(gòu)不受影響，故稱 為點突變。丟失或插入一個或一段核昔酸，可能使下游DNA的編碼發(fā)生改變，此稱為移碼突變鏈內(nèi)或鏈間發(fā)生共價連結(jié)。15、DNA損傷的修復(fù)：光修復(fù)切除修復(fù)16、切除修復(fù)的機制：通過一種特殊的內(nèi)切核酸酶將DNA分子中的損傷部分切除，同時以另一條完整的DNA鏈為模板，由DNA聚 合酶I催化填補被切除部分的空隙，再由DNA連接酶封口，使DNA恢復(fù)正常的結(jié)構(gòu)。17、大腸桿菌的一種需糖基化酶的切除修復(fù)過程：(1) DNA糖基化酶識別受損的或錯誤的堿基，水解糖昔鍵，釋出游離堿

29、基，在DNA單鏈上形成無瞟吟或嚅咤 的空位，稱為A P部位；(2 )特異的AP內(nèi)切核酸酶在AP部位切開磷酸二酯鍵，再由外切核酸酶切下AP部位的核昔酸；(3) DNA聚合酶I修補缺口；(4 ) DNA連接酶封口，完成修復(fù)過程。18、逆轉(zhuǎn)錄酶功能：(1)具有RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶活性，能和其它DNA聚合酶一樣沿53方向合成DNA,并需要引物提供3 -0 H;(2)具有RNA酶H活性，能特異性水解RNA - DNA雜交體上的RNA；(3 )具有DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶活性，以逆轉(zhuǎn)錄合成的單鏈DNA為模板合成互補DNA鏈。19、遺傳密碼的特點：起始密碼子和終止密碼子；方向性：5-3；連續(xù)性簡并性；通

30、用性擺動性。20、常見的擺動現(xiàn)象反密碼子的第一位常出現(xiàn)稀有堿基次黃瞟吟，它可以與密碼子的第三位的A、C或U配對;反密碼子中的U可以與密碼子中的A或G配對；(3 )反密碼子中的C可以與密碼子中的C、G或U配對。21、核糖體在蛋白質(zhì)生物合成中的作用：容納mRNA的通道。能夠結(jié)合起始因子，延長因子及終止因子等參與蛋白質(zhì)生物合成的因子；(3)具有結(jié)合氨酰-tRNA的部 位(A位或P位)；具有轉(zhuǎn)達肽酶活性，催化肽鍵形成；大亞基上具有延長因子依賴的GTP酶活性，它可能為肽提供能量。22、嚴謹反應(yīng)機制：在氨基酸缺乏時，游離核糖體與空載的tRNA增加，在ATP存在下，產(chǎn)生pppGpp (鳥昔-5-磷酸)和pp

31、Gpp(鳥 昔-4-磷酸)。后者與RNA聚合酶形成ppGpp-RNA聚合酶復(fù)合物，進而使RNA聚合酶構(gòu)象改變，活性降低,rRNA 和rRNA合成減少或停止。22、葡萄糖效應(yīng)及機制：細菌通常優(yōu)先以葡萄糖作為能源，當(dāng)培養(yǎng)環(huán)境中有葡萄糖時，即使加入乳糖、阿拉伯糖等其它糖，細菌也不利 用這些糖，不產(chǎn)生代謝這些糖的酶，直到葡萄糖消耗完畢，代謝其它糖的酶才會根據(jù)相應(yīng)的糖是否存在而被誘 導(dǎo)產(chǎn)生，這種現(xiàn)象稱為 s /這是由于葡萄糖代謝產(chǎn)物能抑制細胞腺昔酸環(huán)化酶和激活磷酸二酯酶的活性，結(jié)果使細胞人cAMP水平降低。 當(dāng)葡萄糖耗盡時，細胞內(nèi)cAMP水平升高，即可通過攻調(diào)控其它操縱子的表達。*23、真核生物基因表達

32、在DNA水平的調(diào)控方式：染色質(zhì)丟失基因擴增基因重排DNA甲基化(5 )染色質(zhì)結(jié)構(gòu)對基因表達的調(diào)控作用。24、反式因子的主要特點：一般具有三個功能結(jié)構(gòu)域：DNA識別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域、結(jié)合其它蛋白的結(jié)合域。這些功能區(qū)含有幾 十到幾百個氨基酸殘基能識別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)中的順式作用元件。對基因表達有正性和負性調(diào)控作用，即渡海和阻遏基因的表達。25、反式作用因子的激活方式及作用方式：激活方式表達式調(diào)節(jié)；共價修飾；(3 )配體結(jié)合蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用。作用方式成環(huán)扭曲滑動(4 ) Oozing o26、mRNA的選擇剪接方式：(1)外顯子選擇(2)內(nèi)含子選擇(3 )互斥外顯子(4)內(nèi)部剪接位點。27、

