碳酸酐酶Ⅲ與老年糖尿病性血管病變相關(guān)性的臨床觀察研究

1、碳酸酐酶與老年糖尿病性血管病變相關(guān)性的臨床觀察研究 于鐘鈺1 張曉明1 王劍濤1 溫小紅2 徐曉蝶2 郭景春2 周厚廣11、復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院老年醫(yī)學(xué)科；國家老年疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心 上海 2000402、復(fù)旦大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海 200032第一作者：于鐘鈺 碩士研究生 HYPERLINK mailto: 通訊作者：周厚廣 主任醫(yī)師 博士生導(dǎo)師（注：本研究受3項(xiàng)國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目支持：1. 國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目，81871098，CA介導(dǎo)的糖脂穩(wěn)態(tài)調(diào)控在S-9-PAHSA抗代謝性炎癥綜合癥血管老化中的作用機(jī)制,2019/01-2022/1

2、2，67.2萬元，在研；2. 國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目，81571361，PAHSA對老年糖尿病性腦血管病的預(yù)防性干預(yù)作用及其機(jī)制研究，2016/01-2019/12，68.4萬元，在研；3. 國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目，81170322，Hcdc14A介導(dǎo)的糖尿病性血管衰老逃逸的調(diào)控機(jī)制研究，2012/01-2015/12，57萬元，已結(jié)題）【摘要】目的：分析老年糖尿病性血管病變的可能危險(xiǎn)因素，探討CA與老年糖尿病性血管病變之間的內(nèi)在相關(guān)性。方法：篩選2017年復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院老年病科門診體檢的老年人群，觀察糖尿病患者血管并發(fā)癥的發(fā)生情況，以及相關(guān)血清生化指標(biāo)的變化。按照入組標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)

3、分為三組：對照組，T2DM未合并血管并發(fā)癥組和T2DM合并血管并發(fā)癥組。所有老年人群除進(jìn)行常規(guī)體檢篩查以外，還需要ELISA法檢測血清CA水平。采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。結(jié)果：與對照組相比，T2DM組的ALT、TP、BUN、UA、TG、LDL、HDL、FBG、HbAlc均存在顯著差異（P0.05）。T2DM組中有血管并發(fā)癥患者體內(nèi)的TBIL水平明顯低于無血管并發(fā)癥者（P0.05）。ELISA檢測結(jié)果顯示T2DM未合并血管并發(fā)癥和合并血管并發(fā)癥組患者體內(nèi)CA水平均明顯低于對照組（P均0.01），而且T2DM合并血管并發(fā)癥組CA水平更低于未合并血管并發(fā)癥組（P0.01）。Spearm

4、an相關(guān)系數(shù)分析顯示血清CA水平與HDL和TBIL正相關(guān)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；血清CA水平與LDL、Scr、BUN、FBG、HbA1c負(fù)相關(guān)，但與BUN、FBG和HbA1c之間的關(guān)聯(lián)性較大（P0.05）。ROC曲線分析提示CA對診斷T2DM合并血管并發(fā)癥的敏感性和特異性均較好（P0.05）。結(jié)論：血清CA水平與老年T2DM性糖脂代謝紊亂及其血管并發(fā)癥密切相關(guān)，提示CA可能是通過調(diào)控糖脂代謝等機(jī)制來參與老年糖尿病性血管病變的發(fā)生和發(fā)展進(jìn)程，但其內(nèi)在機(jī)制尚有待進(jìn)一步深入研究。關(guān)鍵詞：2型糖尿??；血管并發(fā)癥；動(dòng)脈粥樣硬化；碳酸酐酶；氧化應(yīng)激。Clinical Observation Research o

5、n the Relationship Between Carbonic Anhydrase and Senile Type 2 Diabetes with Vascular Complications YU Zhong-yu1, ZHANG Xiao-ming1, WANG Jian-tao1, WEN Xiao-hong2, XU Xiao-die2, GUO Jing-chun2, ZHOU Hou-guang1#1. Department of Geriatrics, Huashan Hospital, Fudan University; National Clinical Resear

6、ch Center for Aging and Medicine, Huashan Hospital, Fudan University, Shanghai, 200040, China.2. State Key Laboratory of Medical Neurobiology, Institutes of brain science, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai, 200032, China.Abstract: Objective: To analyze the possible risk factors of

