高效液相色譜法測定北蟲草酒中的北蟲草素

1、高效液相色譜法測定北蟲草酒中的北蟲草素摘要：采用高效液相色譜法建立了蟲草酒中蟲草素含量的測定方法，討論了色譜柱類型、流動相組成、柱溫以及檢測波長對分析結果的影響。研究說明：當色譜柱為ndasilt18柱1504.6i.d.,5；流動相為乙腈水(體積比為10:90)，流速為1l/in；檢測波長258n；柱溫40；進樣量5l時別離、檢測效果最正確，此法操作簡便，樣品只需用0.45微孔濾膜過濾處理，線性范圍寬、重現(xiàn)性好、精細度高，效果令人滿意，對于蟲草酒的消費和質量檢測都具有現(xiàn)實的指導意義。關鍵詞：高效液相色譜；北蟲草酒；北蟲草素；測定0引言北蟲草屬是一大類昆蟲病原真菌，其特定的菌感染特定的昆蟲就會

2、成為具有重要的藥用價值的冬蟲夏草。冬蟲夏草是特產(chǎn)于我國的真菌類名貴中藥，目前人工栽培已獲得成功。北蟲草酒是用冬蟲夏草為原料，以純糧白酒為浸劑配以適當添加劑經(jīng)深加工精制而成1，對氣管炎、風濕并關節(jié)炎、糖尿病療效明顯并具有防癌、抗腫瘤、補氣血、延年益壽等多種保健功能2。蟲草素是蟲草酒中重要的活性成分，為含氮配糖體的核酸衍生物，屬嘌呤類生物堿，是一種核苷類抗生素。蟲草素對45種枯草桿菌中的43種有抑制作用，也有抗病毒和抗腫瘤作用3。北蟲草素的含量是評價北蟲草酒質量的一個重要標，但未見北蟲草酒中北蟲草素的含量測定方法的報道。1材料與方法1.1儀器與試劑。日本島津l-20at高效液相色譜儀；spd-20

3、a紫外-可見分光光度檢測器；lslutin色譜工作站；乙腈為色譜純；乙酸、乙醇為分析純；水超純水；蟲草素標準品siga公司，純度大于99%。蟲草酒樣品由黑龍江省新醫(yī)圣生物科技提供。1.2樣品處理。取適量待測北蟲草酒樣品，用0.45微孔濾膜過濾后密封，備用。1.3色譜條件。色譜柱：ndasilt18柱1504.6i.d.，5；流動相：乙腈水體積比為10：90，流速1l/in；檢測波長258n；柱溫40；進樣量5l。2結果與分析2.1色譜條件的選擇。2.1.1流動相確實定。在實驗過程中先后選用了甲醇水、乙腈水并用乙酸調節(jié)不同的ph值作為流動相，實驗結果說明：在中性條件下的別離效果稍好于酸性條件下的

4、別離效果且有機溶劑消耗較少、操作簡便、有利于降低本錢；乙腈水作流動相時保存時間較短且別離效果好，總體上要優(yōu)于甲醇水做流動相，因此選用中性條件下的乙腈水作為流動相。通過改變流動相的配比可以發(fā)現(xiàn)，當乙腈的體積分數(shù)大于10%時，蟲草素出峰時間較短，各峰重疊，別離度較小，干擾目的組分的分析；當乙腈的體積分數(shù)小于10%時，盡管各組分保存時間的差異較大，別離徹底，但是隨著乙腈含量的降低，北蟲草素的出峰時間也隨之延長，浪費流動相和分析時間，峰形展寬嚴重，應選定乙腈水的體積比為10：90。2.1.2色譜柱、柱溫及檢測波長確實定。在運用高效液相色譜進展分析測試中常用的有8和18兩種分析色柱，實際操作過程中大多為

5、反相色譜，實驗說明：采用18柱對北蟲草酒中的北蟲草素進展分析時別離度要稍高于8柱且峰形也較好。實驗中選用室溫、35、40三個溫度梯度進展實驗，發(fā)現(xiàn)柱溫對于樣品的別離效果和保存時間影響均較小，但在柱溫為40時保存時間稍短且別離效果也較好，應選擇柱溫為40。北蟲草素在245260n紫外區(qū)有強吸收，在進展分析測試時吸收越強誤差越小，實驗中選定258n作為檢測波長，效果令人滿意。2.2標準曲線的繪制。用電子天平準確稱取北蟲草素8.0g用無水乙醇溶解，定容于5l容量瓶中，得到1.6g/l的北蟲草素標準乙醇溶液，按照逐級稀釋法又分別得到0.8、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125g/

6、l的蟲草標準待測乙醇溶液，按照1.3的色譜條件得到峰面積a，以峰面積a對濃度g/l做標準曲線，通過線性回歸得回歸方程：a=7042.28+45862.02r=0.9996。實驗說明：當北蟲草素濃度在0.01251.6g/l范圍時，峰面積和濃度具有良好的線性關系，其相關系數(shù)達0.9998，而北蟲草酒中蟲草素的含量一般在0.21.4g/l之間，因此上述回歸方程完全合適于北蟲草酒中北蟲草素含量的測定。2.3精細度試驗。取同一北蟲草酒樣品4份按1.2方法處理樣品，在1.3的色譜條件下測得北蟲草素的含量分別為0.521、0.519、0.520、0.518、0.522g/l，平均值0.520g/l，相對標

7、準偏向rsd為1.03%。2.4樣品分析。取4份不同的北蟲草酒樣品按照1.2處理，在1.3色譜條件下做3次平行測定。2.5加標回收試驗。3結論用高效色譜法測定北蟲草酒中蟲草素的含量，樣品預處理簡單結果準確，重現(xiàn)性好，精細度高，效果令人滿意；流動相為乙腈水體積比為10：90，流速為1l/in；檢測波長258n；柱溫40；進樣量5l時別離、檢測效果最正確。本文建立的北蟲草酒中北蟲草素含量測定方法對于北蟲草酒的消費和質量檢測都具有重要的現(xiàn)實指導意義。參考文獻：1孫東方，張含江.蟲草酒的研制j.釀酒，2022，311：56.2王常綺，姜平，王立義.蟲草酒對安康成人血流變與微循環(huán)的研究j.遼寧中醫(yī)，1996，232：85-86.3hiuf，hang