33、細胞通訊方式：細胞間隙連接膜表面分子接觸通訊化學(xué)信號通訊。28、受體發(fā)揮其識別和信號轉(zhuǎn)換作用時特點：(1)高度特異性高親和力(3 )可飽合性(4)可逆性。29、MAPK作為細胞內(nèi)的的關(guān)鍵信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，如何發(fā)揮作用：MAPK由其上游分子MAPKK和MAPKKK通過逐級磷酸化反應(yīng)而激活。細胞受到生長因子或其它因素刺激后， MAPKK可將AMPK的一個Thr磷酸化，從而使MAP建變?yōu)橛袧n性狀態(tài)。具體表現(xiàn)為各自的逐級磷酸化,MAPK 被激活以后，可轉(zhuǎn)移至細胞核內(nèi)。在核內(nèi)，它可使一些轉(zhuǎn)錄因子發(fā)生磷酸化，從而改變細胞內(nèi)基因表達的狀態(tài)。 另外，它也可以使一些其它的酶發(fā)生磷酸化使之活性發(fā)生改變。30、細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)

34、信號的基本路線和方式可以表示為：(1)小分子信使?jié)舛然蚍植甲兓?2 )外源信號一受體一大分子信使化學(xué)修飾效應(yīng)分子構(gòu)象變化一細胞應(yīng)答反應(yīng)蛋白質(zhì)相互作用31、G蛋白偶聯(lián)受體的信號傳遞的基本過程包括：配體與受體結(jié)合；受體激活G蛋白G蛋白激活或抑抑細胞中的效應(yīng)分子；效應(yīng)分子改變細胞內(nèi)小分子信使的含量與分布；細胞內(nèi)小分子信使作用于相應(yīng)的靶分子，使之構(gòu)象改變，從而改變細胞的代謝過程及基因表達等功能。32、G蛋白的循環(huán)或活化過程：當(dāng)物理或化學(xué)信號刺激受體時，受體活化，與G蛋白結(jié)合并使之發(fā)生構(gòu)象改變。A亞基與GDP的親和力下降, 結(jié)合的GDP為GTP所取代。A亞基結(jié)合了 GTP后即與BR亞基發(fā)生解離,成為活化

35、狀態(tài)的A亞基?；罨说?A亞基此時可以作用于下游的各種效應(yīng)分子。這種活化狀態(tài)將一直持續(xù)到GTP被A亞基自身具有的GTP酶水解為GDPO33、小分子細胞內(nèi)信使一般具有的三個特點：不位于能量代謝途徑的中心；在細胞中的濃度或分布可以迅速地改變；作為變構(gòu)效應(yīng)劑作用于相應(yīng)的靶分子，已知的靶分子主要為各種蛋白激酶。34、表皮生長因子受體(EGFR)介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑EGFRRasMAPK (1)受體二聚體的形成及其磷酸化；(2 )募集接頭蛋白Grb2o(3)調(diào)控分子SOS的活化(4 )低分子量G蛋白Ras的活化；MAPK的級聯(lián)激活；轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。35、r-干擾素受體介導(dǎo)的細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑:

36、r-干擾素與受體結(jié)合以后。也可以導(dǎo)致受體二聚體化，二聚體化的體可以激活JAL-STAT系統(tǒng)，后者將干擾素 刺激信號傳入核內(nèi)。JAK為一種存在于胞漿中的蛋白酪氨酸激酶，它活化后可使干擾素受體磷酸化。STAT可以通過其SH2結(jié)構(gòu)域 識別磷酸化的受體并與之結(jié)合，然后STAT分子亦發(fā)生酪氨酸的磷酸化，酪氨酸磷酸化的STAT形成二聚體并 進入胞核。二聚體STAT分子作為有活性的轉(zhuǎn)錄因子，影響相關(guān)基因的表達，進而改變靶細胞的增殖與分化。36、Klenow片段的作用(1)補齊雙鏈DNA的3,末端； (2)通過補齊3端使3末端標記；(3 )在cDNA克隆中，第二股鏈的合成。(4 ) DNA序列分析。37、幾種