7、 senile diabetic angiopathy and explore the intrinsic correlation between CAIII and senile diabetic angiopathy. Methods: Screen the elderly population in the outpatient department of the Geriatrics Department of Huashan Hospital affiliated to Fudan University in 2017. The occurrence of vascular comp

8、lications in patients with T2DM and the changes of serum biochemical indicators were observed. According to the inclusion criteria and exclusion criteria, they were divided into three groups: control group, T2DM without vascular complication group, T2DM with vascular complication group. In addition

9、to routine physical examination items， the serum CAIII levels were detected by ELISA. Data were analyzed using SPSS 25.0 statistical software. Results: Compared with the control group, there were significant differences in ALT, TP, BUN, UA, TG, LDL, HDL, FBG and HbAlc in the T2DM group (P0.05). The

10、levels of TBIL in T2DM patients with vascular complications were significantly lower than that in T2DM patients without vascular complications (P0.05). The results of ELISA showed that the level of CAIII in the T2DM without vascular complication group and T2DM with vascular complication group were s

11、ignificantly lower than that in the control group, while the level of CAIII in the T2DM group with vascular complication was lower than that in the T2DM group without vascular complication (P0.01). Spearman correlation coefficient analysis showed that serum CAIII levels were positively correlated wi

12、th HDL and TBIL, but there was no statistical difference; serum CAIII levels were negatively correlated with LDL, BUN, Scr, FBG and HbA1c, and there were statistical difference compared with BUN, FBG and HbA1c (P0.05). The ROC curve analysis indicated that CAIII was higher accurate in diagnosing T2D

13、M with vascular complication (P0.05). Conclusion: Serum CAIII was closely related to the disorder of glucose and lipid metabolism，and vascular complications in elderly patients with T2DM, suggesting that CAIII may participate in the occurrence and development of elderly patients with diabetic angiop

14、athy by regulating of glucose and lipid metabolism, but the specific underlying mechanisms need to be further studied in the future.Key words: Type 2 diabetes; Vascular complications; Atherosclerosis; Carbonic anhydrase III; Oxidative stress.近年來，隨著經(jīng)濟(jì)水平和預(yù)期壽命的不斷提高，中國已經(jīng)進(jìn)入了人口老齡化的加速期。北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院、中國老年保健協(xié)會(huì)等近日發(fā)

15、布了老年健康藍(lán)皮書：中國老年健康研究報(bào)告（2018）。報(bào)告顯示，2000年至2018年，我國60歲及以上老年人口從1.26億人增加到2.49億人，占總?cè)丝诒戎貜?0.2%上升到17.9%。老齡化的加劇導(dǎo)致心腦血管疾病的發(fā)病率顯著升高1-2，而老年人心腦血管病變的病理基礎(chǔ)主要是動(dòng)脈粥樣硬化。發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素眾多3-6，例如2型糖尿?。═ype 2 Diabetes,T2DM）、高血壓病、血脂異常、肥胖、高同型半胱氨酸等，其中T2DM是最重要的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。T2DM患者體內(nèi)存在糖脂代謝紊亂、胰島素抵抗和炎癥反應(yīng)，這些刺激可引起動(dòng)脈粥樣硬化，促進(jìn)血管病變的發(fā)生發(fā)展。研究表明，氧化應(yīng)激反

16、應(yīng)是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生過程中的關(guān)鍵步驟7。碳酸酐酶（Carbonic anhydrase，CA）是一種廣泛存在的含鋅金屬蛋白酶，同時(shí)也是一種PH調(diào)節(jié)蛋白，其中CA是這個(gè)家族中一個(gè)特殊成員8。CA在人體的骨骼肌和肝臟組織中表達(dá)豐富，并且可以保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激的損失9-10。因此,本研究擬進(jìn)一步深入探討血清CA水平是否與老年T2DM患者的血管并發(fā)癥之間存在內(nèi)在相關(guān)性，是否對T2DM性血管病變的診斷具有一定臨床應(yīng)用價(jià)值。1 資料與方法1.1一般資料選取2017年復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院老年病科體檢人員，詳細(xì)詢問并記錄所有入組者年齡（Age）、性別、既往病史等，既往史包括有無高血壓病、T2DM、冠心病、高