37、常見順酶： (1 ) DNA聚合酶I：這個酶除有聚合酶活性外，尚有3 -5及53,核酸外切酶活性。由于它具有5，-3,核酸外切酶活性，當(dāng)用缺口平移法標記DNA探針時，常用DNA聚合酶I。(2)逆轉(zhuǎn)錄酶：逆轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成DAN,合成時需要4種脫氧核昔酸及引物，合成方向為53,延 伸，無3 -5外切酶活性。廣泛用于mRNA為模板合成cDNA,構(gòu)建cDNA文庫。(3 ) T4DNA連接酶：催化雙鏈DNA 一端3-0H與另一雙鏈DNA的5端磷酸根形成3、5 -磷酸二酯鍵， 使具有相同粘性末端或平端的DNA末端連接起來。堿性磷酸酶：去除DNA或RNA5端的磷酸根，制備載體時，用堿性磷酸酶處理后

38、，可防止載體自身 連接，提高重組效率。末端脫氧核昔酰轉(zhuǎn)移酶(TdT)：將脫氧核昔酸加到DNA的3 - 0H上，主要用于探針標記；或者在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于進行連接。(6 ) TaqDNA聚合酶和其它耐熱DNA聚合酶。38、作為克隆載體的質(zhì)粒具備以下特點：(1)分子量相對較小，能在細菌內(nèi)穩(wěn)定存在，有較高的拷貝數(shù)。(2)具有一個以上的遺傳標志，便于對宿主細胞進行選擇。(3)具有多個限制酶的單一切點，稱為多克隆位點(MCS)o39、粘性質(zhì)粒的特點：(1)含有質(zhì)粒的抗藥性標記 (2 )帶有入噬菌體的粘性末端(cos區(qū));(3 )具有一個或多個限制酶的酶切位點；(4 )其本身分子量小

39、，容納40kb左右的DNA片段;(5)由于非重組粘性質(zhì)粒很小，不能在體外包裝，因而體外包裝的主要是重組體，有利于以后的篩選。40、M31噬菌體的優(yōu)點：(1)噬菌體顆粒中所含有的是單鏈DNA,該單鏈DNA可作為模板用于DNA序列分析；(2 )利用單鏈M13克隆可制備成單鏈DNA探針用于雜交分析，檢測DNA或RNA,或者作為基因定點誘變的 載體。41、大腸桿菌與哺乳動物表達載體的不同：大腸桿菌：含有復(fù)制位點、抗性基因、克隆位點，可導(dǎo)入大腸桿菌，與克隆載體一樣，表達載體中含有表達系 統(tǒng)元件，即啟動子-核糖體結(jié)合位點-克隆位點-轉(zhuǎn)錄終止信號。哺乳動物：真核表達載體中含有一套真核表達元件：啟動子/增強子

40、-克隆位點-終止信號和加poly(A)信號。42、重組DNA的目的和基本過程：目的：克隆某個特定的基因；建立基因文庫、cDNA文庫。(3 )將特定的基因片段進行亞克隆以進行DNA序列測定;(4)構(gòu)建表達載體以便在特定的宿主細胞中表達某個基因。43、cDNA的合成過程：先從細胞中提取高質(zhì)量的mRNA。因mRNA有poly(A)尾巴，可用12-18寡聚d(T)片段作為引物，加入4種 dNTP,AMV(或MMLV)逆轉(zhuǎn)錄酶催化第一股鏈的合成。然后用RNaseH去掉mRNA,剩下的單鏈DNA的3端往 往有自發(fā)回折(原因不明)形成的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，正好可以作為合成第二條DNA鏈的引物；由T4DNA聚合酶催化

41、第二股鏈的合成，即得到雙鏈cDNA的混合體，采用S1核酸酶處理，可得到平端的雙鏈cDNA。44、目的基因的篩選與鑒定： 首先篩選出轉(zhuǎn)化菌；然后篩選出帶有重組體的克??；最后是對DNA重組體進行鑒定。方法：遺傳學(xué)方法(插 入滅活法、a-互補)；免疫學(xué)方法；核酸雜交法；PCR技術(shù)；酶切鑒定。45、真核細胞轉(zhuǎn)染的基本方法：(1)磷酸鈣共沉淀法 (2)電穿孔法 (3 ) DEAE-葡萄糖法(4)脂質(zhì)體介導(dǎo)基因?qū)?5)顯微注射法46、在大腸桿菌中表達外源基因，主要考慮以下基本要素：(1)目的基因如果來自真核細胞必須是cDNA,因為大腸桿菌沒有剪切內(nèi)含子的功能。(2 )從真核基因轉(zhuǎn)錄的mRNA缺乏結(jié)合細菌