17、血脂、心絞痛、心肌梗死、腦卒中、短暫性腦缺血發(fā)作等。根據(jù)2010年版ADA糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)篩選符合標(biāo)準(zhǔn)的T2DM患者，共246例。記錄患者有無血管性疾病，包括腦血管疾?。X梗死/腦小血管病/腦出血等）、冠心病、頸動(dòng)脈粥樣硬化。據(jù)此，將T2DM患者分為有血管并發(fā)癥組（n=87）和無血管并發(fā)癥組（n=159）。同時(shí)，篩選了56例正常老年人作為對照組。因此，在本研究中，共有三組：對照組、T2DM未合并血管并發(fā)癥組和T2DM合并血管并發(fā)癥組。排除標(biāo)準(zhǔn)：T2DM以外的其他類型糖尿病患者或者繼發(fā)性糖尿病患者；T2DM合并急性并發(fā)癥，如酮癥酸中毒、高滲性昏迷、低血糖；合并其他內(nèi)分泌代謝疾病，如甲狀腺功能亢進(jìn)或

18、減退、腎上腺皮質(zhì)功能不全、垂體瘤等；免疫相關(guān)血管性疾病；自身免疫性疾病、急慢性感染、艾滋病、梅毒、肝硬化、腎功能衰竭、惡性腫瘤、圍手術(shù)期、有精神病史等患者。對照組入組標(biāo)準(zhǔn)：無上述常見老年慢性疾病，同時(shí)無以上排除標(biāo)準(zhǔn)中各種疾病。1.2研究方法 比較對照組和T2DM組患者的血清生化指標(biāo)。比較T2DM是否伴發(fā)血管并發(fā)癥兩組患者的基本數(shù)據(jù)（包括年齡、高血壓、高脂血癥、心房顫動(dòng)/房撲、左束支傳導(dǎo)阻滯）以及血清標(biāo)志物水平。為研究血清CA水平與T2DM合并血管并發(fā)癥之間是否存在相關(guān)性，ELISA檢測三組患者血清CA水平，采用Spearman相關(guān)系數(shù)分析CA水平與血清生化指標(biāo)之間的相關(guān)性，同時(shí)采用ROC曲線評

19、價(jià)血清CA水平對診斷T2DM血管并發(fā)癥的臨床應(yīng)用價(jià)值。1.3生化指標(biāo) 受檢者清晨空腹（至少8h內(nèi)未進(jìn)食），采集靜脈血5ml，生化指標(biāo)檢測采用全自動(dòng)生化分析儀，包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、尿酸（UA）、膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、空腹血糖（FBG）、糖化血紅蛋白（HbAlc），檢測嚴(yán)格遵守全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)范規(guī)定。1.4 血清CA水平檢測 收集三組受檢者的血清。采用

20、ELISA試劑盒檢測各組血清中CA水平。首先在試劑盒中取標(biāo)準(zhǔn)品1支，離心機(jī)中使用6000rpm離心30s，然后用1ml樣本稀釋液溶解，完全混勻后得標(biāo)準(zhǔn)品S7。標(biāo)記7個(gè)1.5ml離心管依次排列，編號為S0-6，每個(gè)離心管中加入250ul樣本稀釋液，然后吸取250ulS7內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品，放入第一個(gè)離心管s6中，將S6混勻后吸取出250ul溶液放入第二個(gè)離心管S5中，如此依次進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋，S0離心管中加入樣本稀釋液。依照以上步驟將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、0ng/ml。然后，標(biāo)記標(biāo)準(zhǔn)品孔和待測樣本孔，每孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或者待測樣本100ul,混勻后蓋上

21、板貼，使用37溫箱孵育2h。棄去液體，甩干。加入生物素標(biāo)記抗體工作液100ul,蓋上板貼，37溫箱孵育1h。棄去液體，甩干，洗板2min3次，每孔200ul，甩干。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素液100ul，蓋上板貼，37溫箱孵育1h。棄去液體，甩干，洗板2min5次，每孔200ul，甩干。每孔內(nèi)加入90ul底物溶液, 37避光顯色1530min。之后，每孔加入50ul終止溶液，使反應(yīng)終止。檢測450nm波長的OD值。最后，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出各個(gè)樣品中的CA水平。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 25.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料，所有數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)。符合正態(tài)分布和方差齊性的計(jì)量資料以x