42、核糖體的SD序列，因此，cDNA的起始密碼子(ATG)上游部分(5端非編碼區(qū))是無用的，必須除去。(3 )所用表達載體必須是大腸桿菌表達載體。含有大腸桿菌RNA聚合酶所能識別的啟動子和SD序列。47、寡核昔酸介導(dǎo)的誘變技術(shù)步驟：將目的DNA片段插入M13噬菌體載體；以重組噬菌體制備單鏈DNA；(3 )設(shè)計并合成誘變寡核昔酸引物；(4 )誘變寡核昔酸引物與靶單鏈DNA雜交；(5 )利用Klenow片段在雜交的寡核昔酸上延伸；(6 )用T4DNA連接酶將新合成的雜合雙鏈DNA連接成雙鏈閉環(huán)DNA分子；(7 )轉(zhuǎn)化宿主細菌；(8 )篩選含有誘變DNA片段的重組噬菌體；(9 )以含有誘變DNA的重組噬

43、菌體制備單鏈DNA;(10)測序證實M13噬菌體DNA帶有目標誘變而無其它誘變。最后從重組M13噬菌體RF型DNA中回收誘變 的DNA片段，克隆到其它適當(dāng)?shù)妮d體中，對誘變DNA片段進行進一步研究。48、雙脫氧鏈終止法基本原理：和模板互補結(jié)合的引物在DNA聚合酶作用下發(fā)生互補鏈的延伸反應(yīng)，反應(yīng)體系中的2, 3-雙脫氧核昔三磷酸 (ddNTP)與底物脫氧核昔三磷酸競爭結(jié)合于延伸互補鏈末端，造成延伸終止。由于產(chǎn)生一系列分別終止于A、G、C、T位置的不同大小的DNA片段，應(yīng)用高分辨率聚丙烯酰胺凝膠電泳可分辨僅相差一個核昔酸的20-500 堿基的DNA片段，結(jié)合放射自顯影技術(shù)，便能直接讀出模板DNA的待

44、測序列。雙脫氧終止法測定DNA序列 的片段通?？寺∮贛13或質(zhì)粒pUC載體，利用多克隆位點兩側(cè)的通用引物進行測為反應(yīng)。較長鏈的待測DNA 片段可采用隨機法、嵌套缺失法和引物延伸法進行序列測定。Maxam-Gilbert法基本原理丄采用化學(xué)試劑處理末端放射標記的DNA單鏈片段，造成堿基特異性切割，由此產(chǎn) 生一組具不同長度的DNA鏈的反應(yīng)混合物，經(jīng)凝膠電泳按分子大小分離和放射自顯影，直接讀出待測DNA的 核昔酸順序。激光測序技術(shù)丄應(yīng)用熒光基團標記引物或4種ddNT P,采用雙脫氧鏈終止法原理進行測序反應(yīng)，雙脫氧核昔 酸終止產(chǎn)物經(jīng)熒光激發(fā)產(chǎn)生信號，通過計算機自動讀出被測序列。49、溫度對DNA復(fù)性(

45、雜交)的影響：溫度過高不利于核酸復(fù)性，而溫度過低，少數(shù)堿基配對形成的局部雙鏈不易解離，適宜的復(fù)性溫度是較Tm值 低25無。在0度時雜交進行非常緩慢，隨著溫度的升高，雜交率也明顯增加，當(dāng)溫度比Tm值低20-25度時， DNA - DNA雜交達到最高雜交率。但在更高溫度情況下，雙鏈分子逐漸趨向解鏈，當(dāng)溫度達到Tm-5度時雜交 率即非常低。(1)錯配率第增加1%, Tm值應(yīng)相應(yīng)下降10-15度；(2 ) RNA/DNA雜交體的穩(wěn)定性較DNA/DNA的穩(wěn)定性高,Tm值應(yīng)相應(yīng)增加10-15度；(3 ) RNA/RNA雜交體的Tm值應(yīng)相應(yīng)增加20-25度，因此，采用RNA探針時，加入適量的甲酰胺以降低Tm