22、s表示：兩組之間數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)；多組之間數(shù)據(jù)采用單因素方差分析（One-way ANOVA），然后用Dunnett-t法或LSD-t法進(jìn)行兩兩之間差異性分析。符合偏態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)和四分位間距表示，采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用卡方（X2）檢驗(yàn)。采用Pearson或者Spearman相關(guān)系數(shù)分析變量間的相關(guān)性。采用ROC曲線評價(jià)診斷價(jià)值。檢驗(yàn)水準(zhǔn)（）為0.05。2 結(jié)果2.1一般資料的比較通過數(shù)據(jù)匯總和統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果（表1）表明，與對照組比較，血清中ALT、TP、ALB、BUN、UA、TG、LDL、FBG、HbA1c水平均增加，同時(shí)血清中HDL水平降低，

23、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果說明，T2DM患者體內(nèi)普遍存在糖脂穩(wěn)態(tài)失衡。在本試驗(yàn)中，T2DM患者中合并血管并發(fā)癥的發(fā)生率為35.37%，其中冠心病的發(fā)生率最高，為28.86%；合并腦血管疾病的發(fā)生率為11.38%；合并頸動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生率為4.47%。（表2）表1 對照組和T2DM組生化指標(biāo)比較（xs）組別對照組（n=56）T2DM組（n=246）P值A(chǔ)ge75.13 7.20677.51 10.0400.094ALT19.96 7.23125.28 15.2620.012*AST20.29 4.72420.64 6.3540.693GGT20.21 11.71923.99 20.1480.178

24、ALP74.77 18.41576.98 61.3000.790TBIL16.76 5.23315.42 4.9160.193DBIL4.36 1.6404.07 1.6940.250TP70.61 3.65273.20 3.7630.0001*ALB43.61 2.26244.54 2.4520.010*BUN5.94 1.4536.88 2.3710.005*Scr75.02 13.6681.90 28.2730.077UA0.33 0.0670.39 0.0860.0001*TC4.41 0.6834.41 0.8970.972TG1.03 0.2931.47 0.8340.0001*H

25、DL1.44 0.3571.19 0.2930.0001*LDL2.51 0.8012.75 0.7240.002*FBG5.12 0.3276.98 1.7310.0001*HbA1c5.46 0.3646.94 1.0990.0001*注：*P0.05；*P0.01?？s略詞：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）；谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）；谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）；堿性磷酸酶（ALP）；總膽紅素（TBIL）；直接膽紅素（DBIL）；總蛋白（TP）；白蛋白（ALB）；尿素氮（BUN）；肌酐（Scr）；尿酸（UA）；膽固醇（TC）；甘油三酯（TG）；低密度脂蛋白（LDL）；高密度脂蛋白（HDL）；空腹血糖（FBG）；

26、糖化血紅蛋白（HbAlc）表2 T2DM患者血管并發(fā)癥發(fā)生情況T2DM血管并發(fā)癥人數(shù)百分比腦血管?。X梗塞/腦小血管病/腦出血）2811.38%冠心病7128.86%頸動(dòng)脈粥樣硬化114.47%2.2 兩組有/無血管并發(fā)癥T2DM患者間的基本資料和生化指標(biāo)比較結(jié)果（表3）表明，與無血管并發(fā)癥組相比，有血管并發(fā)癥組的高血壓、高脂血癥、心房顫動(dòng)/房撲以及左束支傳導(dǎo)阻滯的發(fā)生比例較高，且年齡和高血壓兩因素具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。統(tǒng)計(jì)結(jié)果說明，T2DM伴血管并發(fā)癥患者患有高血壓、高脂血癥、心房顫動(dòng)/房撲、左束支傳導(dǎo)阻滯的概率較大，遠(yuǎn)期并發(fā)癥危險(xiǎn)性較高。我們同時(shí)進(jìn)行了血清生化指標(biāo)的檢測。結(jié)果（表4）表明，與無血

27、管并發(fā)癥組相比，有血管并發(fā)癥組的血清TBIL水平較低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但其余生化指標(biāo)均無顯著性差異。T2DM患者體內(nèi)普遍存在糖脂穩(wěn)態(tài)失衡，各種血清生活指標(biāo)均可出現(xiàn)異常，但目前常見的血清生化指標(biāo)并不能用來評估T2DM患者有無血管并發(fā)癥。表3 兩組有/無血管并發(fā)癥T2DM患者間基本資料比較組別有血管并發(fā)癥組（n=87）無血管并發(fā)癥組(n=159)X2P值年齡（70歲）77（88.51%）116（72.96%）8.0440.0046*高血壓69（79.31%）98（61.64%）8.0580.0045*高脂血癥26（29.89%）43（27.04%）0.22490.6353心臟房顫/房撲6（6.9

28、0%）8（5.03%）0.36450.5460左束支傳導(dǎo)阻滯6（6.90%）4（2.52%）2.7670.0962 注：朱姐是PAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXX

29、XPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEX

30、XXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGE

31、XXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXX*P0.05；朱姐是PAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXX

32、PAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXX

33、XPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXXPAGEX

34、XXPAGEXXXPAGEXXXPAGEXXX*P0.01表4 兩組有/無血管并發(fā)癥T2DM患者間血清生化指標(biāo)的比較（xs）組別有血管并發(fā)癥組（n=87）無血管并發(fā)癥組(n=159)P值A(chǔ)LT23.00（16.00，30.00）22.00（16.00，28.00）0.371ALP65.00（57.00，78.00）72.00（58.00，85.00）0.242GGT20.00（15.00，26.00）18.00（14.00，26.00）0.169TBIL13.55（12.17，15.00）14.00（13.10，17.55） 0.035*DBIL3.50（2.90，4.60）3.70（3.00

35、，4.90）0.210TP74.00（71.00，76.00）73.00（70.00，75.00）0.071BUN6.65（5.55，8.33）6.30（5.40，7.43）0.117Scr78.00（65.00，95.00）75.00（65.00，90.00）0.343UA0.40（0.34，0.45）0.39（0.34，0.45）0.690TC4.44（3.63，4.99）4.17（3.66，4.83）0.351TG1.30（0.89，1.92）1.19（0.85，1.84）0.469HDL1.16（0.99，1.36）1.15（0.96，1.32）0.568LDL2.60（1.84，3.

36、04）2.47（1.90，3.00）0.689FBG7.00（5.80，7.80）6.70（5.90，7.60）0.348HbA1c6.70（6.30，7.40）6.70（6.10，7.30）0.294注：*P0.05；*P0.01?？s略詞：谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）；谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）；谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）；堿性磷酸酶（ALP）；總膽紅素（TBIL）；直接膽紅素（DBIL）；總蛋白（TP）；白蛋白（ALB）；尿素氮（BUN）；肌酐（Scr）；尿酸（UA）；膽固醇（TC）；甘油三酯（TG）；低密度脂蛋白（LDL）；高密度脂蛋白（HDL）；空腹血糖（FBG）；糖化血紅蛋白（HbAlc）2.3不同組

37、別血清CA水平的比較ELISA法分別檢測了三組人群血清中CA水平（圖1），結(jié)果提示，三組之間CA水平具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中，與對照組相比，兩個(gè)T2DM組血清CA水平均明顯降低（P均0.01）。同時(shí)，T2DM合并血管并發(fā)癥組血清CA水平顯著低于T2DM未合并血管并發(fā)癥組（P0.01）。表5 三組患者血清中CA水平比較（xs）組別對照組T2DM未合并血管并發(fā)癥組T2DM合并血管并發(fā)癥組CA1.050.1080.970.131*0.820.113*&注：*P0.01，T2DM未合并血管并發(fā)癥組/T2DM合并血管并發(fā)癥組 vs 對照組；&P0.01，T2DM未合并血管并發(fā)癥組 vs T2DM合并血管并發(fā)

38、癥組圖1.三組患者血清中CA水平的比較注：*P0.01，T2DM未合并血管并發(fā)癥組/T2DM合并血管并發(fā)癥組 vs 對照組；&P0.01，T2DM未合并血管并發(fā)癥組 vs T2DM合并血管并發(fā)癥組對照組（n=34），T2DM未合并血管并發(fā)癥組（n=35），T2DM合并血管并發(fā)癥組（n=36）2.4血清CA水平與各生化指標(biāo)之間相關(guān)性分析 結(jié)果（表6）表明，血清CA水平與HDL和TBIL呈一定正相關(guān)趨勢，而與LDL和Scr呈一定負(fù)相關(guān)趨勢，但均無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，不排除樣本量較小所致可能；血清CA水平與BUN、FBG、HbA1c呈負(fù)相關(guān)，且具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05），提示血清CA水平與BUN、