46、 值是必需的；(4)寡核昔酸探針的堿基數(shù)很少，可以采用下式計算寡核昔酸探針Tm值：Tm=4*(G+C)+2*(A+T)；寡核昔酸探 針雜交反應(yīng)一般在低于Tm值5度下進行。50、常用的Southern轉(zhuǎn)膜方法：毛細管虹吸印跡法(2 )電轉(zhuǎn)印法(3 )真空轉(zhuǎn)移法51、SouthemXNorthem 印跡法區(qū)別：(1)靶核酸：N所檢測的靶核酸是RNA, S是DNARNA電泳：RNA樣品依其分子量大小在變性膠中進行分離，凝膠中需加入變性劑，防止RNA分子形成 二級結(jié)構(gòu)，維持其單鏈線性狀態(tài)。轉(zhuǎn)膜：電泳結(jié)束后，不需要再進行變性和中和，直接采用毛細管虹吸法將膠中的RNA轉(zhuǎn)移到膜上，也可 釆用電轉(zhuǎn)移或真空轉(zhuǎn)移

47、法。52、核酸原位雜交步驟：組織或細胞的固定(2 )組織細胞雜交前的預(yù)處理探針的選擇和標記雜交雜交結(jié)果檢測。53、RNA 鱷護分析法(RPA) 昇程序步驟：制備待測RNARNA探針的標記雜交54、探針及標記物的種類：探針cDNA 探針(2 )基因組DNA探針(3)寡核昔酸探針(4 ) RNA 探針。標記物核素標記物非核素標記物：半抗原、55、核酸體外標記法分為化學(xué)法和酶法：化學(xué)法：利用標記物分子上的活性基團與探針分子上的基團(如磷酸基團)發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)將標記物直 接結(jié)合到探針分子上。酶法(酶促標記法)：將標記物預(yù)先標記在核酸昔酸(NTP或dNTP)分子上，然后利用酶促反應(yīng)將標記 的核昔酸分子摻

48、入到探針分子中去,或?qū)⒑宋羲岱肿由系臉擞浕鶊F交換到探針分子上。56、酶促標記法：缺口平移法隨機引物法(3 ) PCR標記法(4 )末端標記法57、缺口平移法原理：利用適當(dāng)濃度的DNase I在DNA雙鏈上隨機切割單鏈，造成單鏈切口。切口處產(chǎn)生一個5末端和一個3末 端，3末端即可作為引物，在大腸桿菌DNA聚合酶I的5-3DNA聚合酶活性的催化下，以互補的DNA單鏈 為模板，依次將dNTP連接到切口的3,端羥基上，合成新的DNA單鏈；同時DNA聚合酶I的57核酸外切 酶活性在切口處將舊鏈人5末端逐步切除，新合成鏈不斷延伸，從而使原DNA分子上的部分核昔酸殘基被標記的核昔酸所取代。58、PCR基本過

49、程：變性：通過加熱至95度左右，使DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，形成單鏈DNA,作為反應(yīng)的模板。退火：將溫度降至引物的Tm值左右或以下，弓幽與DNA模板互補區(qū)域結(jié)合，形成雜交鏈。延伸：當(dāng)反應(yīng)體系溫度升至70度左右時，TaqDNA聚合酶催化以引物為起始點的53，DNA鏈延伸反應(yīng), 形成新生DNA鏈。59、PCR引物設(shè)計的基本要求：(1)引物長度一般為15-30個核昔酸。(2)引物中的堿基組成盡可能隨機分布，避免出現(xiàn)噤吟、嚅嚏堿基堆積現(xiàn)象。(3)引物自身不應(yīng)存在互補序 列，尤其應(yīng)避免折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。兩個引物之間不應(yīng)存在互補序列，尤其應(yīng)避免3端的互補重疊。(5)引物與非特異擴增區(qū)的序列的同源 性不要超過7

50、0%,引物3末端連續(xù)8個堿基在待擴增區(qū)以外不能有完全互補序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴增引物3,端堿基是引發(fā)延伸的起點，因此一定要與模板DNA配對弓|物與模板結(jié)合時，引物的5端最多可以游離十幾個堿基而不影響PCR反62、轉(zhuǎn)基因動物及基本原理：轉(zhuǎn)基因動物是指用人工方法將外源基因?qū)牖蛘系交蚪M內(nèi)，并能穩(wěn)定傳代的一類動物?；驹恚簩⒛康?基因(或基因組片段)用顯微注射等方法注入實驗動物的受精卵或著床前的胚胎細胞中，使目的基因整合到基 因組中，然后將此受精卵或著床前的胚胎細胞再植入受體動物園的輸卵管(或子宮)中，使其發(fā)育成攜帶有外 源基因的轉(zhuǎn)基因動物。導(dǎo)入基因的方法有顯微注射法、胚胎干細胞法、逆轉(zhuǎn)錄