39、FBG和HbA1c之間的關(guān)聯(lián)性較大。表6 血清CA水平與各生化指標(biāo)之間Spearman相關(guān)性分析生化指標(biāo)CA相關(guān)系數(shù)r95%CIP值HDL0.08226-0.083790.24390.3170LDL-0.0841-0.24890.085430.3163TBIL0.1054-0.057260.26270.1903BUN-0.081-0.3344-0.018230.0252*Scr-0.08005-0.23770.081680.3174FBG-0.1732-0.3248-0.012880.0295*HbA1c-0.1804-0.3315-0.020350.0233*注：*P0.90提示診斷準(zhǔn)確性最

40、佳，0.700.90為診斷性良好，0.500.70則表示準(zhǔn)確性較差。分析結(jié)果顯示，LDL的AUC為0.5078（95%CI：0.39090.6246，P=0.8969），HDL的AUC為0.5317（95%CI：0.42320.6403，P=0.5660），TBIL的AUC為0.5573（95%CI：0.45150.663，P=0.2918），CA的AUC為0.8846（95%CI：0.81320.956，P0.0001）。4項(xiàng)指標(biāo)的診斷評價(jià)指標(biāo)詳見表7。表中數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，血清CA的ROC曲線下面積AUC為0.8846，診斷準(zhǔn)確性明顯優(yōu)于其他三項(xiàng)常規(guī)指標(biāo)，提示血清CA對于T2DM合并血管并發(fā)癥

41、具有較好的臨床診斷敏感性和特異性。 圖2. 各生化指標(biāo)的ROC曲線表7 4項(xiàng)指標(biāo)的診斷評價(jià)指標(biāo)項(xiàng)目AUC面積約登指數(shù)靈敏度（%）特異度（%）LDL0.507823.6423.64100HDL0.531715.6128.5787.04TBIL0.557313.5592.8620.69CA0.884669.5483.3386.213 討論伴隨著我國進(jìn)入深度老齡化社會(huì)，心腦血管疾病已嚴(yán)重威脅老年人群的身體健康和生活質(zhì)量。動(dòng)脈粥樣硬化是老年人心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ)。T2DM、高血壓病、高脂血癥、吸煙、肥胖和非酒精性脂肪肝等是動(dòng)脈粥樣硬化的常見危險(xiǎn)因素，其他還包括高尿酸血癥、高同型半胱氨酸血癥、不健

42、康的飲食習(xí)慣、家族史等。中國T2DM的發(fā)病率逐年增加，是老年人群中最常見的慢性疾病，同時(shí)T2DM引起的血管病變嚴(yán)重影響老年人的預(yù)期壽命。目前研究表明，雖然以外研究認(rèn)為T2DM引起的動(dòng)脈粥樣硬化病變過程中有氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙等多種相關(guān)機(jī)制的參與其中，但具體分子機(jī)制尚未完全明確。本研究發(fā)現(xiàn)，無論T2DM患者有無血管并發(fā)癥，體內(nèi)CA水平與對照組相比均顯著降低，同時(shí)T2DM合并血管并發(fā)癥患者血清中CA水平低于T2DM未合并血管并發(fā)癥患者，提示血清CA水平可能與T2DM及其相關(guān)血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展存在內(nèi)在聯(lián)系。T2DM患者體內(nèi)長期存在高血糖和胰島素抵抗，在多種代謝紊亂的病理生理因素刺激