51、病毒感染法、精子載體法。轉(zhuǎn)基因動物中外源DNA的檢測:(1)染色體及基因水平的檢測：斑點雜交、Southern雜交和PCR分析、原位雜交等；(2 )轉(zhuǎn)錄水平的檢測：利用Northern雜交、RNase保護分析及RT-PCR方法檢測轉(zhuǎn)基因mRNA的存在及表達水平。(3 )蛋白質(zhì)水平檢測，釆用Western印跡分析法。63、轉(zhuǎn)基因動物的應(yīng)用：(1)對基因組織或階段特異表達的研究通過研究轉(zhuǎn)入外源基因后的新表型，可以發(fā)現(xiàn)基因的新功能；導(dǎo)入外源基因后，由于基因的隨機插入，可能會導(dǎo)致內(nèi)源基因的突變，對這些突變表型進行分析，可以 發(fā)現(xiàn)新的基因可用于只在胚胎期才表達的基因的結(jié)構(gòu)和功能的研究建立研究外源基因表達

52、、調(diào)控的動物模型對遺傳性疾病的研究(7 )建立人類疾病的動物模型(8 )動物新品種的培育基因產(chǎn)品的制備在免疫學(xué)中，可用于對免疫機制、免疫相關(guān)疾病的研究及建立免疫性疾病動物模型等。64、轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)路線：選擇及獲得外源目的基因受體細胞培養(yǎng)(3 )選用適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)基因方法將目的基因?qū)胧荏w細胞將轉(zhuǎn)化細胞進行彎漆篩選陽性轉(zhuǎn)化細佩培植陽性轉(zhuǎn)化植株轉(zhuǎn)基因植株的鑒定。65、轉(zhuǎn)基因植物在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用：可成為新的疫苗來源，植物病毒也成為人類疫苗的可能來源因為植物病毒對動物不致病，因此可利用植物病毒表達抗原蛋白的片段，以誘導(dǎo)哺乳動物免疫系統(tǒng)發(fā)生 反應(yīng)。還可產(chǎn)生單抗，作為化療藥物的靶向載體。66、基因打靶的必備條件

53、：胚胎干細胞：E S細胞的特點：能在體外培養(yǎng)，并保留發(fā)育的全能性。體外培養(yǎng)要維持細胞的分裂增殖 與正常的核型，同時抑制細胞的分化。打靶載體：a、neo陽性篩選標志：b、HSV-tk陰性篩選標志：67、構(gòu)建打靶載體的基本過程：獲得目的基因(待敲除基因)的同源片段，將此DNA片段克隆到一般的質(zhì)粒載體中；從重組質(zhì)粒中切除目的基因的大部分同源DNA序列，只留部分序列在線性質(zhì)粒載體的兩端；(3 )將neo基因克隆到帶有目的基因同源順序的線性質(zhì)粒中，使之位于殘留目的基因同源順序的中間;在目的基因同源順序的外側(cè)線性化重組質(zhì)粒載體，將HSV-tk基因克隆到此線性載體中。68、DNA芯片技術(shù)的應(yīng)用：(1) DN

54、A序列測定(2)基因表達分析(3 )基因組研究 (4)基因診斷藥物研究與開發(fā)(藥物篩選、新藥發(fā)現(xiàn)、合理用藥、中草藥鑒定和真假藥辨別)69、引起DNA 一級結(jié)構(gòu)變異的誘變劑的作用機制：堿基類似物誘發(fā)突變(2 )改變DNA的化學(xué)結(jié)構(gòu)(3 )結(jié)合到DNA分子上誘發(fā)移碼突變(4 )紫外線及其其它射線引起的DNA分子變化。70、突變類型：點突變(轉(zhuǎn)換和顛換)、缺失(一個堿基或一段核昔酸鏈從DNA大分子上消失)、插入(一個原來沒有的堿基 或一段原來沒有的核昔酸鏈插入DNA大分子中間)、倒位(DNA鏈內(nèi)重組，使其中一段方向反置)71、突變所引起的遺傳效應(yīng)包括：遺傳密碼的改變：錯義突變、無義突變、同義突變、移碼突變；(2 )對mRNA剪接的影響