43、下，通過增強(qiáng)氧化應(yīng)激，引起血管內(nèi)皮損傷，炎癥因子和粘附分子表達(dá)增加，致炎細(xì)胞向動(dòng)脈內(nèi)膜遷移并粘附。血管內(nèi)巨噬細(xì)胞通過吞噬LDL，形成泡沫細(xì)胞，最終促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展11。研究表明，在氧化應(yīng)激狀態(tài)下肝細(xì)胞內(nèi)CA表面的兩個(gè)半胱氨酸殘基會(huì)迅速結(jié)合形成S-谷胱甘肽12；暴露在H2O2的細(xì)胞轉(zhuǎn)染CA后，活性氧（ROS）水平較未轉(zhuǎn)染組明顯減少13，提示CA可能具有抗氧化應(yīng)激作用。在本臨床試驗(yàn)中，T2DM合并血管并發(fā)癥患者血清CA水平明顯低于對照組和T2DM未合并血管并發(fā)癥組，提示CA水平下降有可能參與了T2DM患者體內(nèi)的氧化應(yīng)激，從而促進(jìn)了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程。同時(shí)，除了作為一個(gè)特殊的體內(nèi)抗

44、氧化應(yīng)激因子，CA還是一種pH敏感型的蛋白酶，在胰島素抵抗和高血糖作用下，可造成細(xì)胞內(nèi)乳酸生成增多，pH值下降，進(jìn)而抑制CA的表達(dá)，同時(shí)抑制O2與血紅蛋白結(jié)合，導(dǎo)致HbAlc增多，氧合血紅蛋白減少14，使組織出現(xiàn)缺氧，導(dǎo)致氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)，引起血管內(nèi)皮損傷，進(jìn)而誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。此外，T2DM患者常常伴隨肥胖和高脂血癥，血液中LDL水平增高和HDL水平降低會(huì)增加泡沫細(xì)胞的形成15，引起血液粘度增加和血流動(dòng)力學(xué)變化，進(jìn)而損傷動(dòng)脈管壁，加速動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展進(jìn)程16。以往相關(guān)研究表明，胰島素可促進(jìn)脂肪組織的從頭合成，而CA則主要是為此過程提供碳酸氫根離子17-18。T2DM患者體內(nèi)CA水平低

45、下可能會(huì)加重脂代謝紊亂，從而導(dǎo)致血管并發(fā)癥的發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)，與56例正常老年對照組相比，248例老年T2DM患者血液中LDL水平明顯增高，而HDL水平則顯著降低，提示臨床老年T2DM患者確實(shí)存在明顯的脂代謝紊亂，與上述報(bào)道結(jié)果基本一致。本試驗(yàn)中Spearman相關(guān)性分析顯示血清中TBIL水平與CA呈正相關(guān)，而且TBIL水平在T2DM有無血管并發(fā)癥患者中存在明顯差異，即合并血管并發(fā)癥T2DM患者的TBIL水平明顯低于無血管并發(fā)癥T2DM患者。臨床上普遍認(rèn)為膽紅素作為一種有害物質(zhì)，主要用來評估肝功能和黃疸。其實(shí)膽紅素同時(shí)也是一種內(nèi)源性抗氧化劑19，可以參與抗氧化、抗炎癥、抑制細(xì)胞凋亡、改善氧化應(yīng)

46、激等的生理反應(yīng)20。研究表明缺血性腦卒中患者血清膽紅素水平偏低，而相對較高的膽紅素水平可能有助于避免腦梗塞的發(fā)生21。因此，血清總膽紅素水平過低有可能是誘發(fā)老年人血管病變的危險(xiǎn)因素之一。由于血清CA和TBIL水平均與機(jī)體氧化應(yīng)激水平相關(guān)，提示兩者之間可能存在一定的內(nèi)在聯(lián)系，共同參與T2DM相關(guān)氧化應(yīng)激障礙和血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程，適當(dāng)提升或補(bǔ)充CA和TBIL水平可能有助于預(yù)防或延緩T2DM相關(guān)血管并發(fā)癥。但其內(nèi)在機(jī)制尚待進(jìn)一步研究和明確。另外，本研究發(fā)現(xiàn)，血清CA水平還與BUN和Scr呈一定負(fù)相關(guān)性，并與BUN呈顯著負(fù)相關(guān)，提示血清CA水平與BUN等腎功能相關(guān)指標(biāo)存在一定內(nèi)在關(guān)聯(lián)性。長期高血

47、糖可以造成腎臟血流動(dòng)力學(xué)紊亂和葡萄糖代謝異常，激活機(jī)體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)22-23，而CA水平適度升高可使細(xì)胞免受氧化應(yīng)激損傷24，同時(shí)氧化應(yīng)激反應(yīng)可增強(qiáng)CA蛋白質(zhì)氧化，氧化的蛋白質(zhì)隨之被泛素化而降解。因此，我們推測腎功能水平可影響血清CA水平，而適度提升CA水平和活性可能有助于在一定程度上保護(hù)腎功能。綜上所述，老年T2DM患者血清CA水平與糖脂代謝穩(wěn)態(tài)之間存在密切相關(guān)性，并與腎功能和TBIL水平存在一定內(nèi)在聯(lián)系。ROC曲線分析提示血清CA水平與T2DM血管并發(fā)癥之間存在內(nèi)在關(guān)系，對T2DM合并血管并發(fā)癥具有良好的臨床診斷參考價(jià)值。提示血清CA可能是通過調(diào)控糖脂代謝穩(wěn)態(tài)等機(jī)制來發(fā)揮其重要的生物學(xué)效

48、應(yīng)，低水平的血清CA可能與TBIL共同參與了T2DM相關(guān)氧化應(yīng)激和血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程。適度提升或補(bǔ)充CA可能有助于預(yù)防或延緩老年T2DM相關(guān)血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。但目前上述作用機(jī)制尚不清楚，仍需大量臨床觀察和深入研究來闡明和揭示CA參與老年T2DM性血管病變的病理和分子機(jī)制，進(jìn)而為老年T2DM性血管并發(fā)癥的機(jī)制研究和臨床干預(yù)提供新的思路。參考文獻(xiàn)1 Baralla A, Sotgiu E, Deiana M, et al. Plasma Clusterin and Lipid Profile: A Link with Aging and Cardiovascular Diseases i

49、n a Population with a Consistent Number of CentenariansJ.PLoS ONE, 2015, 10: e0128029.2 McKetton L, Sobczyk O, Duffin J, et al. The aging brain and cerebrovascular reactivityJ.Neuroimage, 2018, 181: 132-141.3 Zhang XL, Fu HJ, Yang GR, et al. The effects of cardiovascular risk factor combined anti-pl

50、atelet therapy and the risk of cerebrovascular events in patients with T2DM in an urban community over 96-months follow-up: The Beijing communities diabetes study 19J.Diabetes Res. Clin. Pract., 2018, 144: 236-244.4 Fan D, Li L, Li Z, et al. Effect of hyperlipidemia on the incidence of cardio-cerebr

51、ovascular events in patients with type 2 diabetesJ.Lipids Health Dis, 2018, 17: 102.5 Rosenfeldt Z, Conklen K, Jones B, et al. Comparison of Nicardipine with Clevidipine in the Management of Hypertension in Acute Cerebrovascular DiseasesJ.J Stroke Cerebrovasc Dis, 2018, 27: 2067-2073.6 Cao R, Li J,

52、Zhang C, et al. Photoacoustic microscopy of obesity-induced cerebrovascular alterationsJ.Neuroimage, 2019, 188: 369-379.7 Tawakol A, Jaffer F. Imaging the Intersection of Oxidative Stress, Lipids, and Inflammation: Progress Toward Personalized Care of AtherosclerosisJ.J.Am.Coll.Cardiol., 2018, 71: 3

53、36-338.8 Vullo D, Nishimori I, Scozzafava A, et al. Carbonic anhydrase activators: Activation of the human cytosolic isozyme III and membrane-associated isoform IV with amino acids and aminesJ. Bioorg Med Chem Lett, 2008,18:4303-4307.9 Risnen S R, Lehenkari P, Tasanen M et al. Carbonic anhydrase III

54、 protects cells from hydrogen peroxide-induced apoptosisJ.FASEB J., 1999, 13: 513-22.10 Zimmerman U, Wang P, Zhang X et al. Anti-oxidative response of carbonic anhydrase III in skeletal muscleJ.IUBMB Life, 2004, 56: 343-7.11 Aikawa M, Libby P. The vulnerable atherosclerotic plaque: pathogenesis and therapeutic approachJ. Cardiovasc Pathol, 2004,13(3):125-138.12 Mallis RJ, Poland BW, Chatterjee TK, et al. Crystal structure of S-glutathiolated carbonic anhydrase IIIJ.FEBS Lett., 2000, 482: 237-41.13 Shang X, Chen S, Ren H, et al. Carbonic anhydrase III: The new hop